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Solarbio 大鼠外周血淋巴細胞分離液

本分(fen)離(li)(li)液為Ficoll、羥乙基(ji)(ji)淀粉(fen)550與泛影酸葡jia胺的混合(he)液。抗凝外(wai)周(zhou)血(xue)可(ke)在分(fen)離(li)(li)液中分(fen)層(ceng)。離(li)(li)心時，在Ficoll、羥乙基(ji)(ji)淀粉(fen)的作用下紅(hong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)與粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)聚集(ji)并迅速(su)(su)沉(chen)降；此時，淋巴細(xi)(xi)胞(bao)(bao)及其他(ta)(ta)單(dan)個核細(xi)(xi)胞(bao)(bao)仍(reng)處于分(fen)離(li)(li)液上層(ceng)，紅(hong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)污染可(ke)忽略不(bu)計。大部分(fen)血(xue)小板可(ke)在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)清洗(xi)低速(su)(su)離(li)(li)心過程中去除(chu)。 其他(ta)(ta)人及動物(wu)(wu)多種(zhong)比重細(xi)(xi)胞(bao)(bao)分(fen)離(li)(li)液，因不(bu)同(tong)(tong)種(zhong)屬(shu)不(bu)同(tong)(tong)比重分(fen)離(li)(li)液的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)離(li)(li)散系數(shu)及細(xi)(xi)胞(bao)(bao)帶電不(bu)同(tong)(tong)，用戶在制(zhi)定分(fen)離(li)(li)液時應提供所需(xu)分(fen)離(li)(li)液的比重、動物(wu)(wu)種(zhong)屬(shu)及被分(fen)離(li)(li)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的名稱(cheng)。

適用(yong)于從動物抗(kang)凝血(xue)液中分離淋巴細(xi)(xi)(xi)胞，無(wu)菌條(tiao)件下所分離的(de)淋巴細(xi)(xi)(xi)胞可用(yong)于細(xi)(xi)(xi)胞培養(yang)等。本品僅供科(ke)研使用(yong)。

密度：1.0830±0.0001g/ml

本(ben)品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟(qi)封后(hou)置常溫保存。如 4℃保存，本(ben)分離液易出現(xian)白色結晶，影響分離效果。

產品內容：

各種動(dong)物外周血淋巴細(xi)胞(bao)分離液 200mL

全血及組織(zhi)稀(xi)釋液 200mL

細胞洗滌液 200mL

保存：18℃-25℃保存，有(you)效(xiao)期(qi)兩年。本品(pin)易感(gan)染細菌，需無菌條(tiao)件(jian)下操作。無菌條(tiao)件(jian)下操作，啟封后常溫保存。如4℃保存，本分離液易出現白色結(jie)晶，影響分離效(xiao)果。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝(ning)全血（EDTA、枸櫞酸鈉或(huo)肝(gan)素抗凝(ning)均可(ke)）或(huo)者(zhe)去纖(xian)維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或(huo)者(zhe)PBS稀釋全血。

2. 在(zai)離(li)心(xin)(xin)(xin)管(guan)中加(jia)(jia)入適量分離(li)液(ye)(ye)（當稀釋后(hou)血液(ye)(ye)體(ti)積小(xiao)于(yu)3mL時(shi)，加(jia)(jia)入3mL分離(li)液(ye)(ye)；大于(yu)等于(yu)3mL，加(jia)(jia)入等體(ti)積分離(li)液(ye)(ye)。但二(er)者的總體(ti)積不能超過離(li)心(xin)(xin)(xin)管(guan)的三(san)分之二(er)，否(fou)則(ze)會影響分離(li)效果(guo)），將(jiang)(jiang)稀釋后(hou)的血液(ye)(ye)平鋪(pu)到分離(li)液(ye)(ye)液(ye)(ye)面(mian)上方(fang)，注意保持(chi)兩液(ye)(ye)面(mian)界面(mian)清(qing)晰。（可以(yi)使用巴氏德吸(xi)(xi)管(guan)吸(xi)(xi)取血液(ye)(ye)，然后(hou)將(jiang)(jiang)血液(ye)(ye)小(xiao)心(xin)(xin)(xin)的平鋪(pu)于(yu)分離(li)液(ye)(ye)上，因為兩者的密(mi)度差異，將(jiang)(jiang)形成(cheng)(cheng)明顯的分層界面(mian)。如果(guo)樣品較多加(jia)(jia)樣時(shi)間較長，在(zai)離(li)心(xin)(xin)(xin)之前出現(xian)紅細胞(bao)成(cheng)(cheng)團下沉(chen)屬正(zheng)常現(xian)象。）

