色8久久人人97超碰香蕉987_亚洲乱码日产精品M_18禁美女裸体网站无遮挡_日韩精品无码免费专区午夜不卡

人白細胞介素5ELISA 試劑盒
產品編號：SEKH-0012
適用于人血清、血漿或細胞培養上清液等樣本

Human IL-5 ELISA KIT

Human IL-5 ELISA KIT

背景介紹：
      人(ren)IL-5由(you)抗原(yuan)活(huo)化(hua)的 CD4+T 細胞(bao)產生(sheng)(sheng)(sheng)，在小鼠(shu)則由(you)Th2亞群細胞(bao)產生(sheng)(sheng)(sheng)。天然(ran)IL-5的分子量為40~50KD， 是(shi)(shi)由(you)二(er)硫(liu)鍵(jian)連接的二(er)聚體(ti)糖蛋(dan)白，但是(shi)(shi)單體(ti) IL-5 也有(you) IL-5 活(huo)性。人(ren)的 IL-5 由(you) 134 氨基(ji)(ji)(ji)酸殘(can)基(ji)(ji)(ji)組成，含 22 氨基(ji)(ji)(ji)酸殘(can)基(ji)(ji)(ji)信號(hao)肽(tai)，2 個糖基(ji)(ji)(ji)化(hua)點，人(ren)和(he)(he)小鼠(shu) IL-5 基(ji)(ji)(ji)因(yin)分別(bie)定(ding)位于第 5 號(hao)和(he)(he)第 11 號(hao)染色(se)體(ti)，人(ren)和(he)(he)鼠(shu) IL-5 在 氨基(ji)(ji)(ji)酸水平(ping)上(shang)有(you) 70％的同源性，人(ren)和(he)(he)鼠(shu) IL-5Rα鏈有(you) 79％的同源性。IL-5 主要有(you)促進(jin) B 細胞(bao)分化(hua)與(yu)生(sheng)(sheng)(sheng)長;誘 導(dao)嗜(shi)酸性粒細胞(bao)分化(hua);促進(jin) IgA 合成;誘導(dao)細胞(bao)毒 T 細胞(bao)(CTL)的生(sheng)(sheng)(sheng)成以及(ji)刺激嗜(shi)酸性粒細胞(bao)增(zeng)殖(zhi)、分化(hua)及(ji)活(huo) 化(hua)等(deng)作用。

檢測原理：
     Solarbio  ELISA 試劑(ji)盒采(cai)用基于雙抗體(ti)(ti)夾心(xin)法的(de)(de)(de)(de)酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附檢測技(ji)術。將抗人(ren)(ren) IL-5 單克 隆抗體(ti)(ti)包(bao)被(bei)在(zai)酶(mei)標(biao)板(ban)(ban)上(shang)；分別加(jia)入梯(ti)度(du)稀(xi)釋(shi)的(de)(de)(de)(de)標(biao)準品(pin)和(he)預稀(xi)釋(shi)的(de)(de)(de)(de)樣本(ben)(ben)，標(biao)準品(pin)和(he)樣本(ben)(ben)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren) IL-5 會(hui)(hui)與(yu)酶(mei)標(biao) 板(ban)(ban)上(shang)的(de)(de)(de)(de)包(bao)被(bei)抗體(ti)(ti)充(chong)分結合；洗板(ban)(ban)后(hou)加(jia)入生物(wu)(wu)素(su)(su)(su)化(hua)抗人(ren)(ren) IL-5 抗體(ti)(ti)，該(gai)抗體(ti)(ti)會(hui)(hui)與(yu)板(ban)(ban)子上(shang)包(bao)被(bei)抗體(ti)(ti)捕獲的(de)(de)(de)(de)標(biao)準品(pin) 和(he)樣本(ben)(ben)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren) IL-5 發生特異(yi)性(xing)結合；洗板(ban)(ban)后(hou)加(jia)入辣(la)根過氧化(hua)物(wu)(wu)酶(mei)（HRP）標(biao)記的(de)(de)(de)(de)鏈霉親和(he)素(su)(su)(su)，生物(wu)(wu)素(su)(su)(su)與(yu)鏈 霉親和(he)素(su)(su)(su)會(hui)(hui)發生高強度(du)的(de)(de)(de)(de)非(fei)共(gong)價(jia)結合；洗板(ban)(ban)后(hou)加(jia)入顯色(se)劑(ji)底物(wu)(wu) TMB，若(ruo)反(fan)應(ying)(ying)孔中(zhong)(zhong)樣品(pin)存(cun)在(zai)不(bu)同濃(nong)(nong)度(du)的(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren) IL-5， 則 HRP 會(hui)(hui)使無色(se) TMB 變成(cheng)(cheng)不(bu)同深(shen)淺（正(zheng)相關）的(de)(de)(de)(de)藍色(se)物(wu)(wu)質，加(jia)入終(zhong)止液(ye)后(hou)反(fan)應(ying)(ying)孔會(hui)(hui)變成(cheng)(cheng)黃色(se)；后(hou)，在(zai) λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定(ding)反(fan)應(ying)(ying)孔樣品(pin)吸(xi)光度(du)（OD），樣本(ben)(ben)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren) IL-5 濃(nong)(nong)度(du)與(yu) OD 成(cheng)(cheng)正(zheng)比，通過 繪(hui)制標(biao)準曲線和(he)四參(can)數擬合軟件便(bian)可(ke)計算出(chu)樣本(ben)(ben)中(zhong)(zhong)人(ren)(ren) IL-5 的(de)(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)。

