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            丙酮酸（PA）測定試劑盒 微量法

測定意(yi)義：丙酮酸(suan)(suan)通過乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸(suan)(suan)和(he)氨基酸(suan)(suan)三大代謝，起著重要的樞紐作(zuo)用(yong)。

測(ce)定原理：丙酮(tong)酸與(yu)2,4-二(er)硝基苯肼作用，生成丙酮(tong)酸-2,4-二(er)硝基苯腙，在堿性(xing)溶液中呈櫻紅色(se)。

需要(yao)的儀器，耗材:可見分光光度計/酶標儀、臺式離(li)心機、可調式移液器、微(wei)量(liang)石英(ying)比(bi)色皿/96孔板(ban)、研缽、冰、蒸(zheng)餾水。 

              丙酮酸（PA）測定試劑盒 微量法

丙酮酸提取(qu)(qu)(qu)(qu)： 1、細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)或培養細(xi)(xi)(xi)(xi)胞：先收(shou)集細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞到離心(xin)(xin)管內(nei)，離心(xin)(xin)后棄上(shang)清(qing)(qing)；按照細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞數量（104個）：提取(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)體(ti)積(ji)（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議(yi) 500 萬細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞加入 1mL 提取(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)），超聲(sheng)波破碎（冰浴(yu)，功率 20％或 200W，超聲(sheng) 3s，間(jian)隔 10s，重復(fu) 30 次(ci)），靜(jing)置(zhi)(zhi) 30min， 8000g，25℃離心(xin)(xin) 10min，取(qu)(qu)(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)待(dai)測(ce)(ce)。 2、組織：按照組織質量（g）：提取(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(mL)為(wei) 1：5~10 的比例（建議(yi)稱取(qu)(qu)(qu)(qu)約 0.1g 組織，加入 1mL 提取(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)），進行冰浴(yu)勻漿，靜(jing)置(zhi)(zhi) 30min，8000g，25℃離心(xin)(xin) 10min，取(qu)(qu)(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)待(dai)測(ce)(ce)。 3、血(xue)清(qing)(qing)（漿）樣品：按照血(xue)清(qing)(qing)（漿）體(ti)積(ji)（mL）：提取(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(mL)為(wei) 1：5~10 的比例（建議(yi)取(qu)(qu)(qu)(qu) 0.1mL 血(xue)清(qing)(qing)（漿）加入 1mL 提取(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)），進行冰浴(yu)勻漿，靜(jing)置(zhi)(zhi) 30min， 8000g，25℃離心(xin)(xin) 10min，取(qu)(qu)(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)待(dai)測(ce)(ce)。

測(ce)定(ding)意義：丙酮酸通過乙酰(xian)CoA連(lian)接葡萄糖、脂肪酸和氨基(ji)酸三(san)大代謝，起著重要的樞紐作用。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：丙(bing)酮(tong)酸(suan)(suan)與2,4-二(er)硝(xiao)基(ji)苯肼作(zuo)用，生成丙(bing)酮(tong)酸(suan)(suan)-2,4-二(er)硝(xiao)基(ji)苯腙，在堿(jian)性溶液(ye)中呈(cheng)櫻(ying)紅色(se)。

需要的儀(yi)器，耗材:可見分光光度計/酶(mei)標儀(yi)、臺式(shi)離(li)心機、可調式(shi)移液器、微量石英比色皿/96孔板、研(yan)缽、冰、蒸餾水(shui)。 

丙酮酸提(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)： 1、細(xi)(xi)(xi)菌或培養細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)：先收集細(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)到離(li)(li)心(xin)管內，離(li)(li)心(xin)后棄上(shang)清(qing)(qing)；按照細(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)數量(liang)（104個）：提(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)(ye)體(ti)積(ji)（mL）為 500~1000：1 的(de)比例(li)（建議(yi) 500 萬細(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)加入(ru) 1mL 提(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)(ye)），超(chao)聲波破(po)碎（冰(bing)浴，功率(lv) 20％或 200W，超(chao)聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），靜(jing)置(zhi) 30min， 8000g，25℃離(li)(li)心(xin) 10min，取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)待測。 2、組織：按照組織質量(liang)（g）：提(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)(ye)體(ti)積(ji)(mL)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建議(yi)稱取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)約 0.1g 組織，加入(ru) 1mL 提(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)(ye)），進行冰(bing)浴勻漿(jiang)(jiang)，靜(jing)置(zhi) 30min，8000g，25℃離(li)(li)心(xin) 10min，取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)待測。 3、血清(qing)(qing)（漿(jiang)(jiang)）樣(yang)品：按照血清(qing)(qing)（漿(jiang)(jiang)）體(ti)積(ji)（mL）：提(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)(ye)體(ti)積(ji)(mL)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建議(yi)取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu) 0.1mL 血清(qing)(qing)（漿(jiang)(jiang)）加入(ru) 1mL 提(ti)(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)(ye)），進行冰(bing)浴勻漿(jiang)(jiang)，靜(jing)置(zhi) 30min， 8000g，25℃離(li)(li)心(xin) 10min，取(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)待測。

