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        乙酰膽堿酯酶（AchE）測定試劑盒 微量法

測定意義：AchE屬于絲氨酸水解酶，廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿（Ach）水解，在神經傳導調節中起重要作用。

測定原理：AchE催化Ach水解生成膽堿，膽堿與二硫對硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm處有吸收峰，通過測定412 nm吸光度增加速率，計算AchE活性。

需要的儀器，耗材：紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍和蒸餾水。

?乙酰膽堿酯酶（AchE）測定試劑盒 微量法
微量法
正(zheng)式測定前務必取 2-3 個預(yu)期差異較大的樣本做預(yu)測定

貨號：BC2025

規格：100 管/96 樣

產品內容：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)。

試劑二：液體×1 瓶(ping)，4℃保存。

試劑(ji)三：粉劑(ji)×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)。臨用前加入 1.3mL 試劑(ji)二，充分(fen)震蕩溶解(jie)。

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 1.3mL 試劑二(er)，充分(fen)震蕩溶(rong)解。

產品(pin)說明： AchE 屬于(yu)絲(si)氨酸水(shui)解(jie)酶(mei)(mei)，廣泛存(cun)在于(yu)各種動物組織和(he)(he)血清中(zhong)。AchE 催化(hua)(hua)乙酰膽堿(jian)(jian)（Ach）水(shui) 解(jie)，在神經傳導調(diao)節中(zhong)起重(zhong)要作用。 AchE 催化(hua)(hua) Ach 水(shui)解(jie)生(sheng)成膽堿(jian)(jian)，膽堿(jian)(jian)與(yu)二硫對硝基苯甲酸（DTNB）作用生(sheng)成 5-巰基-硝基苯甲 酸（TNB）；TNB 在 412nm 處有吸(xi)收峰，通過測定 412nm 吸(xi)光度增(zeng)加速率，計算 AchE 活性。 自備儀器(qi)和(he)(he)用品(pin)： 可見分光光度計/酶(mei)(mei)標儀、微量(liang)石英比色皿/96 孔板、低溫離心機、水(shui)浴鍋、可調(diao)式移液槍和(he)(he)蒸 餾水(shui)。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1. 組(zu)織：按(an)照組(zu)織質(zhi)量（g）：提取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(mL)為 1：5~10 的比例（建(jian)議稱取(qu)約 0.1g 組(zu)織，加入 1mL 提取(qu)液(ye)）進行冰浴(yu)勻漿，8000g4℃離心 10min，取(qu)上清液(ye)待(dai)測。

2. 細菌(jun)、真菌(jun)：按照細胞(bao)數量(liang)（104個）：試劑(ji)一體積（mL）為 500~1000：1 的比(bi)例（建議(yi) 500 萬 細胞(bao)加入 1mL 提取(qu)液），冰(bing)浴超聲(sheng)(sheng)波破碎細胞(bao)（功率 300w，超聲(sheng)(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔 7 秒(miao)，總時間(jian) 3min）； 然后 8000g，4℃，離心 10min，取(qu)上清置于冰(bing)上待測。

3. 血清等液(ye)體：直接測定。

二、測定操作：

1. 分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計(ji)預熱(re) 30min，調節波長到 412nm，蒸餾水調零。

2. 試劑(ji)二置于 37℃水浴(yu)中預(yu)熱 30min。

3. 空白(bai)管：取微(wei)量石英(ying)比(bi)色皿/96 孔板，依次(ci)加入(ru) 20μL 蒸餾水、 160μL 試(shi)劑二、 10μL 試(shi)劑三(san)和(he) 10μL 試(shi)劑四，迅速混勻，于(yu) 412nm 處測定 3min 內(nei)吸(xi)(xi)光(guang)(guang)值(zhi)變(bian)化，第(di) 10s 吸(xi)(xi)光(guang)(guang)值(zhi)記(ji)(ji)為(wei)(wei) A1，第(di) 190s 吸(xi)(xi)光(guang)(guang) 值(zhi)記(ji)(ji)為(wei)(wei) A2。△A 空白(bai)管=A2－A1 4. 測定管：取微(wei)量石英(ying)比(bi)色皿/96 孔板，依次(ci)加入(ru) 20μL 上(shang)清、160μL 試(shi)劑二、10μL 試(shi)劑三(san)和(he) 10μL 試(shi)劑四，迅速混勻，于(yu) 412nm 處測定 3min 內(nei)吸(xi)(xi)光(guang)(guang)值(zhi)變(bian)化，第(di) 10s 吸(xi)(xi)光(guang)(guang)值(zhi)記(ji)(ji)為(wei)(wei) A3，第(di) 190s 吸(xi)(xi)光(guang)(guang) 值(zhi)記(ji)(ji)為(wei)(wei) A4。△A 空白(bai)管=A4－A3

注意：空白管只需(xu)測定一(yi)次

相關文獻：

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