原理圖：

注意事項：
1. 試劑盒應在有效期內使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持*。
5. 為避免交叉污染，請在(zai)試(shi)驗中使用 1 次(ci)性試(shi)管，槍頭，封板膜（※）及潔(jie)凈塑(su)料(liao)容器(qi)。

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為(wei)保證結果準(zhun)(zhun)確，每次檢(jian)測均需做標準(zhun)(zhun)曲線。

安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試
劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物
實驗室(shi)安全防(fang)護有關管理規定執行。

自備實驗器材（不提供，可代購）
1． 酶標儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋(shi)用(yong)聚(ju)丙烯試管

樣本收集及儲存：
1. 細胞培養上清：
將細胞培養基移無菌離心管，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于
-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據標本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min ，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結果；如果樣本中的靶標物檢測濃度高
于標準品(pin)的值，請將樣品(pin)做適當倍數稀釋后(hou)檢測，建(jian)議(yi)正式實驗(yan)前做預實驗(yan)以確定稀釋倍數。

試劑準備：
1. 試劑回溫：先在實驗前 30 min 將試劑盒，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現結晶，請放入
37℃溫浴直到結晶全部溶解。
2. 配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應用液，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)梯度(du)稀(xi)(xi)釋(shi)：加入標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)/樣本(ben)稀(xi)(xi)釋(shi)液（SR1）1ml凍干標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)中(zhong)，靜置15分(fen)鐘(zhong)待其*溶(rong)解后輕 輕混勻(濃(nong)度(du)為2000pg/ml)，然后在其余七(qi)管中(zhong)各加入500?1?78?1?76L標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)/樣本(ben)稀(xi)(xi)釋(shi)液（SR1），按照以下濃(nong)度(du) 進行2倍(bei)稀(xi)(xi)釋(shi)：300（標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)液700ul+溶(rong)解好的(de)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)原(yuan)液300ul）、150、75、37.5、18.75、9.375、 4.68、0 pg/ml進行稀(xi)(xi)釋(shi)。300pg/ml為標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)曲(qu)線(xian)(xian)點濃(nong)度(du)，標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)/樣本(ben)稀(xi)(xi)釋(shi)液（SR1）作為標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)曲(qu)線(xian)(xian)的(de) 零(ling)點（0pg/ml）。復溶(rong)過的(de)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)原(yuan)液（2000pg/ml）未用完的(de)應廢棄或根據需(xu)要(yao)按照一次用量分(fen)裝(zhuang)，并 將其貯存在-20～-80℃冰(bing)箱，具體如下圖。

