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說明：分(fen)離試劑，層析介質。

葡聚糖凝膠G-100

化學和物理性質:

葡聚糖凝(ning)膠(jiao)是(shi)一(yi)種(zhong)珠狀的凝(ning)膠(jiao)，含有大量的羥基，很(hen)容易在水中(zhong)和電解質溶液(ye)中(zhong)溶脹。 G型(xing)的葡聚糖凝(ning)膠(jiao)有各種(zhong)不(bu)同(tong)的交聯度，因此它們的溶脹度和分(fen)級(ji)分(fen)離范圍(wei)也有所(suo)不(bu)同(tong)。 葡聚糖凝(ning)膠(jiao)的溶脹度基本(ben)上不(bu)因鹽和洗滌劑的存(cun)在而受影響。

葡(pu)聚糖凝膠有不同的粒度。超(chao)細級的葡(pu)聚糖凝膠是用(yong)于(yu)需要*分辨率(lv)的柱(zhu)色譜(pu)和(he)薄層(ceng)色譜(pu)。粗級和(he)中(zhong)級的凝膠用(yong)于(yu)制備性色譜(pu)過程，可(ke)在較(jiao)(jiao)低的壓(ya)力下獲得較(jiao)(jiao)高的流速。 另外，粗級也可(ke)用(yong)于(yu)批量工藝。

化學穩定性:

葡聚(ju)糖凝膠(jiao)(jiao)不(bu)溶(rong)于一切溶(rong)劑(ji)(除非它被化學降解)。 它在水、鹽溶(rong)液、有(you)機溶(rong)劑(ji)、堿和弱酸(suan)性溶(rong)液中都是穩定的，在強(qiang)酸(suan)中凝膠(jiao)(jiao)骨(gu)架的糖昔鍵被水解。 長期接(jie)觸氧(yang)化劑(ji)將(jiang)破(po)壞(huai)凝膠(jiao)(jiao)，因而應避免(mian)使用。

物理穩定性:

葡聚糖(tang)疑膠并不熔融，可以(yi)在濕態、中性PH進行(xing)滅(mie)菌或在高壓滅(mie)菌器(qi)120℃、30分(fen)鐘而不影響(xiang)它的(de)色譜性質。 干態的(de)凝(ning)膠加熱120℃以(yi)上將開(kai)始焦糖(tang)化。 葡聚糖(tang)凝(ning)膠的(de)機械強度取決于(yu)交聯度。

使用方法:

1. 葡聚糖凝(ning)膠預處(chu)理：

在(zai)室(shi)溫下，將葡聚糖凝膠干粉浸泡于(yu)蒸餾水中少(shao)24小時，并不斷(duan)攪(jiao)拌(ban)以保(bao)證(zheng)凝膠溶脹(zhang)，或(huo)者用熱水浸泡（不建議煮(zhu)沸）少(shao)1小時直充分(fen)溶脹(zhang)，凝膠體(ti)積不再變化。

注：在溶脹前，加入蒸餾水攪拌(ban)后使其自(zi)然沉(chen)降，沉(chen)降后若上層溶液中漂浮的(de)凝(ning)膠碎片顆粒較多，需要重復多次(ci)漂洗(xi)將其除去(qu)，防止層析時(shi)阻塞凝(ning)膠柱，影(ying)響流速(su)。

2. 裝柱：

將溶(rong)脹(zhang)好的(de)(de)凝膠(jiao)根據裝(zhuang)(zhuang)柱(zhu)要(yao)求一(yi)次性置(zhi)入柱(zhu)內(nei)，注(zhu)意保持濕態裝(zhuang)(zhuang)柱(zhu)，并避免(mian)柱(zhu)內(nei)產生氣泡(pao)或斷層; 裝(zhuang)(zhuang)柱(zhu)要(yao)均(jun)勻，可(ke)(ke)在凝膠(jiao)耐受的(de)(de)操作壓下(xia)裝(zhuang)(zhuang)柱(zhu)，裝(zhuang)(zhuang)好的(de)(de)凝膠(jiao)柱(zhu)可(ke)(ke)以檢測柱(zhu)效(xiao)，檢測過(guo)濾柱(zhu)裝(zhuang)(zhuang)填是(shi)否合格。

凝(ning)膠層析分(fen)(fen)離(li)度取決于柱(zhu)高(gao)(gao)，為分(fen)(fen)離(li)不同組分(fen)(fen)，凝(ning)膠柱(zhu)床必須有適宜的高(gao)(gao)度：分(fen)(fen)級分(fen)(fen)離(li)時(shi)(shi)，一般需要 100cm 左右長的層析柱(zhu)，柱(zhu)高(gao)(gao)與直(zhi)徑之比(bi)為 20:1-100:1，柱(zhu)高(gao)(gao)過高(gao)(gao)時(shi)(shi)，凝(ning)膠擠(ji)壓(ya)變形阻(zu)塞會引起較大(da)的反壓(ya)，應當盡可能避免；分(fen)(fen)組分(fen)(fen)離(li)（例如脫鹽）時(shi)(shi)用短柱(zhu)，柱(zhu)高(gao)(gao)控制在40-50cm 以下，柱(zhu)高(gao)(gao)與直(zhi)徑的比(bi)約為 5:1-10:1。

3. 平衡：

上樣前用(yong)平衡液平衡層析柱(zhu)少(shao)3-5個(ge)柱(zhu)體積直到記錄儀基線變(bian)得平穩(wen)為止（例(li)如流(liu)出液的PH值(zhi)等于上柱(zhu)的Buffer的PH值(zhi)）；

4. 上樣(yang)：

分級分離時上樣量(liang)(liang)一般(ban)為5%的柱(zhu)床(chuang)體積，我們建議(yi)初次(ci)上樣控(kong)制(zhi)在1-2%的床(chuang)體積，視分離情況可以(yi)調整;脫鹽(yan)時上樣量(liang)(liang)可以(yi)達(da)到20%的柱(zhu)床(chuang)體積。

樣品(pin)溶液(ye)如有雜質(zhi)或沉淀(dian)應過(guo)濾或離心除去(qu)，樣品(pin)的粘度不(bu)能過(guo)高，否則(ze)影響分(fen)離效果。

5. 洗脫方法:

可(ke)以用無鹽(yan)水(shui)，也可(ke)以采用上(shang)柱(zhu)時(shi)的緩(huan)沖液(ye)洗(xi)脫；在上(shang)柱(zhu)緩(huan)沖液(ye)中加入(ru)NaCl等(deng)梯(ti)(ti)度(du)洗(xi)脫或(huo)鹽(yan)梯(ti)(ti)度(du)洗(xi)脫也可(ke)以*分(fen)離純化；

6. 在位清洗(xi)(CIP)

凝膠使用十次后作(zuo)一(yi)次CIP，目的是去除柱床內沉淀(dian)的及頑固殘留的蛋白(bai)。 方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向(xiang)清(qing)洗四個(ge)柱體積，再(zai)以少三個(ge)柱體積平(ping)衡緩(huan)沖液再(zai)生。

7. 保存

凝膠柱暫時不用(yong)，可將(jiang)其(qi)回收(shou)，一般方(fang)法是(shi)將(jiang)凝膠用(yong)水沖洗干凈濾干，可加入0.02%防腐或用(yong)20%乙醇浸泡，以(yi)控制微(wei)生物生長。

葡聚糖凝膠G-100

參考文獻：
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