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        可溶性淀粉合成酶(SSS）測定試劑盒 微量法

測定意(yi)義：SSS（EC 2.4.1.21）通常以游(you)離(li)態存(cun)在于質體基質中，催化淀粉鏈延長，主要負責支(zhi)鏈淀粉的合成。

測定原(yuan)(yuan)理：SSS催化(hua)ADPG與淀(dian)粉引(yin)物(葡(pu)聚糖(tang))反(fan)應，將葡(pu)萄糖(tang)分子(zi)轉(zhuan)移到淀(dian)粉引(yin)物上，同時生(sheng)(sheng)成ADP，在反(fan)應體系中添加(jia)的丙酮酸激酶(mei)、己糖(tang)激酶(mei)和6-磷酸葡(pu)萄糖(tang)脫氫酶(mei)依次催化(hua)NADP+還原(yuan)(yuan)為(wei)NADPH，NADPH生(sheng)(sheng)成量與前一步反(fan)應中ADP生(sheng)(sheng)成量呈(cheng)正比，340nm下測定NADPH增加(jia)量即(ji)可計算SSS活性。

需(xu)要的儀器(qi)，耗(hao)材:紫外分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶(mei)標儀、水(shui)浴(yu)鍋、臺式(shi)離(li)心機、可調(diao)式(shi)移液(ye)器(qi)、微量石英比色(se)皿/96孔(kong)板、研缽(bo)、冰和蒸餾(liu)水(shui)。

可溶性淀粉合成酶(SSS）測定試劑盒 微量法

試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)：液(ye)(ye)(ye)體(ti)(ti)×1 支(zhi)(zhi)，-20℃保存(cun)；臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)(qian)加(jia)入 250μL 蒸餾(liu)水，充(chong)分溶解備用(yong)(yong)，用(yong)(yong)不(bu)完的(de)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji) 4℃ 保存(cun)；試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)二(er)：粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)×1 支(zhi)(zhi)，-20℃保存(cun)；臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)(qian)加(jia)入 250μL 蒸餾(liu)水，充(chong)分溶解備用(yong)(yong)，用(yong)(yong)不(bu)完的(de)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji) 4℃ 保存(cun)；反(fan)應(ying)液(ye)(ye)(ye)Ⅰ的(de)配(pei)制：臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)(qian)取液(ye)(ye)(ye)體(ti)(ti)一(yi)(yi)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)二(er)和(he)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)三(san)各一(yi)(yi)支(zhi)(zhi)，依次(ci)把(ba)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)(yi)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)二(er)和(he)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)三(san)轉移到(dao)液(ye)(ye)(ye)體(ti)(ti)一(yi)(yi)中(zhong)混合(he)(he)溶解。反(fan)應(ying)液(ye)(ye)(ye)Ⅱ的(de)配(pei)制：臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)(qian)取液(ye)(ye)(ye)體(ti)(ti)二(er)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)四(si)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)五、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)六和(he)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)七各一(yi)(yi)支(zhi)(zhi)，依次(ci)把(ba)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)四(si)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)五、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)六和(he)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)七轉移到(dao)液(ye)(ye)(ye)體(ti)(ti)二(er)中(zhong)混合(he)(he)溶解。反(fan)應(ying)液(ye)(ye)(ye)Ⅲ的(de)配(pei)制：臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)(qian)取液(ye)(ye)(ye)體(ti)(ti)三(san)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)八(ba)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)九和(he)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)十(shi)各一(yi)(yi)支(zhi)(zhi)，依次(ci)把(ba)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)八(ba)、粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)九和(he)粉(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)十(shi)轉移到(dao)液(ye)(ye)(ye)體(ti)(ti)三(san)中(zhong)混合(he)(he)溶解。

一、粗酶液(ye)(ye)制備按(an)照(zhao)組織質量（g）：提取(qu)液(ye)(ye)體積(mL)為 1：5~10 的比(bi)例（建議稱取(qu)約 0.1g 組織，加(jia)入 1mL 提取(qu)液(ye)(ye)），進行冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿。10000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。二(er)、測(ce)定步(bu)驟(zou) 1、分(fen)光(guang)(guang)光(guang)(guang)度(du)計(ji)預熱 30min 以上(shang)，調節波長 340nm，蒸餾水調零(ling)。 2、在(zai) EP 管中按(an)順(shun)序加(jia)入下列試劑(ji)試劑(ji)名稱（μL） 測(ce)定管樣本 150 反(fan)(fan)應(ying)液(ye)(ye)Ⅰ 270 混勻(yun)，30℃保溫 20 min，置(zhi)沸水浴(yu)中 1 min（蓋緊，防止水分(fen)散失），冰(bing)浴(yu)冷(leng)卻反(fan)(fan)應(ying)液(ye)(ye)Ⅱ 150 混勻(yun)，30℃保溫 30 min，置(zhi)沸水浴(yu)中 1 min（蓋緊，防止水分(fen)散失），冰(bing)浴(yu)冷(leng)卻，10000g 25℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清液(ye)(ye)上(shang)清液(ye)(ye) 450 反(fan)(fan)應(ying)液(ye)(ye)Ⅲ 300 試劑(ji)一 10 試劑(ji)二(er) 10 混勻(yun)后立即(ji)在(zai) 340 nm 波長下記(ji)錄初始吸光(guang)(guang)度(du) A1 和 2min 后的吸光(guang)(guang)度(du) A2，計(ji)算ΔA=A2-A1。注意：反(fan)(fan)應(ying)液(ye)(ye)Ⅰ如有沉淀，加(jia)入之前要使之充(chong)分(fen)溶解(jie)混勻(yun)。