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小鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒

本分離液為Ficoll、羥(qian)乙基淀(dian)粉550與泛影酸葡jia胺(an)的混(hun)合(he)液。抗凝外周血(xue)可在(zai)分離液中分層(ceng)。離心時，在(zai)Ficoll、羥乙基(ji)淀粉的(de)作用(yong)下紅細(xi)(xi)胞(bao)(bao)與粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)聚(ju)集(ji)并迅速沉(chen)降；此時，淋巴(ba)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)及(ji)其他單(dan)個(ge)核細(xi)(xi)胞(bao)(bao)仍處于分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)上層，紅細(xi)(xi)胞(bao)(bao)污染可忽略不(bu)(bu)計。大部分(fen)(fen)血小板(ban)可在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)清(qing)洗低速離(li)(li)心(xin)過程中去除(chu)。 其他人及(ji)動物多種比(bi)重細(xi)(xi)胞(bao)(bao)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)，因不(bu)(bu)同(tong)種屬不(bu)(bu)同(tong)比(bi)重分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)離(li)(li)散(san)系數及(ji)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)帶(dai)電不(bu)(bu)同(tong)，用(yong)戶在制定(ding)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)時應提供所需分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)的(de)比(bi)重、動物種屬及(ji)被分(fen)(fen)離(li)(li)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)名稱(cheng)。

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注意事項：

A．本實驗要求，在(zai)正常(chang)大氣(qi)壓下(xia)，分(fen)離液(ye)(ye)、分(fen)離樣本以及分(fen)離環境溫(wen)度為(wei)20℃±2℃。分(fen)離液(ye)(ye)在(zai)低(di)溫(wen)時(shi)呈較高(gao)密(mi)度，在(zai)高(gao)溫(wen)時(shi)呈較低(di)密(mi)度。細胞(bao)(bao)分(fen)離液(ye)(ye)從冰箱取出(chu)后(hou)，不可立即使用，操作前(qian)可將樣本和分(fen)離液(ye)(ye)復溫(wen)18-22℃。為(wei)獲得實驗結果，建議在(zai)取血后(hou)2小時(shi)內進行實驗，血液(ye)(ye)提取后(hou)存放(fang)時(shi)間(jian)越長細胞(bao)(bao)活性越低(di)。

B．實驗過程中，如需稀(xi)釋血液或(huo)洗滌(di)細(xi)(xi)胞，不(bu)可(ke)使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培(pei)養(yang)液，其成(cheng)分會導致血細(xi)(xi)胞凝(ning)集，大(da)大(da)降(jiang)低(di)細(xi)(xi)胞得(de)率及純度。

C．you抗(kang)(kang)凝劑(ji)(ji)選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗(kang)(kang)凝劑(ji)(ji)也可(ke)使用，但會(hui)影響細胞活性。應(ying)注意(yi)在(zai)血液稀(xi)釋過(guo)程中去除抗(kang)(kang)凝劑(ji)(ji)體積。

D．實驗操(cao)作時，不可使(shi)用(yong)含(han)(han)粉手套、不可使(shi)用(yong)內毒素(su)含(han)(han)量過高的液體，手套中的粉末顆粒及高內毒素(su)會(hui)激活淋巴細胞從而降低細胞得(de)率(lv)及活性(xing)。

E．本(ben)實驗不(bu)可使用(yong)高(gao)聚合材質（如(ru)聚苯乙烯）的(de)(de)塑料制品，其帶有(you)的(de)(de)靜電作(zuo)用(yong)將導致(zhi)細胞貼壁影響分離效(xiao)果。推(tui)薦使用(yong)未經過堿處理的(de)(de)玻璃離心(xin)管。

F．吸(xi)取過(guo)多(duo)的淋(lin)巴細(xi)(xi)胞層(ceng)及(ji)分離液(ye)層(ceng)會(hui)導(dao)致分離液(ye)交(jiao)界處的粒細(xi)(xi)胞被吸(xi)出從而使混雜的粒細(xi)(xi)胞數(shu)量增加。吸(xi)取過(guo)多(duo)的淋(lin)巴細(xi)(xi)胞層(ceng)上層(ceng)溶液(ye)會(hui)導(dao)致血漿蛋(dan)白及(ji)血小板混雜。

G．如需進(jin)行B、T細(xi)胞(bao)計數，則需血液貯藏時(shi)間(jian)不得多于10小時(shi)，否則將導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)被激(ji)活，得率(lv)降低。

H．為去除所混雜的血小板，可在(zai)分離(li)液上層加(jia)上4-20%蔗糖(tang)梯(ti)度等滲溶液進行二次離(li)心。

I．細(xi)胞純度可在步驟10后使用瑞氏染色方法確定(ding)，細(xi)胞活性可用臺盼藍處(chu)理后觀(guan)察(cha)。

J．由于各品牌離(li)(li)(li)心機(ji)的性能不同，國內南北地區溫(wen)度環(huan)境和四季的差異，可能影響分(fen)離(li)(li)(li)效果，用戶可以調節離(li)(li)(li)心轉數和離(li)(li)(li)心時間，摸索jia的分(fen)離(li)(li)(li)條件（具體分(fen)離(li)(li)(li)條件各實驗室自(zi)定）。

參考文獻：
《Alteration of Adaptive Immunity in a Colorectal Peritoneal Carcinomatosis Model》 作者:Rongchen Shi,1,* Wei Xiang,1,* Xia Kang,1 Lili Zhang,2 Jinping Wang,3 Hongming Miao,1,? and Fengtian He 期刊:JOURNAL OF CANCER  影(ying)響因子:3.249 PMID:30719130

《Immunogenicity evaluation of MS2 phage-mediated chimeric nanoparticle displaying an immunodominant B cell epitope of foot-and-mouth disease virus》 作者:Guoqiang Wang, Yunchao Liu, Hua Feng, Yumei Chen, Suzhen Yang, Qiang Wei, Juan Wang, Dongmin Liu, Gaiping Zhang 期刊:PeerJ 影響因子:2.353 PMID:29844975