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    乳酸含量（LA）檢測試劑盒 微量法

測定意義：乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。

測定原理：乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質，在530nm處有特征吸收峰。

需要的儀器，耗材：天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、

   乳酸含量（LA）檢測試劑盒 微量法

一、樣(yang)(yang)本(ben)處(chu)理 1. 組織：按(an)照(zhao)質量（g）：提取(qu)(qu)液體積(ji)(mL)為1：5~10的比例（建議(yi)稱取(qu)(qu)約(yue)0.1g，加(jia)入(ru)(ru)1mL提取(qu)(qu)液）加(jia)入(ru)(ru)提取(qu)(qu)液，冰(bing)浴勻漿后(hou)于(yu)(yu)4℃，12000g離(li)心(xin)10min，取(qu)(qu)上清測(ce)(ce)定(ding)。 2. 細(xi)(xi)胞：按(an)照(zhao)細(xi)(xi)胞數(shu)量（104個(ge)）：提取(qu)(qu)液體積(ji)（mL）為500~1000：1的比例（建議(yi)500萬(wan)細(xi)(xi)胞加(jia)入(ru)(ru) 1mL提取(qu)(qu)液），冰(bing)浴超聲(sheng)(sheng)波破碎細(xi)(xi)胞（功(gong)率300w，超聲(sheng)(sheng)3秒，間隔7秒，總時(shi)間3min）；于(yu)(yu)4℃， 12000g離(li)心(xin)10min，取(qu)(qu)上清測(ce)(ce)定(ding)。 3. 血清：直接(jie)測(ce)(ce)定(ding)。二(er)、測(ce)(ce)定(ding)操作樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)對(dui)(dui)照(zhao)管(guan) 樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)測(ce)(ce)定(ding)管(guan) 標準對(dui)(dui)照(zhao)管(guan) 標準測(ce)(ce)定(ding)管(guan)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)（μL） 50 50 標準品(pin)(pin)(pin)（μL） 50 50 Solarbio  H2O（μL） 300 450 300 450 試劑(ji)一（μL） 150 150 試劑(ji)二(er)（μL） 200 200 200 200 顯色液（μL） 300 300 300 300 充分混(hun)勻，于(yu)(yu)37℃反應(ying)30min，于(yu)(yu)1mL玻(bo)璃(li)比色皿(min)，蒸餾水調零，測(ce)(ce)定(ding)530nm處(chu)吸(xi)光值，分別記為A1，A2，A3，A4，△A樣(yang)(yang)=A2-A1；△ A標= A4-A3 注意：標準對(dui)(dui)照(zhao)管(guan)和標準測(ce)(ce)定(ding)管(guan)只需測(ce)(ce)定(ding)一次(ci) ，每個(ge)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)測(ce)(ce)定(ding)管(guan)設一個(ge)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)對(dui)(dui)照(zhao)管(guan)。

1. 按(an)照蛋(dan)白含量(liang)(liang)(liang)計(ji)算(suan) LA含量(liang)(liang)(liang)（μmol/mg prot）= △A樣(yang)÷△A標(biao)×C標(biao)÷ Cpr = 2×△A樣(yang)÷△A標(biao)÷ Cpr 2. 按(an)照樣(yang)本(ben)(ben)質(zhi)量(liang)(liang)(liang)計(ji)算(suan) LA含量(liang)(liang)(liang)（μmol/g鮮重）= △A樣(yang)÷△A標(biao)×C標(biao)÷ W = 2×△A樣(yang)÷△A標(biao)÷ W 3. 按(an)照細胞數量(liang)(liang)(liang)計(ji)算(suan) LA含量(liang)(liang)(liang)（μmol/104 cell）= △A樣(yang)÷△A標(biao)×C標(biao)÷ 細胞數量(liang)(liang)(liang) = 2×△A樣(yang)÷△A標(biao)÷ 細胞數量(liang)(liang)(liang) 4. 按(an)照液(ye)體(ti)體(ti)積計(ji)算(suan) LA含量(liang)(liang)(liang)（μmol/mL）= △A樣(yang)÷△A標(biao)×C標(biao) = 2×△A樣(yang)÷△A標(biao) C標(biao)：標(biao)準品濃度(du)，2mmol/L，W：樣(yang)本(ben)(ben)質(zhi)量(liang)(liang)(liang)，g/mL；Cpr：樣(yang)本(ben)(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃度(du)，mg/mL

相關文獻:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Wearable Carbon Nanotube-Based BioSensors on Gloves for Lactate》 作者:Xiaojin Luo, Weihua Shi , Haoming Yu , Zhaoyang Xie , Kunyi Li  and Yue Cui  期刊:Sensors 影響因子:3.031 PMID:30314270