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檸檬酸（CA）含量測定試劑盒 微量法

測定意義：CA是生物體內常見的有機酸，是重要的食品風味物質。此外，CA是三羧酸循環*步反應的產物。

測定原理：酸性條件下，檸檬酸還原Cr6+生成Cr3+，在545nm處有特征吸收峰；通過測定545nm吸光值的增加，即可計算出樣品中檸檬酸含量。

需要的儀器，耗材:低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

 檸檬酸（CA）含量測定試劑盒 微量法

操作(zuo)步驟(zou)：一(yi)(yi)(yi)(yi)、樣品中(zhong)檸(ning)(ning)檬酸(suan)(suan)提(ti)取(qu)： 1. 液(ye)(ye)(ye)(ye)體(ti)樣品中(zhong)檸(ning)(ning)檬酸(suan)(suan)提(ti)取(qu)：取(qu) 0.1mL 液(ye)(ye)(ye)(ye)體(ti)加(jia)(jia)(jia)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi) 0.9mL，充(chong)分(fen)混勻，11000g， 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清液(ye)(ye)(ye)(ye)，待(dai)(dai)(dai)測(ce)(ce)。 2. 組(zu)織(zhi)(zhi)中(zhong)檸(ning)(ning)檬酸(suan)(suan)提(ti)取(qu)：按照組(zu)織(zhi)(zhi)質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)(ye)(ye)(ye)體(ti)積(ji)(ji)(mL)為(wei)(wei) 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)(zhi)，加(jia)(jia)(jia)入(ru) 1mL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi)）進行冰浴勻漿(jiang)。11000g，4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)(zhi)冰上(shang)待(dai)(dai)(dai)測(ce)(ce)。 3. 線(xian)粒體(ti)中(zhong)檸(ning)(ning)檬酸(suan)(suan)提(ti)取(qu)：按照組(zu)織(zhi)(zhi)質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)(ye)(ye)(ye)體(ti)積(ji)(ji)(mL)為(wei)(wei) 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)(zhi)，加(jia)(jia)(jia)入(ru) 1mL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi)）進行冰浴勻漿(jiang)，600g/min，4℃離(li)心(xin) 5min；取(qu)上(shang)清另(ling)一(yi)(yi)(yi)(yi) EP 管(guan)(guan)中(zhong)，11000g， 4℃離(li)心(xin) 10min，棄上(shang)清（此上(shang)清液(ye)(ye)(ye)(ye)可用于細胞質(zhi) CA 含量測(ce)(ce)定(ding)）；向沉淀中(zhong)加(jia)(jia)(jia)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)二 200μl，以(yi)及試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)三 2μl，充(chong)分(fen)懸浮(fu)溶解，11000g，4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清液(ye)(ye)(ye)(ye)，待(dai)(dai)(dai)測(ce)(ce)。 4. 細菌、真(zhen)菌中(zhong)：按照細胞數量（10 4個）：試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi)體(ti)積(ji)(ji)（mL）為(wei)(wei) 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細胞加(jia)(jia)(jia)入(ru) 1mL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi)），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間(jian)隔 7 秒，總(zong)時間(jian) 3min）； 11000g，4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)(zhi)冰上(shang)待(dai)(dai)(dai)測(ce)(ce)。二、測(ce)(ce)定(ding)操作(zuo)： 1. 分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀(yi)預熱 30 min，調節波長(chang)到 545 nm，蒸餾水調零。 2. 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi)置(zhi)(zhi)于 30℃水浴中(zhong)預熱 30min。 3. 空白(bai)管(guan)(guan)：取(qu) 0.5 mL EP 管(guan)(guan)，依(yi)次加(jia)(jia)(jia)入(ru) 20μL 蒸餾水，140μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi)，20μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)四(si)(si)，20μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)五，混勻后室溫(wen)靜置(zhi)(zhi) 30min，于 545nm 測(ce)(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)，記為(wei)(wei) A 空白(bai)管(guan)(guan)。 4. 標準管(guan)(guan)：取(qu) 0.5 mL EP 管(guan)(guan)，依(yi)次加(jia)(jia)(jia)入(ru) 20μL 標準液(ye)(ye)(ye)(ye)，140μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi)，20μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)四(si)(si)，20μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)五，混勻后室溫(wen)靜置(zhi)(zhi) 30min，于 545nm 測(ce)(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)，記為(wei)(wei) A 標準管(guan)(guan)。 5. 測(ce)(ce)定(ding)管(guan)(guan)：取(qu) 0.5 mL EP 管(guan)(guan)，依(yi)次加(jia)(jia)(jia)入(ru) 20μL 上(shang)清液(ye)(ye)(ye)(ye)，140μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)(yi)(yi)，20μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)四(si)(si)，20μL 試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)五，充(chong)分(fen)混勻后室溫(wen)靜置(zhi)(zhi) 30min，于 545nm 測(ce)(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)，記為(wei)(wei) A 測(ce)(ce)定(ding)管(guan)(guan)。

 相關文獻:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281