4. 生物素化抗(kang)(kang)體工作液(ye)：預先計算(suan)好試驗所(suo)需用量，用檢測(ce)稀釋液(ye)（SR2）將100倍抗(kang)(kang)體濃(nong)縮液(ye)稀釋成(cheng)1倍

應(ying)(ying)用(yong)工作液(ye)（稀釋前充分混勻），請在30分鐘內加(jia)入(ru)到(dao)反應(ying)(ying)孔中。

5. 酶(mei)(mei)結合物工作液(ye)：按(an)每次試(shi)驗所需用量配制，用酶(mei)(mei)結合物稀(xi)釋液(ye)（SR3）將100倍濃縮(suo)酶(mei)(mei)結合物稀(xi)釋成1 倍應(ying)用工作液(ye)（稀(xi)釋前離心），請在30分鐘內使用。

6. 洗滌方(fang)法(fa)： 

自(zi)動洗板(ban)(ban)：甩盡酶標板(ban)(ban)孔中液(ye)體，在(zai)厚迭吸(xi)水紙上拍(pai)干，注入(ru)洗滌液(ye)為 300ul/孔,注 與吸(xi)出間隔為 30 秒，洗板(ban)(ban) 5 次。 

手工洗(xi)板：甩盡酶標(biao)板孔中(zhong)液體，在厚(hou)迭(die)吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)干(gan)(gan)，用洗(xi)瓶(ping)加入洗(xi)滌液 300ul/孔，靜止 30 秒后甩 凈酶標(biao)板孔中(zhong)液體，在厚(hou)迭(die)的吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)干(gan)(gan)，洗(xi)板 5 次。

結果判斷：

1.用酶標儀(yi) 450 nm 波(bo)長(chang)測定(ding) OD 值。選擇(ze)雙波(bo)長(chang)檢測，參考波(bo)長(chang)為(wei) 630 nm。如不能進行(xing)雙波(bo)長(chang)檢測，請 用 450 nm 的 OD 測定(ding)值減(jian)去 630 nm 的 OD 測定(ding)值。

2.計算標(biao)準品、樣品的(de)平均 OD 值(zhi)：每個標(biao)準品和標(biao)本(ben)的(de) OD 值(zhi)應減去零孔的(de) OD 值(zhi)

3.以標(biao)準品濃(nong)度(du)為(wei)橫坐標(biao)，吸光度(du)OD值(zhi)為(wei)縱坐標(biao)，用軟件繪制標(biao)準曲(qu)線，樣品中IL-5含量可通過對(dui)應OD 值(zhi)由標(biao)準曲(qu)線換算出相應的濃(nong)度(du)。

4.若標(biao)本(ben) OD 值高于標(biao)準曲線上(shang)限，應做適當稀釋后重(zhong)新檢測，計算濃(nong)度時再乘以稀釋倍數。

1. 數據及標準曲線

本圖僅供參考，應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算人 IL-5 的樣本含量

 

2. 靈敏度：
低可檢測人 IL-5 濃度達 2pg/ml，
20 個零標準(zhun)(zhun)品濃(nong)(nong)度 OD 的平(ping)均值(zhi)加上兩個標準(zhun)(zhun)差(cha)，計算相應的可檢測濃(nong)(nong)度。

3. 特異性：
不與人 IL-3、IL-5 Rα、IL-5 Rβ反應，小鼠 IL-5 等反應。

4. 重復性：
板內，板間變異系數<10%。

5. 回收率：
在選取(qu)的健康人血漿、細胞培養上(shang)清中加入(ru) 3 個不同(tong)濃(nong)度水平的人 IL-5，計算回收率。

6. 線性稀釋：

分別在選取的 4 份健(jian)康(kang)人血漿(jiang)和細胞培(pei)養上清中加(jia)入高濃度人 IL-5，在標準曲線(xian)(xian)動(dong)力學范(fan)圍內進行稀 釋(shi)，評估線(xian)(xian)性。