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ATP含量檢測試劑盒 微量法

ATP 含量檢測試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書
微(wei)量(liang)法

產(chan)地(di)：北京(jing)市通州(zhou)區(qu)馬駒橋聯東U谷8三樓
英文名稱:ATP content detection kit
產品商標：solarbio
注(zhu)意：正式測(ce)定(ding)前務必取2-3 個(ge)預(yu)期差異(yi)較(jiao)大的樣本做預(yu)測定。
貨號：BC0305
規(gui)格：100T/96S
保存與運輸：4℃保存(cun)或-20℃保存(cun)；            
參考價格(ge)：1560
庫存狀(zhuang)態：現(xian)貨
關鍵詞：ATP含量檢測|ATP含量|ATP|

產(chan)品內容：
提取液：液體100mL×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)；
試(shi)劑一：液(ye)體20mL×1 瓶(ping)，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前(qian)加(jia)入3.5mL 蒸餾水充分溶解(jie)，可加(jia)熱促進溶解(jie)；
試(shi)劑(ji)三：液體4mL×1 瓶，4℃保存(cun)；
試劑四(si)：粉劑×1 支，-20℃保存(cun)。臨用前每支加(jia)入(ru)0.4mL 蒸餾水溶解，可(ke)分裝后-20℃保存(cun)，避免反復凍(dong)融；
試劑五(wu)：粉(fen)劑×1 瓶，4℃保(bao)存。臨(lin)用前加入1mL 蒸(zheng)餾水；
試劑六：粉劑×1 支(zhi)，-20℃保存(cun)。臨用(yong)前(qian)加入0.5mL 蒸餾水備用(yong)，可(ke)分(fen)裝后-20℃保存(cun)，避免反復凍融；
標準品：粉劑×1 支，-20℃保存(cun)。5mg ATP，臨用前加入0.826mL 蒸(zheng)餾水配成10μmol/mL 的ATP標準溶液(ye)。

產品(pin)說(shuo)明：
ATP 廣泛存(cun)在于動(dong)物、植物、微生物和培養細(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)，是(shi)生物能(neng)(neng)量(liang)(liang)通(tong)貨，能(neng)(neng)荷(he)是(shi)描述細(xi)胞(bao)(bao)能(neng)(neng)量(liang)(liang)代謝狀態(tai)的主要參數。測定(ding)ATP 含量(liang)(liang)并且計算能(neng)(neng)荷(he)，能(neng)(neng)夠反映(ying)能(neng)(neng)量(liang)(liang)代謝狀態(tai)。
HK 催化葡(pu)萄(tao)糖和ATP 合成(cheng)6-磷酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖，6-磷酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖脫氫酶進一步催化6-磷酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖脫氫生成(cheng)NADPH，NADPH 在340nm 有特(te)征吸(xi)收峰，NADPH 和ATP 含量成(cheng)正比，以此反(fan)應ATP 含量。

自備儀器和(he)用品：
紫外分光光度(du)計/酶標儀(yi)、水(shui)浴鍋、可調式移液(ye)槍、微(wei)量石英比色皿(min)/ 96 孔UV 板、研(yan)缽/勻漿器、蒸餾(liu)水(shui)和lv仿。

操作步驟：
一、ATP 的提(ti)取(qu)：
1、血(xue)清(qing)(qing)(qing)（漿）中ATP 的(de)提取(qu)：按照血(xue)清(qing)(qing)(qing)（漿）體積（mL）：提取(qu)液(ye)體積（mL）為1：5~10 的(de)比例（建議(yi)取(qu)約0.1mL 血(xue)清(qing)(qing)(qing)（漿），加入1mL 提取(qu)液(ye)），充(chong)分震(zhen)蕩(dang)(dang)，10000g，4℃離(li)心10min；取(qu)上清(qing)(qing)(qing)液(ye)另一EP 管中，加入500μL 的(de)lv仿(fang)充(chong)分震(zhen)蕩(dang)(dang)混勻(yun)，10000g 4℃離(li)心3min，取(qu)上清(qing)(qing)(qing)，置冰上待測(ce)（不可用于蛋白質(zhi)含量測(ce)定(ding)）。

2、組織中(zhong)ATP 的提取(qu)：按照(zhao)組織質(zhi)量(liang)（g）：提取(qu)液(ye)體(ti)積(mL)為1：5~10 的比例(li)（建議(yi)稱取(qu)約0.1g組織，加(jia)入1mL 提取(qu)液(ye)），進行(xing)冰浴勻漿，8000g 4℃離(li)心(xin)10min，取(qu)上清(qing)(qing)另一EP 管中(zhong)，加(jia)入500μL 的lv仿充分震蕩(dang)混(hun)勻，10000g 4℃離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)(qing)，置(zhi)冰上待(dai)測（不可用于蛋(dan)白質(zhi)含量(liang)測定）。
3、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)或細(xi)(xi)(xi)菌(jun)中ATP 的(de)提取(qu)(qu)：先收集細(xi)(xi)(xi)胞(bao)或細(xi)(xi)(xi)菌(jun)到離(li)心(xin)管內，棄(qi)上清，按(an)照(zhao)細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)數量（104個）：提取(qu)(qu)液(ye)體積（mL）為500~1000：1 的(de)比例（建議500 萬細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)加(jia)入(ru)1mL 提取(qu)(qu)液(ye)），超(chao)(chao)聲波(bo)破碎1min（冰(bing)浴(yu)，強度20％或200W，超(chao)(chao)聲2s，停1s），10000g 4 ℃離(li)心(xin)10min；取(qu)(qu)上清液(ye)另一EP 管中，加(jia)入(ru)500μL 的(de)lv仿(fang)充分震蕩(dang)混(hun)勻，10000g 4℃離(li)心(xin)3min，取(qu)(qu)上清，置冰(bing)上待測（不可用于蛋白質(zhi)含(han)量測定(ding)）。

