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人外周血淋巴細胞分離液

外周血中(zhong)單(dan)個(ge)核細(xi)胞(bao)(bao)(bao)包括淋巴細(xi)胞(bao)(bao)(bao)和(he)(he)單(dan)核細(xi)胞(bao)(bao)(bao)等細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，其體積、形態和(he)(he)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)與(yu)其他細(xi)胞(bao)(bao)(bao)不同，紅細(xi)胞(bao)(bao)(bao)和(he)(he)粒細(xi)胞(bao)(bao)(bao)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)較大(da)，為(wei)(wei)1.090 g/ml 左右(you)，而淋巴細(xi)胞(bao)(bao)(bao)和(he)(he)單(dan)核細(xi)胞(bao)(bao)(bao)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)為(wei)(wei)1.075～1.090 g/ml，血小板為(wei)(wei)1.030～1.035 g/ml。為(wei)(wei)此，將(jiang)葡聚糖(右(you)旋糖酐)和(he)(he)泛影(ying)酸(suan)葡甲胺按(an)一(yi)(yi)定比例混合，調整比重、pH 值和(he)(he)滲透壓，經過(guo)澄清(qing)及過(guo)濾(lv)除菌后制(zhi)成一(yi)(yi)種密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)在1.077g/ml 并且近于(yu)等滲的溶(rong)液(ye)（分(fen)層液(ye)），經過(guo)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)梯度(du)(du)(du)(du)離(li)心(xin)使一(yi)(yi)定密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)的細(xi)胞(bao)(bao)(bao)按(an)相(xiang)應(ying)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)梯度(du)(du)(du)(du)分(fen)布，從而將(jiang)各種血細(xi)胞(bao)(bao)(bao)加以分(fen)離(li)。

人外周血淋巴細胞分離液

本品(pin)為帶有乳光(guang)或微乳光(guang)的注射水(shui)溶液，主(zhu)要(yao)組成(cheng)成(cheng)份是葡(pu)聚糖（右旋糖酐）與泛影酸葡(pu)甲(jia)胺。適用(yong)(yong)于(yu)從人抗凝血液中分(fen)離單個核細胞（主(zhu)要(yao)為淋巴(ba)細胞），無菌條件下所分(fen)離的細胞可(ke)用(yong)(yong)于(yu)免(mian)疫學檢測。

分離方(fang)法說明及圖例：

取新鮮抗凝(ning)血1ml，與生(sheng)理鹽水(shui)1:1 混勻后，小心(xin)加于(yu)2ml細胞(bao)(bao)分(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)之液(ye)(ye)面上；以(yi)(yi)400g（約1500轉(zhuan)/分(fen)(fen)，半徑15cm水(shui)平轉(zhuan)子）離(li)心(xin)20分(fen)(fen)鐘，此時離(li)心(xin)管中(zhong)由上下細胞(bao)(bao)分(fen)(fen)四層(ceng)。*層(ceng)：為血漿層(ceng)。第(di)二(er)層(ceng)：為環(huan)狀乳白(bai)色淋巴細胞(bao)(bao)層(ceng)。第(di)三層(ceng)：為透明(ming)分(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)層(ceng)。第(di)四層(ceng)：為紅細胞(bao)(bao)層(ceng)。收集第(di)二(er)層(ceng)細胞(bao)(bao)放入含生(sheng)理鹽水(shui)4-5ml的試管中(zhong)，充分(fen)(fen)混勻后，以(yi)(yi)400g（約1500轉(zhuan)/分(fen)(fen)）離(li)心(xin)20分(fen)(fen)鐘。沉淀經2次洗滌后即(ji)得所需(xu)淋巴細胞(bao)(bao)。

注： 提取率約為80%。

注意事項：

A．本分離液(ye)要求血液(ye)為新鮮(xian)抗(kang)凝(ning)血，避免(mian)冷凍和冷藏；在收(shou)集(ji)血液(ye)和分離過程中，應注意無菌(jun)操作，避免(mian)微生物(wu)污染。

B．本實(shi)驗要求，在(zai)正常大氣壓下，分(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)、分(fen)(fen)離(li)樣本以及分(fen)(fen)離(li)環境溫(wen)(wen)度為20℃±2℃。分(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)在(zai)低(di)溫(wen)(wen)時(shi)呈(cheng)較(jiao)高(gao)密度，在(zai)高(gao)溫(wen)(wen)時(shi)呈(cheng)較(jiao)低(di)密度。細(xi)胞分(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)從冰箱取出后，不可(ke)立(li)即使用(yong)，操作前可(ke)將樣本和分(fen)(fen)離(li)液(ye)(ye)置于20℃水浴中復溫(wen)(wen)20分(fen)(fen)鐘以保證分(fen)(fen)離(li)溫(wen)(wen)度。

C．由于各(ge)品牌(pai)離(li)心(xin)機的(de)性能(neng)不同，國內南北地區溫度環(huan)境和四季的(de)差異，可(ke)能(neng)影響分(fen)離(li)效果，用戶可(ke)以調節離(li)心(xin)轉數(shu)和離(li)心(xin)時間，摸索佳的(de)分(fen)離(li)條件(jian)（具體分(fen)離(li)條件(jian)各(ge)實驗室自定）。

D．好(hao)使(shi)用無靜電反應的離心管，推薦使(shi)用未經過堿(jian)處理的玻璃離心管。

E．優抗凝劑選(xuan)擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液(ye)稀釋過程中應去除抗凝劑體(ti)積。

產品性能指標：

密度(du) 1.077±0.001g/ml

pH                              7.0-7.5

滲透壓                         280-340mOsmol/kg

內毒素                         ≤0.5EU/ml

無(wu)菌                           直接(jie)接(jie)種(zhong)培(pei)養14天后培(pei)養基(ji)澄(cheng)清

澄明度及不溶(rong)性(xing)顆粒物           每50ml 溶(rong)液中含10μm 以上的不溶(rong)性(xing)微粒20 粒以下(xia)，

含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下

貯藏及保存期限：

本分離(li)液是敏光(guang)型的，應在(zai)18℃-25℃避光(guang)保存(cun)(cun)，有效期兩年。啟封后置4℃保存(cun)(cun)，若保證無(wu)微生物(wu)污染， 4℃可(ke)長(chang)期保存(cun)(cun)。保存(cun)(cun)溫(wen)度較低(di)（10℃以下）時(shi)本分離(li)液易出(chu)現(xian)白色結晶(jing)，影響分離(li)效果。