丙(bing)(bing)酮(tong)(tong)酸含(han)量(liang)計算(suan)(suan)： a.用(yong)微(wei)量(liang)石英(ying)比(bi)色皿測定(ding)的計算(suan)(suan)公式(shi)如下 1、標準條(tiao)件下測定(ding)回歸方程(cheng)為(wei) y = 0.0466x + 0.0675； x 為(wei)丙(bing)(bing)酮(tong)(tong)酸鈉(na)含(han)量(liang)（µg/mL），y 為(wei)吸光值。 2、按照(zhao)血(xue)清(qing)（漿）體積計算(suan)(suan)丙(bing)(bing)酮(tong)(tong)酸含(han)量(liang)（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6×(A-0.0675) 3、按照(zhao)蛋白濃度(du)計算(suan)(suan)丙(bing)(bing)酮(tong)(tong)酸含(han)量(liang)（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr 4、按照(zhao)樣品(pin)質量(liang)計算(suan)(suan)丙(bing)(bing)酮(tong)(tong)酸含(han)量(liang)（µg/g 鮮重）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675) ÷W 3、按照(zhao)細菌或細胞密度(du)計算(suan)(suan)丙(bing)(bing)酮(tong)(tong)酸含(han)量(liang)（μg/104 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675)

測定意義：丙酮酸通過乙酰CoA連(lian)接葡萄糖、脂肪酸和(he)氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。

測(ce)定原(yuan)理：丙(bing)酮(tong)酸與2,4-二硝(xiao)基苯肼作用(yong)，生成丙(bing)酮(tong)酸-2,4-二硝(xiao)基苯腙，在堿性(xing)溶(rong)液中呈櫻(ying)紅色。

需要的儀器(qi)(qi)，耗材:可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diao)式移液器(qi)(qi)、微(wei)量石英比色皿/96孔板(ban)、研缽、冰、蒸餾(liu)水(shui)。 

丙酮(tong)酸提(ti)取(qu)(qu)： 1、細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)培養細(xi)(xi)(xi)胞：先收集細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)胞到離心(xin)管內(nei)，離心(xin)后棄上清；按(an)照(zhao)細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)胞數量(liang)（104個）：提(ti)取(qu)(qu)液(ye)體積（mL）為 500~1000：1 的比例(li)（建(jian)(jian)議(yi)(yi) 500 萬細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)胞加入 1mL 提(ti)取(qu)(qu)液(ye)），超聲波破碎（冰(bing)浴，功率 20％或(huo) 200W，超聲 3s，間隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次），靜置 30min， 8000g，25℃離心(xin) 10min，取(qu)(qu)上清待測(ce)。 2、組織(zhi)：按(an)照(zhao)組織(zhi)質量(liang)（g）：提(ti)取(qu)(qu)液(ye)體積(mL)為 1：5~10 的比例(li)（建(jian)(jian)議(yi)(yi)稱(cheng)取(qu)(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加入 1mL 提(ti)取(qu)(qu)液(ye)），進行(xing)冰(bing)浴勻漿(jiang)(jiang)，靜置 30min，8000g，25℃離心(xin) 10min，取(qu)(qu)上清待測(ce)。 3、血清（漿(jiang)(jiang)）樣(yang)品：按(an)照(zhao)血清（漿(jiang)(jiang)）體積（mL）：提(ti)取(qu)(qu)液(ye)體積(mL)為 1：5~10 的比例(li)（建(jian)(jian)議(yi)(yi)取(qu)(qu) 0.1mL 血清（漿(jiang)(jiang)）加入 1mL 提(ti)取(qu)(qu)液(ye)），進行(xing)冰(bing)浴勻漿(jiang)(jiang)，靜置 30min， 8000g，25℃離心(xin) 10min，取(qu)(qu)上清待測(ce)。

相關文獻：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
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