二、測定步驟：
1、紫外(wai)分光光度計/酶標儀(yi)預熱30 min 以(yi)上，調(diao)節(jie)波(bo)長到340nm，蒸(zheng)餾(liu)水調(diao)零。
2、將10μmol/mL 的ATP 標準(zhun)溶液用蒸餾(liu)水稀釋16 倍即0.625 μmol/mL 標準(zhun)溶液備(bei)用。
3、工作液的配制：臨用前(qian)請按試劑(ji)二(mL)：試劑(ji)三(san)(mL)：試劑(ji)四(mL)：試劑(ji)五（mL）：試劑(ji)六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1 的比(bi)例配制，現配現用。
4、加樣表
在(zai)微量石(shi)英比色皿(min)或96 孔UV 板中(zhong)加入：
試劑名稱(μL)          測定管          標準(zhun)管
樣本(ben)                   20
標準液(ye)                                 20
試劑一              ;  128             128
工(gong)作液                 52              52

充分混合后，立即(ji)測定340nm 下10s 的吸光值A1，然后將比色皿連同反應(ying)(ying)液一起(qi)放入(ru)37℃（哺乳動物(wu)(wu)）或25℃（其他物(wu)(wu)種）水(shui)浴中反應(ying)(ying)3min，拿出擦(ca)拭干凈立即測(ce)定其在3min10s 時(shi)的吸光值A2。用96 孔(kong)板則放入(ru)37℃（哺乳動物(wu)(wu)）或25℃（其他物(wu)(wu)種）培養(yang)箱中（酶標儀若自(zi)帶控溫(wen)功能，則將溫(wen)度調37℃或25℃）。分別(bie)計算(suan)ΔA 測(ce)定=A2 測(ce)定管-A1 測(ce)定管，ΔA 標準(zhun)=A2標(biao)準管-A1 標(biao)準管

三、ATP 含量計(ji)算：
1、血(xue)清（漿）中ATP 含量(liang)計算(suan)
ATP 含(han)量(μmol/mL) =ΔA 測定÷（ΔA 標(biao)準÷C 標(biao)準）×（V 提(ti)取+V 血清（漿））÷V 血清（漿）=6.875×;ΔA 測定÷ΔA 標(biao)準
2、組織(zhi)、細菌(jun)或細胞(bao)中ATP 含量計(ji)算
（1） 按樣(yang)本鮮重計算(suan)
ATP 含量（μmol/g 鮮重）= ΔA 測定÷（ΔA 標(biao)(biao)準÷C 標(biao)(biao)準）×V 提取÷W=0.625×ΔA 測定÷ΔA 標(biao)(biao)準÷W
（2） 按細菌或細胞(bao)密度計算
ATP 含量(liang)(μmol/106 cell）=ΔA 測定÷（ΔA 標準(zhun)(zhun)÷C 標準(zhun)(zhun)）×V 提(ti)取÷5=0.125×ΔA 測定÷;ΔA 標準(zhun)(zhun)

C 標準(zhun)(zhun)管：標準(zhun)(zhun)液濃(nong)度，0.625μmol/mL；
V 提取(qu)：加入的提取(qu)液體積(ji)，1mL；
V 血(xue)清（血(xue)漿(jiang)）：血(xue)清（漿(jiang)）體積，0.1mL；
W：樣本(ben)質量(liang)，g；
5：細胞或細菌總數，5×106 個。

注(zhu)意事項
1、加入提取液離心(xin)后的上清若為渾濁為正常現象。
2、提取過程(cheng)嚴(yan)格在冰浴條件下(xia)進行。
3、用微(wei)量石(shi)(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)測(ce)(ce)量的(de)(de)吸光(guang)值大(da)于(yu)(yu)1.4 或(huo)者ΔA 測(ce)(ce)定(ding)(ding)大(da)于(yu)(yu)1.2 時（石(shi)(shi)英(ying)96 孔板的(de)(de)吸光(guang)值大(da)于(yu)(yu)1.4 或(huo)者ΔA 測(ce)(ce)定(ding)(ding)大(da)于(yu)(yu)1.2 時），可(ke)(ke)以(yi)(yi)將樣(yang)品(pin)稀釋后(hou)進(jin)行(xing)測(ce)(ce)定(ding)(ding)。若吸光(guang)值小(xiao)于(yu)(yu)0.01，則(ze)可(ke)(ke)以(yi)(yi)增加反應時間（5min 或(huo)10min）來測(ce)(ce)定(ding)(ding)，標(biao)準品(pin)需要增加同(tong)樣(yang)的(de)(de)反應時間。
 

ATP含量檢測試劑盒 微量法