產品名稱:：  谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒

產品英文(wen)名: Glutamic Acid Dehydrogenase（GDH）Assay Kit

產品貨號：BC1460             產(chan)地：北京市(shi)通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/48樣         產品(pin)商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或(huo)-20℃保存；            參考價格：650
庫存狀態(tai)：現貨                       ;   
關(guan)鍵字:  谷氨酸脫氫(qing)酶檢測試劑盒|GDH檢測試劑盒|谷(gu)氨酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶|試劑(ji)盒(he)

簡要介(jie)紹：
GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分(fen)布于植物中，和(he)谷氨(an)酸(suan)(suan)合(he)成(cheng)酶（GOGAT）共同參與谷氨(an)酸(suan)(suan)的合(he)成(cheng)，在氨(an)同化和(he)轉化成(cheng)有機氮(dan)化合(he)物的代謝中起重要(yao)作用。
GDH催化NH₄⁺、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD⁺，引(yin)起340nm吸光(guang)度下(xia)降(jiang)。通過測定340nm吸光(guang)度的下(xia)降(jiang)速率(lv)，計算GDH活性。

產品詳細描述
產品(pin)內容：
提取液(ye)：液(ye)體60mL×1瓶，4℃保存(cun)；
試(shi)劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二(er)：粉劑×1瓶，-20℃保存。
產品說(shuo)明：
GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨(an)酸(suan)(suan)合成酶（GOGAT）共同參與谷氨(an)酸(suan)(suan)的(de)合成，在氨(an)同化和轉化成有機氮(dan)化合物的(de)代謝中起(qi)重(zhong)要作用。
GDH催(cui)化NH₄⁺、α-酮(tong)戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD⁺，引起340nm吸(xi)光度(du)下(xia)降。通過測定(ding)340nm吸(xi)光度(du)的下(xia)降速率，計算GDH活性。
需自備的儀(yi)器和用品:
     紫外分光光度計、臺式離(li)心機、水浴(yu)鍋、移液器(qi)、1mL石(shi)英比色皿、研缽、冰和蒸(zheng)餾水。
操作步驟：
一(yi)、粗酶液提取：
1、收(shou)集細菌或(huo)(huo)細胞(bao)到離心管內，離心后棄上清；按照(zhao)每500萬細菌或(huo)(huo)細胞(bao)加(jia)入1mL提(ti)取液，超聲波破(po)碎細菌或(huo)(huo)細胞(bao)（功率20％，超聲3秒，間(jian)隔10秒，重(zhong)復30次(ci)）；8000g4℃離心10分鐘，取上(shang)清，置冰上(shang)待(dai)測。
2、稱取(qu)約0.1g組織，加入1mL提取(qu)液進行冰浴(yu)勻(yun)漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰(bing)上待測(ce)。
二、測定步驟(zou)：

1. 紫外分(fen)光(guang)光(guang)度計預熱30min以上，調(diao)節波長340nm，蒸餾(liu)水調(diao)零。
2. 樣(yang)本測定(ding)

（1）工作液的(de)配制(zhi)：臨用前將試劑一加(jia)入試劑二中混(hun)合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；
（2）取(qu)1mL工作液(ye)和0.05mL樣本于光徑(jing)為1cm的(de)(de)1mL石英比色皿中，混勻，加樣本的(de)(de)同時(shi)開始計(ji)時(shi)，在(zai)340 nm波(bo)長下(xia)記(ji)錄20秒(miao)時(shi)的(de)(de)初始吸(xi)光度(du)A1和5分20秒(miao)時(shi)的(de)(de)吸(xi)光度(du)A2，計(ji)算ΔA=A1-A2。注：當ΔA大(da)于0.5時(shi)，將樣本進行稀釋后測量。
三、GDH活性計算：
（1）按(an)樣本蛋(dan)白濃度計算：
單(dan)位的定義(yi)：每mg組織蛋白(bai)每分鐘消耗1 nmol NADH定義(yi)為一個酶活(huo)力單(dan)位。
GDH（U/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V樣) ÷T=675×ΔA÷Cpr
（2）按樣本(ben)鮮重計算：
單位(wei)的(de)定義(yi)：每g組(zu)織每分鐘消耗1 nmol NADH定義(yi)為一個酶活力(li)單位(wei)。
GDH（U/g 鮮(xian)重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×W)÷T=675×ΔA÷W
（3）按細(xi)菌或細(xi)胞密度計算：
單位的定(ding)義：每1萬個細菌或細胞每分鐘(zhong)消耗1 nmol NADH定(ding)義為一個酶活力單位。
GDH（U/10⁴ cell）＝[ΔA×V反(fan)總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×500)÷T=1.35×ΔA
V反總：反應體(ti)系總體(ti)積，1.05×10^-3 L；ε：NADH摩爾消(xiao)光系(xi)數(shu)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加(jia)入樣本體積(ji)，0.05 mL；V樣總(zong)：加(jia)入提取液體積(ji)，1 mL；T：反(fan)應時間(jian)，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhi)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhi)量，g；500：細菌或(huo)細胞總(zong)數，500萬。

相關文獻：
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者(zhe):Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊(kan):International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
 

谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