3. 室(shi)溫，水平轉(zhuan)子500~1000g，離(li)(li)心20~30min（血液的(de)體積越大所需的(de)離(li)(li)心力越大，離(li)(li)心時間越長，的(de)分離(li)(li)條(tiao)件需摸索，離(li)(li)心轉(zhuan)速大不超過1200g）。

4. 離心后將出現(xian)明顯的分層(ceng)：上(shang)層(ceng)是稀釋(shi)的血漿層(ceng)，中間(jian)是透明的分離液層(ceng)，血漿與分離液之間(jian)的白膜層(ceng)即(ji)為(wei)淋巴(ba)細(xi)胞(bao)層(ceng)，離心管底部是紅(hong)細(xi)胞(bao)與粒細(xi)胞(bao)。

5. 小心(xin)的吸取白(bai)膜(mo)層(ceng)細胞(bao)到15mL潔凈的離心(xin)管中(zhong)， 10mL PBS或細胞(bao)洗滌液洗滌白(bai)膜(mo)層(ceng)細胞(bao)。250g，離心(xin)10min。

6. 棄(qi)上(shang)清，5mL的(de)PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心(xin)10min。

7. 重(zhong)復步(bu)驟(zou)6

8. 棄上(shang)清，細(xi)胞重懸(xuan)備用。

注意事項：

A. 開封(feng)(feng)前顛(dian)倒混勻(yun)，本(ben)分離液(ye)為無菌產品，為延長分離液(ye)保存(cun)時間(jian)，請在無菌條件下啟(qi)封(feng)(feng)，避免微(wei)生物污染。。

B. 分(fen)離液使用時應始終保持(chi)室(shi)溫(wen)（18℃~25℃），如室(shi)內溫(wen)度較(jiao)低，可將分(fen)離液預熱。4℃或者是溫(wen)度較(jiao)低的條件下離心(xin)，可能會(hui)導致白膜層中紅細胞污(wu)染加重。 

C. 血(xue)液樣本為新鮮抗凝(ning)血(xue)（采血(xue)2 h以(yi)內），為保持淋巴細胞的活性，應避(bi)免冷(leng)凍和冷(leng)藏(zang)。

D. 稀(xi)釋血液或洗(xi)滌細胞(bao)，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及(ji)培養(yang)液，其成(cheng)分會導致血細胞(bao)凝集，大大降低細胞(bao)得率(lv)及(ji)純度。

E. 部分塑料(liao)制(zhi)品（如聚(ju)苯乙烯）因其(qi)帶有的靜電作用，可(ke)能(neng)會導致細(xi)胞掛壁，影響分離(li)效果(guo)。

F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差(cha)異，可能會影響分離(li)效果，可以調節離(li)心(xin)(xin)轉數(shu)和離(li)心(xin)(xin)時間(jian)，摸(mo)索

G. 吸(xi)取過多(duo)的(de)(de)淋巴細(xi)(xi)胞(bao)層及分(fen)離液(ye)層會導(dao)致(zhi)分(fen)離液(ye)交界處的(de)(de)粒細(xi)(xi)胞(bao)被吸(xi)出從而使混雜的(de)(de)粒細(xi)(xi)胞(bao)數量增加；吸(xi)取過多(duo)的(de)(de)血漿層可能會導(dao)致(zhi)淋巴細(xi)(xi)胞(bao)中血漿蛋白及血小板(ban)污染。

H. 如果要(yao)進一步對分離的(de)細胞進行培(pei)養，那在收集血液和(he)分離過程中(zhong)，注意無菌操(cao)作，避(bi)免微生(sheng)物污(wu)染。

I. 不同動物血液在不同比(bi)(bi)重(zhong)分離液中的(de)細胞離散系數(shu)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提供所需分離液的(de)比(bi)(bi)重(zhong)、動物種屬及被分離細胞的(de)名稱。

Solarbio 大鼠外周血淋巴細胞分離液