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纖維素酶（CL）測定試劑盒  微量法

操作步驟：

一、樣品測定(ding)的準(zhun)備：

1、細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)：收集細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)到離心(xin)管內，離心(xin)后棄上(shang)(shang)清；按照每 500 萬細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)加(jia)入(ru) 1mL 提取(qu)(qu)液，超(chao)聲冰(bing)浴破碎細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)（功率 20％，超(chao)聲 3S 秒(miao)，間(jian)隔 10S，重復 30 次）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)(qu)上(shang)(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)(shang)待測。

2、組(zu)織：稱取約 0.1g 組(zu)織加(jia)入 1mL 提取液，冰浴中勻漿。8000g ，4℃離(li)心(xin) 10min，取上清，置冰上待測。

二(er)、加(jia)樣表(biao)和測(ce)定(ding)步驟：試(shi)劑(ji)(ji)名稱（μL） 對(dui)照管(guan)(guan) 測(ce)定(ding)管(guan)(guan) 標(biao)(biao)準管(guan)(guan)試(shi)劑(ji)(ji)一 50 50 - 試(shi)劑(ji)(ji)二(er) 200 200 - 雙蒸(zheng)(zheng)水(shui) 50 50 - 樣本 50 - 煮沸的(de)樣本 50 - 混勻(yun)，40℃準確水(shui)浴 30min，取出后立即放入沸水(shui)中煮沸 15min,得糖(tang)化液 混勻(yun)，540nm 處蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水(shui)調(diao)零(ling)，測(ce)定(ding)吸光值 A，樣品管(guan)(guan)計算ΔA=A 測(ce)定(ding)管(guan)(guan)-A 對(dui)照管(guan)(guan)。標(biao)(biao)準曲(qu)線的(de)建(jian)(jian)立：540nm 處蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水(shui)調(diao)零(ling)，讀標(biao)(biao)準管(guan)(guan)吸光值 A。以濃度（y）為縱坐標(biao)(biao)，吸光度 A（x）為橫(heng)坐標(biao)(biao)建(jian)(jian)立標(biao)(biao)準曲(qu)線。

纖維素酶（CL）測定試劑盒  微量法

CL 活(huo)(huo)力(li)計(ji)算：根據標準曲線(xian)，將ΔA 帶入(ru)(ru)公(gong)式中（x）計(ji)算樣(yang)品(pin)濃度(du) y（mg/mL）。 1、按(an)照蛋(dan)白(bai)濃度(du)計(ji)算單(dan)(dan)位的定(ding)(ding)(ding)義(yi)(yi)：每 mg 組織蛋(dan)白(bai)在(zai)反應(ying)(ying)體(ti)系中每分(fen)鐘(zhong)催化產生 1μg 葡萄糖定(ding)(ding)(ding)義(yi)(yi)為一個酶活(huo)(huo)力(li)單(dan)(dan)位。 CL 活(huo)(huo)力(li)（U /mg prot）＝1000×y×V 反總(zong)(zong)(zong)(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T=233×y÷Cpr 2、按(an)樣(yang)本(ben)鮮重計(ji)算單(dan)(dan)位的定(ding)(ding)(ding)義(yi)(yi)：每 g 組織在(zai)反應(ying)(ying)體(ti)系中每分(fen)鐘(zhong)催化產生 1μg 葡萄糖定(ding)(ding)(ding)義(yi)(yi)為一個酶活(huo)(huo)力(li)單(dan)(dan)位。 CL 活(huo)(huo)力(li)（U/g 鮮重）＝1000×y×V 反總(zong)(zong)(zong)(zong)÷（W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)(zong)(zong)(zong)）÷T =233×y÷W 3、按(an)細(xi)(xi)菌或(huo)(huo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)密度(du)計(ji)算單(dan)(dan)位的定(ding)(ding)(ding)義(yi)(yi)：每1萬(wan)個細(xi)(xi)菌或(huo)(huo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)在(zai)反應(ying)(ying)體(ti)系中每分(fen)鐘(zhong)催化產生1μg 葡萄糖定(ding)(ding)(ding)義(yi)(yi)為一個酶活(huo)(huo)力(li)單(dan)(dan)位。 CL 活(huo)(huo)力(li)（U/10 4 cell）＝1000×y×V 反總(zong)(zong)(zong)(zong)÷（500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)(zong)(zong)(zong)）÷T =0.467×y 1000：1mg/mL=1000ug/mL；V 反總(zong)(zong)(zong)(zong)：反應(ying)(ying)體(ti)系總(zong)(zong)(zong)(zong)體(ti)積(ji)，0.35mL； V 樣(yang)：加入(ru)(ru)樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji)， 0.05 mL；V 樣(yang)總(zong)(zong)(zong)(zong)：加入(ru)(ru)提取液體(ti)積(ji)，1 mL；T：反應(ying)(ying)時間，30 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質濃度(du)， mg/mL；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細(xi)(xi)菌或(huo)(huo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)總(zong)(zong)(zong)(zong)數，500 萬(wan)。

纖維素酶（CL）測定試劑盒  微量法

提取(qu)液：液體(ti) 50mL×1 瓶，4℃保(bao)存；試劑(ji)一(yi)：液體(ti) 4mL×1 瓶，4℃保(bao)存；試劑(ji)二：液體(ti) 10mL×1 瓶，4℃保(bao)存；試劑(ji)三：液體(ti) 13mL×1 瓶，4℃保(bao)存；標準品：粉劑(ji)×1 支，4℃保(bao)存，含 10mg 無水(shui)葡萄糖（干燥(zao)失重<0.2%），臨(lin)用(yong)前加(jia)入(ru) 1ml 蒸餾(liu)水(shui)溶解(jie)，配制(zhi)成 10mg/ml 葡萄糖溶液備用(yong)，4℃可(ke)保(bao)存 1 周，或(huo)者(zhe)用(yong)飽和苯甲(jia)酸溶液溶解(jie)，可(ke)保(bao)存更長時間。