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維生素E檢測試劑盒說明書
分光光度法

注意(yi)：正式測定之前選(xuan)擇2-3個預期差異大的樣本做(zuo)預測定。

規(gui)格：50管/24樣(yang)

維生素E檢測試劑盒產品組成： 提取液：液體100mL×1瓶，4℃保(bao)存。

試(shi)劑(ji)一：液(ye)(ye)(ye)體(ti)5mL×1瓶，4℃避(bi)光(guang)保存。 試(shi)劑(ji)二：液(ye)(ye)(ye)體(ti)5mL×1瓶，4℃保存。 試(shi)劑(ji)三：液(ye)(ye)(ye)體(ti)5mL×1瓶，4℃保存。 試(shi)劑(ji)四：液(ye)(ye)(ye)體(ti)15mL×1瓶，4℃保存。

產(chan)品(pin)說明： 維生素E（VitaminE）是(shi)一種脂(zhi)溶(rong)性維生素，其水解產(chan)物為(wei)生育酚，是(shi)生物體中主要的(de)抗氧 化劑之一，能阻止(zhi)不(bu)飽(bao)和(he)脂(zhi)肪酸(suan)收到(dao)過(guo)氧化作用(yong)的(de)損傷，維持(chi)不(bu)飽(bao)和(he)脂(zhi)肪酸(suan)細胞膜的(de)完整性和(he)正常(chang) 功(gong)能，具有延緩衰老、預防溶(rong)血(xue)性貧血(xue)作用(yong)，在醫藥、化妝品(pin)、保健品(pin)、食品(pin)行業具有較高的(de)應用(yong) 價(jia)值。 VE還原Fe3+為(wei)Fe2+，Fe2+與1,10-菲羅啉產(chan)生有色絡合物，在530nm有特征吸收峰。 自備實(shi)驗用(yong)品(pin)及(ji)儀器 天平、研缽、離心(xin)機、可見分光光度計、1mL玻(bo)璃(li)比色皿、漩渦震蕩儀。

操作步驟：

一、樣本處理(li) 1. 組織：按(an)照(zhao)質量（g）：提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)體積(ji)(mL)為1：5~10的(de)比例（建議稱取(qu)(qu)(qu)約0.2g，加(jia)入(ru)1mL提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)） 加(jia)入(ru)提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)，充分勻(yun)漿(jiang)后用提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)定(ding)2mL，在漩渦混勻(yun)儀(yi)上(shang)(shang)震(zhen)蕩5min，于25℃， 5000g離心10min， 取(qu)(qu)(qu)上(shang)(shang)層測(ce)定(ding)。 2. 細(xi)胞(bao)：按(an)照(zhao)細(xi)胞(bao)數量（104個）：提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)體積(ji)（mL）為500~1000：1的(de)比例（建議1000萬細(xi)胞(bao)加(jia) 入(ru)2mL提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)），冰浴(yu)超(chao)聲波破碎(sui)細(xi)胞(bao)（功(gong)率300w，超(chao)聲3秒，間隔(ge)7秒，總(zong)時間3min）；在漩 渦混勻(yun)儀(yi)上(shang)(shang)震(zhen)蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取(qu)(qu)(qu)上(shang)(shang)層測(ce)定(ding)。 3. 血(xue)清：取(qu)(qu)(qu)0.2mL，加(jia)1.9mL提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)，漩渦儀(yi)混勻(yun)上(shang)(shang)震(zhen)蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取(qu)(qu)(qu)上(shang)(shang)層 測(ce)定(ding)。

二(er)(er)、測(ce)定操(cao)作 對(dui)照管 測(ce)定管 樣品（μL） 500 500 試劑一（μL） 100 100 試劑二(er)(er)（μL） 100 試劑三(san)（μL） 100 充(chong)分(fen)混勻，25℃反應 5min 試劑四（μL） 300 300 充(chong)分(fen)混勻，于 1mL 玻(bo)璃比色皿，無水乙醇調零(ling)，測(ce)定 530nm 處吸光值(zhi)，記 為 A 對(dui)照管和(he) A 測(ce)定管，△A=A 測(ce)定管-A 對(dui)照管。

三、計算公式
標(biao)準曲線(xian)：y=0.022x+0.0065， R2=0.9978 1. 按(an)照蛋白含(han)(han)量(liang)(liang)計(ji)(ji)(ji)算(suan) VE含(han)(han)量(liang)(liang)（μg/mgprot）=（△A-0.0065）÷0.022×V反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（V樣(yang)(yang)(yang)×Cpr） =181.8×（△A-0.0065）÷Cpr 2. 按(an)照樣(yang)(yang)(yang)本質(zhi)量(liang)(liang)計(ji)(ji)(ji)算(suan) VE含(han)(han)量(liang)(liang)（μg/g）=（△A-0.0065）÷0.022×V反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（V樣(yang)(yang)(yang)×W÷V樣(yang)(yang)(yang)總(zong)(zong)） =181.8×（△A-0.0065）÷W 3. 按(an)照細(xi)胞數(shu)量(liang)(liang)計(ji)(ji)(ji)算(suan) VE含(han)(han)量(liang)(liang)（μg/104 cell）=（△A-0.0065）÷0.022×V反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（V樣(yang)(yang)(yang)×細(xi)胞數(shu)量(liang)(liang)÷V樣(yang)(yang)(yang)總(zong)(zong)） =181.8×（△A-0.0065）÷ 細(xi)胞數(shu)量(liang)(liang) 4. 按(an)照液體(ti)(ti)(ti)(ti)體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)計(ji)(ji)(ji)算(suan) VE含(han)(han)量(liang)(liang)（μg/mL）=（△A-0.0065）÷0.022×V反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷V樣(yang)(yang)(yang)×20 =1818×（△A-0.0065） V反(fan)(fan)總(zong)(zong)：反(fan)(fan)應(ying)總(zong)(zong)體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)，1mL；：V樣(yang)(yang)(yang)：加入樣(yang)(yang)(yang)本體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)，0.5mL；V樣(yang)(yang)(yang)總(zong)(zong)：加入提取液體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)，2mL； Cpr：蛋白濃(nong)度(du)，mg/mL；W：樣(yang)(yang)(yang)本質(zhi)量(liang)(liang)，g 注(zhu)意事(shi)項： 1. 若(ruo)反(fan)(fan)應(ying)體(ti)(ti)(ti)(ti)系產生沉淀，需要(yao)將樣(yang)(yang)(yang)品進(jin)行(xing)適當的(de)稀釋，并在(zai)計(ji)(ji)(ji)算(suan)公式中乘以稀釋倍(bei)數(shu)。 2. 低檢(jian)出限為 29.5μg/g。