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β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）檢測試劑盒

操作步驟：

一、粗酶液提(ti)取(qu)(qu)：稱取(qu)(qu)約 0.2g 組織(zhi)，剪(jian)碎，放入預冷的研(yan)缽(bo)中，加(jia)入 1.0 mL 提(ti)取(qu)(qu)液進行冰浴勻漿，12000g，4℃，離心(xin) 10min，取(qu)(qu)上(shang)清，置冰上(shang)待測(ce)。

二、測定步驟

1、分光(guang)光(guang)度計或(huo)酶標儀預熱(re) 30min 以上，調(diao)節波長 540nm，蒸餾水(shui)調(diao)零。

2、樣本測(ce)定(ding)，（在 1.5mL EP 管(guan)中(zhong)依次加(jia)入下列試劑(ji)）：試劑(ji)名稱（μL） 測(ce)定(ding)管(guan) 對照管(guan) 標準管(guan)樣本或標準液 35 35 35 雙蒸水 35 35 試劑(ji)一 35 充分混勻，放入 37℃水浴(yu) 60 min 試劑(ji)二 230 230 230取(qu) 200μL 微量石英比色(se)皿(min)或 96 孔板中(zhong)， 540nm 處記錄各管(guan)吸(xi)光值 A，如果吸(xi)光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測(ce)定(ding)，ΔA=A 測(ce)定(ding)-A 對照。

β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）檢測試劑盒

β-1,3-GA 活性(xing)計算：根據標準(zhun)管吸光(guang)度（x）和濃度（y，mg/ml）建立標準(zhun)曲(qu)線，將ΔA 帶入(ru)(ru)公式中(zhong)計算出樣(yang)(yang)品中(zhong)產(chan)生(sheng)的(de)還原糖(tang)的(de)含(han)量 y 值（mg/ml）（1） 按蛋白(bai)濃度計算單(dan)(dan)位(wei)(wei)的(de)定義(yi)：每(mei) mg 組(zu)織(zhi)蛋白(bai)每(mei)小(xiao)時產(chan)生(sheng) 1mg 還原糖(tang)定義(yi)為(wei)(wei)一(yi)個酶(mei)活性(xing)單(dan)(dan)位(wei)(wei)。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr （2） 按樣(yang)(yang)本(ben)(ben)鮮(xian)(xian)重(zhong)計算單(dan)(dan)位(wei)(wei)的(de)定義(yi)：每(mei) g 組(zu)織(zhi)每(mei)小(xiao)時產(chan)生(sheng) 1mg 還原糖(tang)定義(yi)為(wei)(wei)一(yi)個酶(mei)活性(xing)單(dan)(dan)位(wei)(wei)。 β-1,3-GA(U /g 鮮(xian)(xian)重(zhong))=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W (3) 按細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞密度計算單(dan)(dan)位(wei)(wei)的(de)定義(yi)：每(mei) 1 萬個細(xi)胞或(huo)細(xi)菌(jun)每(mei)小(xiao)時產(chan)生(sheng) 1mg 還原糖(tang)定義(yi)為(wei)(wei)一(yi)個酶(mei)活性(xing)單(dan)(dan)位(wei)(wei)。 β-1,3-GA(U /g 鮮(xian)(xian)重(zhong))=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y V1：加(jia)入(ru)(ru)反(fan)應體系中(zhong)樣(yang)(yang)本(ben)(ben)體積，0.035mL；V2：加(jia)入(ru)(ru)提取液體積，1mL；Cpr：樣(yang)(yang)本(ben)(ben)蛋白(bai)質濃度， mg/mL；W：樣(yang)(yang)本(ben)(ben)鮮(xian)(xian)重(zhong)，g。

提取液(ye)：液(ye)體 100mL×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)；試劑(ji)一：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)；臨(lin)(lin)用前(qian)每(mei)瓶(ping)加入(ru) 3.5mL 雙蒸(zheng)水(shui)，充分溶(rong)解待用；試劑(ji)二：液(ye)體 30mL×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)；標(biao)準(zhun)品：粉劑(ji)×1 支(zhi)，4℃保存(cun)，含 10mg 無(wu)水(shui)葡萄糖（干燥失(shi)重<0.2%），臨(lin)(lin)用前(qian)加入(ru) 1ml 蒸(zheng)餾水(shui)溶(rong)解，配制成 10mg/ml 葡萄糖溶(rong)液(ye)備(bei)用，4℃可(ke)保存(cun) 1 周(zhou)，或者用飽和苯甲酸溶(rong)液(ye)溶(rong)解，可(ke)保存(cun)更長時間。標(biao)準(zhun)品準(zhun)備(bei)：將標(biao)準(zhun)品用蒸(zheng)餾水(shui)稀釋 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

相關文獻：

《The antifungal activity of a thaumatin-like protein from oyster Crassostrea gigas》 作(zuo)者:X Niu,Q Xu,W Wang,Z Yu,Z Liu,C Qu,Y Liu,C Gong,L Wang,L Song 期刊:Invertebrate Survival Journal 影(ying)響因子:0.967 PMID: