產(chan)品名(ming)稱：谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒

產(chan)品英文名：Glutathione Peroxidase (GPX) Assay Kit

產品(pin)貨號：BC1190              產地：北京市通州區馬駒橋(qiao)聯東U谷(gu)8三樓

產(chan)品規格(ge)：50管/48樣             產(chan)品商(shang)標：solarbio
保存(cun)與運輸(shu)：4℃保存(cun)或-20℃保存(cun)；            參考價格：1600
庫(ku)存狀態：現貨                          
關(guan)鍵(jian)字：谷胱(guang)甘(gan)肽過氧(yang)化(hua)物酶(mei)試劑盒(he)|活性檢測(ce)試劑盒|GPX含量檢測|試劑(ji)盒(he)|
簡要介紹：
氧化(hua)型(xing)谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)（GSSG）是谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)（GSH）的(de)(de)(de)氧化(hua)形式，又(you)稱為二(er)(er)硫代谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)，是兩分子(zi)的(de)(de)(de)谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)氧化(hua)而成。GSSG會被谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)還原(yuan)酶還原(yuan)成GSH，因(yin)此機(ji)體中(zhong)大多數是以還原(yuan)型(xing)形式存在。測定細胞內GSH和(he)GSSG含量(liang)(liang)以及GSH/GSSG比(bi)值，能夠(gou)很好地反映細胞所處的(de)(de)(de)氧化(hua)還原(yuan)狀態(tai)。本試劑盒利(li)用谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)能和(he)5，5’-二(er)(er)硫代-雙-（2-硝基(ji)(ji)ben甲(jia)酸(suan)）（5，5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應(ying)產(chan)生2-硝基(ji)(ji)-5-巰(qiu)基(ji)(ji)ben甲(jia)酸(suan)，2-硝基(ji)(ji)-5-巰(qiu)基(ji)(ji)ben甲(jia)酸(suan)在波(bo)長412nm處具有大光吸收的(de)(de)(de)特點，通過2-乙烯(xi)吡dian抑制樣品中(zhong)原(yuan)有的(de)(de)(de)還原(yuan)型(xing)谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)，然后(hou)利(li)用谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)還原(yuan)酶將GSSG還原(yuan)為GSH，借此測定氧化(hua)型(xing)谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)的(de)(de)(de)含量(liang)(liang)。
 

產品詳(xiang)細描述(shu)
產品(pin)內容：
試劑一：液體×1瓶(ping)，4℃保存。
試(shi)劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。
試(shi)劑三：液體×1支，-20℃保存。
 試劑(ji)四：液體×1瓶，4℃保(bao)存。
    工作(zuo)液配制：臨(lin)用(yong)前，在試劑(ji)二(er)中加入試劑(ji)一(yi)40 mL，充分震蕩(dang)溶解(jie)后加(jia)入(ru)全部試劑三(san)，混勻(yun)。（當天用(yong)完）
產品說明：
谷胱甘肽過氧化物酶(mei)（glutathione peroxidase, GSH-Px）是谷胱甘肽(tai)氧化還原(yuan)循環中催化還原(yuan)型谷胱甘肽(tai)（GSH）氧(yang)化的主要酶之(zhi)一。GSH-Px不僅能(neng)夠特異地催(cui)化還原型谷胱甘肽與ROS反應(ying)，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，從而保護生物(wu)膜免(mian)受ROS的損害，維持細(xi)胞的正常功能；而且具有保護肝(gan)臟、提高機體(ti)免疫力、拮抗(kang)有害金屬離(li)子對機體(ti)的傷害和(he)增加(jia)機體(ti)抗(kang)輻(fu)射等能力。
GSH-Px催化(hua)H₂O₂氧化GSH，產生GSSG；谷胱甘(gan)肽還原(yuan)酶（GR）催化NADPH還原(yuan)GSSG，再生GSH，同(tong)時NADPH氧化生成NADP⁺；NADPH在(zai)340 nm有特征吸(xi)收

谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒

自備儀器和用品：
紫(zi)外-可(ke)見(jian)分光(guang)光(guang)度計、低溫(wen)離心機、水浴鍋、可(ke)調節(jie)移液器、1mL石英比(bi)色皿(min)和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：

1. 組織(zhi)(zhi)：按(an)照(zhao)組織(zhi)(zhi)質量(liang)（g）：試劑(ji)一體積(mL)為1：5~10 的比例(li)（建議稱取0.1g 組織，加入1mL 試(shi)劑一）進行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清(qing)置冰上待測(如上清不清澈(che)，再離心3min)。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量10⁴個：試劑一(yi)體積（ml）500~1000:1 的比例，建議500 萬細胞加入(ru)1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超(chao)聲3 s，間隔7s，總時間3min）然后10000rpm，4℃，離(li)心10min，取上(shang)清置冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)(如上清(qing)不清(qing)澈，再離心3min)。
3. 血清等(deng)液體：直接測定。

二、GSH-Px測定操作：
1. 分光(guang)光(guang)度計預熱30 min，調節波長到340 nm，蒸餾水調(diao)零。
2. 混合(he)試劑在25℃或者37℃（哺乳動物）水浴(yu)中(zhong)預熱30min以上。
3. 空(kong)白(bai)管(guan)：依次在1mL石英比色皿中加入(ru)100μL蒸餾(liu)水、800μL預熱的工作(zuo)液，100μL試劑(ji)四(si)，迅速(su)混(hun)勻后(hou)于340nm處測定(ding)第10 s處的吸光(guang)值，37℃水浴3min后迅速拿(na)出測量吸光(guang)度，分(fen)別記為A空1和(he)A空2。計算△A空(kong)=A空1-A空(kong)2。（空白(bai)管只(zhi)需做1~2個）
4. 測(ce)定(ding)管：依(yi)次(ci)在1mL石英比色(se)皿(min)中(zhong)加入100μL上清(qing)液、800μL預熱的(de)工作液，100μL試劑四，迅速混勻后于340nm處測定第10 s處的吸光(guang)值，37℃水浴3min后迅速拿(na)出測(ce)量(liang)吸(xi)光度，分別記(ji)為A測1和A測(ce)2。計算△A測=A測1-A測2。
三(san)、GSH-Px活(huo)性計算(suan)：
（1）按(an)蛋白(bai)濃度計算
GSH-Px活力單位定(ding)義：一(yi)定(ding)溫度下(xia)，每mg蛋白在反應(ying)體系中每分鐘(zhong)催化1nmol NADPH氧化(hua)定義(yi)為一個(ge)酶活力單位。
GSH-Px (U/mg prot) =[ (△A測定(ding)管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×10⁶] ÷[Cpr×V樣(yang)]÷T
             =536×(△A測(ce)定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算(suan)
GSH-Px活力單位定義：一(yi)定溫度中，每(mei)g樣(yang)品在反應體系中每(mei)分鐘(zhong)催(cui)化1μmol NADPH氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/g 鮮重)=[ (△A測定管-△A空白管(guan))÷(ε×d)×V反總×10⁶] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T
            =536×(△A測定管-△A空白管)÷W
(3) 按(an)細胞數量計算
GSH-Px 活力(li)單(dan)位定義(yi)：一定溫度中(zhong)，每10⁴個(ge)細胞每分鐘催化1μmol NADPH 氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/10⁴ cell)=[(△A 測定(ding)管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷（細胞數量×V 樣÷V樣總）÷T
=536×(△A 測定管(guan)-△A 空(kong)白管)÷細(xi)胞數量
(4) 按(an)液體體積計算
GSH-Px 活力單位定(ding)義：一定(ding)溫(wen)度中，每(mei)毫升液體每(mei)分(fen)鐘催化1μmol NADPH 氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/ml)=[(△A 測(ce)定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反(fan)總×109]÷V 樣÷T
=536×(△A 測定管-△A 空白管)
△A空白管=A空1-A空2；△A測定管=A測1-A測2。
ε：NADPH摩(mo)爾消光(guang)系數(shu)6.22×10³L/mol/cm；d：比色(se)皿光徑，1 cm；V反(fan)總(zong)：反(fan)應體系總(zong)體積，0.001 L；10⁶：1 mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液(ye)蛋白濃度（mg/mL）；V樣：加入(ru)反(fan)應體系中上(shang)清(qing)液體積(ji)，100μL =0.1 mL；T：反應時間(jian)，3 min；W ：樣品質量，g。
注意事項：
（1）樣品處理等過程(cheng)均需要(yao)在(zai)冰上進行，且須在(zai)當日測定酶活(huo)力(li)；
（2）混(hun)合試劑和底物液須臨(lin)用前(qian)配(pei)制(zhi)，配(pei)完后置于冰上；
（3）測定過程操作須迅速；
（4）細(xi)胞中(zhong)GSH-Px活性測定(ding)時，細胞數目須在300萬-500萬之(zhi)間，細胞中GSH-Px的提取時可加試(shi)劑一后研磨(mo)或(huo)超聲波處理(li)，不能用細(xi)胞裂解液處理(li)細(xi)胞。

相關文獻：
《Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice》 作者:Yang Yang,Li Jing,Wei Cong,He Ying,Cao Yixin ,Zhang Yongmin,Sun Wenjia,Qiao Boling,He Jiao 期刊:Phytomedicine 影響因子:4.18 PMID:31005808
《Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L.) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model》 作者:Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,Jinsong Wu,Jianquan Kan 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID:
《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影響因子:3.547 PMID:28189720
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子(zi):5.657 PMID:31022448