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產品名稱:P8630 大鼠外(wai)周血淋(lin)巴細胞分離液試劑盒

產品型號:P8630

產品報價:

產品特點:P8630 大鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒 索萊寶
規格:200ml
保存:常溫

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P8630P8630 大鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒的詳細資料:

P8630 大鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒
規格:200ml
保存:常溫

索萊寶 大鼠淋巴細胞分離液 P8630

Lymphocyte Separation Medium (Rat) 

P8630 大鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒
P8630-200 200ml           
說明:適用于從血液中分離所需細胞。
密度:1.0830±0.0001g/ml
儲存條件: 15-25℃避光保存,啟封
后置4℃保存。

 

本(ben)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)液(ye)為Ficoll、羥(qian)乙基淀粉(fen)550與(yu)泛影酸葡jia胺(an)的(de)混合液(ye)。抗凝外(wai)周血(xue)(xue)可(ke)在(zai)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)液(ye)中(zhong)分(fen)(fen)層(ceng)。離(li)(li)(li)(li)(li)心時(shi),在(zai)Ficoll、羥(qian)乙基淀粉(fen)的(de)作用下紅(hong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)與(yu)粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)聚集并(bing)迅速沉(chen)降;此時(shi),淋(lin)巴細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)及(ji)其(qi)他單(dan)個核細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)仍處于分(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)液(ye)上層(ceng),紅(hong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)污染可(ke)忽略不(bu)計。大(da)部分(fen)(fen)血(xue)(xue)小板(ban)可(ke)在(zai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)清洗低速離(li)(li)(li)(li)(li)心過程(cheng)中(zhong)去除。 其(qi)他人及(ji)動物多種比重細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)液(ye),因不(bu)同(tong)種屬(shu)(shu)不(bu)同(tong)比重分(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)液(ye)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)離(li)(li)(li)(li)(li)散系數及(ji)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)帶電(dian)不(bu)同(tong),用戶在(zai)制定分(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)液(ye)時(shi)應提供(gong)所需分(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)液(ye)的(de)比重、動物種屬(shu)(shu)及(ji)被分(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)(li)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)名(ming)稱。

 

適用(yong)(yong)于從動物抗凝血液(ye)中分離(li)淋巴(ba)細胞,無菌條(tiao)件下所(suo)分離(li)的(de)淋巴(ba)細胞可用(yong)(yong)于細胞培養(yang)等。本品(pin)僅供科研使用(yong)(yong)。

密度:1.0830±0.0001g/ml

 

本品易(yi)感(gan)染(ran)細菌,需無(wu)(wu)菌條(tiao)件操(cao)作。無(wu)(wu)菌條(tiao)件下操(cao)作,啟封后置常溫(wen)保(bao)存。如 4℃保(bao)存,本分(fen)離液易(yi)出現白色結(jie)晶,影響(xiang)分(fen)離效果。

 

產品內容:

 

各種動(dong)物外(wai)周血(xue)淋巴細(xi)胞分離液 200mL

全血及組(zu)織稀釋(shi)液 200mL

細胞洗滌液 200mL

 

 

保存:18℃-25℃保(bao)(bao)(bao)存,有效(xiao)期兩年。本(ben)品易感染細菌(jun),需無(wu)菌(jun)條件(jian)下操作。無(wu)菌(jun)條件(jian)下操作,啟封后常溫保(bao)(bao)(bao)存。如(ru)4℃保(bao)(bao)(bao)存,本(ben)分離液易出現白色結晶(jing),影響分離效(xiao)果。

操作步驟:

 

1. 取(qu)新鮮抗(kang)凝全(quan)血(EDTA、枸櫞(yuan)酸鈉或(huo)肝素抗(kang)凝均可)或(huo)者(zhe)去纖維蛋白(bai)血液,用等體積的全(quan)血及組織稀釋(shi)液或(huo)者(zhe)PBS稀釋(shi)全(quan)血。

2. 在離(li)心(xin)管(guan)中加入適(shi)量分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)(ye)(當稀(xi)釋后血(xue)液(ye)(ye)(ye)體(ti)積(ji)小(xiao)于3mL時,加入3mL分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)(ye);大(da)于等(deng)于3mL,加入等(deng)體(ti)積(ji)分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)(ye)。但二(er)者的總(zong)體(ti)積(ji)不能超過離(li)心(xin)管(guan)的三分(fen)(fen)(fen)(fen)之(zhi)(zhi)二(er),否則會影(ying)響分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)效果(guo)),將(jiang)稀(xi)釋后的血(xue)液(ye)(ye)(ye)平鋪到分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)(ye)液(ye)(ye)(ye)面上(shang)方,注意保(bao)持(chi)兩液(ye)(ye)(ye)面界(jie)面清(qing)晰。(可以使用(yong)巴氏德吸管(guan)吸取血(xue)液(ye)(ye)(ye),然后將(jiang)血(xue)液(ye)(ye)(ye)小(xiao)心(xin)的平鋪于分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)(ye)上(shang),因(yin)為(wei)兩者的密度差異,將(jiang)形成明(ming)顯的分(fen)(fen)(fen)(fen)層(ceng)界(jie)面。如果(guo)樣品較多加樣時間較長,在離(li)心(xin)之(zhi)(zhi)前出(chu)現紅細胞成團下沉屬正常現象。)

3. 室溫,水(shui)平轉子500~1000g,離心(xin)20~30min(血(xue)液的(de)體積越(yue)大(da)所需(xu)的(de)離心(xin)力越(yue)大(da),離心(xin)時間越(yue)長,分離條件需(xu)摸索,離心(xin)轉速大(da)不超過1200g)。

4. 離心后將出現明顯的(de)(de)分層(ceng)(ceng)(ceng):上層(ceng)(ceng)(ceng)是(shi)稀釋的(de)(de)血漿層(ceng)(ceng)(ceng),中間是(shi)透明的(de)(de)分離液層(ceng)(ceng)(ceng),血漿與分離液之間的(de)(de)白膜(mo)層(ceng)(ceng)(ceng)即為淋(lin)巴細胞(bao)層(ceng)(ceng)(ceng),離心管底部(bu)是(shi)紅(hong)細胞(bao)與粒細胞(bao)。

5. 小心的(de)吸取白(bai)膜(mo)(mo)層(ceng)細胞到(dao)15mL潔凈的(de)離(li)心管中, 10mL PBS或細胞洗滌(di)液(ye)洗滌(di)白(bai)膜(mo)(mo)層(ceng)細胞。250g,離(li)心10min。

6. 棄(qi)上清(qing),5mL的PBS或細胞清(qing)洗液(ye)重懸細胞,250g,離心10min。

7. 重復步驟6

8. 棄上(shang)清(qing),細胞重(zhong)懸備用。

注意事項:

A. 開封(feng)前顛倒混(hun)勻,本分離液(ye)為無菌(jun)產(chan)品,為延長分離液(ye)保存時間(jian),請(qing)在無菌(jun)條件下啟(qi)封(feng),避免微生物污染(ran)。。

B. 分離(li)液使用(yong)時應始終保持室(shi)溫(wen)(18℃~25℃),如室(shi)內溫(wen)度較(jiao)(jiao)低(di),可將(jiang)分離(li)液預(yu)熱。4℃或者是(shi)溫(wen)度較(jiao)(jiao)低(di)的條件(jian)下離(li)心,可能(neng)會導致白膜層中紅細胞(bao)污染加重。 

C. 血液樣本為新鮮抗凝血(采(cai)血2 h以內),為保持淋巴(ba)細胞的活(huo)性,應避免冷凍和冷藏。

D. 稀(xi)釋血液(ye)或洗滌細胞,不可使用(yong)含Ca、Mg離子的緩(huan)沖液(ye)及培養液(ye),其成(cheng)分會(hui)導致血細胞凝集,大(da)大(da)降低細胞得率及純度。

E. 部(bu)分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用(yong),可能(neng)會導致細(xi)胞掛壁,影響分離(li)效(xiao)果。

F. 血液樣本的(de)粘稠度或者(zhe)是溫度差異,可能(neng)會影響分離效(xiao)果,可以調節離心(xin)轉數和離心(xin)時間(jian),

G. 吸(xi)取(qu)過(guo)多的淋巴細(xi)(xi)胞(bao)層及分離液(ye)層會(hui)導(dao)致分離液(ye)交界處的粒細(xi)(xi)胞(bao)被吸(xi)出從而(er)使(shi)混雜的粒細(xi)(xi)胞(bao)數量增加;吸(xi)取(qu)過(guo)多的血漿層可(ke)能會(hui)導(dao)致淋巴細(xi)(xi)胞(bao)中血漿蛋白及血小板(ban)污染。

H. 如果(guo)要進一步對分離的細胞進行培養,那在收集血液和(he)分離過(guo)程中(zhong),注(zhu)意無(wu)菌操作,避免微生物污染。

I. 不同動物(wu)(wu)血液(ye)在(zai)(zai)不同比重分離(li)液(ye)中的(de)細胞(bao)離(li)散系數(shu)及細胞(bao)帶電不同,用(yong)戶在(zai)(zai)制(zhi)定分離(li)液(ye)時應提供所需分離(li)液(ye)的(de)比重、動物(wu)(wu)種屬及被分離(li)細胞(bao)的(de)名稱。

 

 

 

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