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          淀粉分支酶（SBE）測定試劑盒 微量法

測(ce)定(ding)意(yi)義：SBE（EC 2.4.1.18）主(zhu)要存在(zai)于植物中，是參與支鏈淀(dian)粉合成的關鍵酶，測(ce)定(ding)SBE活性在(zai)淀(dian)粉生物合成、農作物品種選育(yu)和(he)品質遺傳(chuan)改良研究(jiu)中具(ju)有重要意(yi)義

測定(ding)(ding)原理：淀粉和碘結合后(hou)在660nm有特(te)征光吸收，SBE可(ke)切斷支鏈(lian)淀粉側支，從而(er)降低了淀粉-碘復合物在660nm吸收值，一定(ding)(ding)時間內吸光度(du)下(xia)降的百分率可(ke)以反映SBE活性。

需(xu)要的儀器(qi)(qi)，耗材:可見(jian)分(fen)光光度計/酶標(biao)儀、水(shui)浴鍋、臺式離(li)心(xin)機、可調(diao)式移液器(qi)(qi)、微量石英比(bi)色(se)皿/96孔板、研(yan)缽、冰、蒸餾水(shui)。

 淀粉分支酶（SBE）測定試劑盒 微量法

一(yi)、粗(cu)酶(mei)(mei)液(ye)提(ti)取(qu)(qu)按照組織質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)(qu)液(ye)體積(ji)(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(cheng)取(qu)(qu)約 0.1g 組織，加(jia)入 1mL 提(ti)取(qu)(qu)液(ye)），進行冰浴(yu)(yu)勻(yun)漿。15000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)(qu)上(shang)清，置(zhi)(zhi)冰上(shang)待測。二、測定(ding)步驟試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)名稱(cheng)（μL） 對照管(guan)(guan) 測定(ding)管(guan)(guan) 95℃水(shui)浴(yu)(yu) 1min 后滅活的粗(cu)酶(mei)(mei)液(ye) 250 粗(cu)酶(mei)(mei)液(ye) 250 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)一(yi) 320 320 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)二 30 30 混(hun)勻(yun)，37℃準確保溫(wen) 20 min，95℃水(shui)浴(yu)(yu) 1 min（蓋緊(jin)防止水(shui)分(fen)散失(shi)），冷卻試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)三 500 500 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)四 40 40 混(hun)勻(yun)，室溫(wen)靜置(zhi)(zhi) 10min，用蒸餾水(shui)調零，660nm 處(chu)讀(du)取(qu)(qu)各管(guan)(guan)吸光(guang)值。，注(zhu)意(yi)： 1、 可(ke)以在不同(tong)對照管(guan)(guan)中(zhong)加(jia)入不同(tong)樣品的粗(cu)酶(mei)(mei)液(ye)，然(ran)后集中(zhong)進行 1min95℃水(shui)浴(yu)(yu)處(chu)理。 2、 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)一(yi)如有(you)沉(chen)淀，加(jia)入之前(qian)要使之充(chong)分(fen)溶解混(hun)勻(yun)。

1、按照(zhao)(zhao)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)濃度計算(suan)單(dan)位的(de)(de)定(ding)義：以波長(chang) 660nm 的(de)(de)吸光度下降(jiang)百(bai)分率(lv)表示，每(mei) mg 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)在(zai)(zai)反應(ying)(ying)體系中每(mei)降(jiang)低(di) 1％碘(dian)藍值(zhi)為一(yi)個酶活性(xing)單(dan)位。 SBE 活性(xing)(U/mg prot)=( A 對照(zhao)(zhao)管(guan)-A 測定(ding)管(guan))/A 對照(zhao)(zhao)管(guan)÷Cpr ×100 2、按照(zhao)(zhao)樣本(ben)鮮重(zhong)(zhong)計算(suan)單(dan)位的(de)(de)定(ding)義：以波長(chang) 660nm 的(de)(de)吸光度下降(jiang)百(bai)分率(lv)表示，每(mei) g 組織在(zai)(zai)反應(ying)(ying)體系中每(mei)降(jiang)低(di) 1％碘(dian)藍值(zhi)為一(yi)個酶活性(xing)單(dan)位。 SBE 活性(xing)(U/g 鮮重(zhong)(zhong))=(A 對照(zhao)(zhao)管(guan)-A 測定(ding)管(guan))/A 對照(zhao)(zhao)管(guan)÷(W÷V 樣總)×100 V 樣總：提取液總體積，1mL；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；T：反應(ying)(ying)時間(jian)，5min。

相關文獻：

《ARSENATE INDUCED CHLOROSIS 1/ TRANSLOCON AT THE OUTER ENVOLOPE MEMBRANE OF CHLOROPLASTS 132 Protects Chloroplasts from Arsenic Toxicity 》 作者:Peitong Wang, Xi Chen, Xuan Xu, Chenni Lu, Wei Zhang, Fang-Jie Zhao 期刊:Plant physiology 影響因子:6.305 PMID: