產品名稱：輔酶ⅠNAD(H)含量檢測試劑盒

產品英文名(ming)： CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit

產(chan)品貨(huo)號：BC0310         ;  產地：北京市通州區馬駒(ju)橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管(guan)/24樣         產品商標(biao)：solarbio
保存與(yu)運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格(ge)：640
庫存狀態：現(xian)貨                          
關鍵字：輔(fu)酶ⅠNAD(H)試(shi)劑盒|含量(liang)檢測試劑(ji)盒|輔酶ⅠNAD(H)含量(liang)檢測| 

簡(jian)要(yao)介(jie)紹：
輔酶(mei)ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生(sheng)物和(he)(he)培養細胞中(zhong)，NAD+是糖(tang)(tang)(tang)酵解(jie)（EMP）和(he)(he)三(san)羧(suo)酸循(xun)環（TCA）的(de)主(zhu)要(yao)氫受體(ti)，生(sheng)成的(de)NADH經呼吸電(dian)子(zi)鏈（ETC）傳遞把電(dian)子(zi)交給氧(yang)，在合(he)成ATP的(de)同時(shi)，形成大量的(de)ROS，同時(shi)NADH再生(sheng)為NAD+。糖(tang)(tang)(tang)、脂(zhi)、蛋(dan)白質(zhi)三(san)大代謝(xie)物質(zhi)分解(jie)中(zhong)的(de)氧(yang)化反應絕大部分通過這一體(ti)系(xi)完成。NAD(H)含(han)量和(he)(he)NADH/NAD+比(bi)值的(de)高(gao)低可(ke)用(yong)于評價(jia)糖(tang)(tang)(tang)酵解(jie)和(he)(he)TCA循(xun)環的(de)強弱。較高(gao)的(de)NAD(H)及NADH/NAD+比(bi)值說明細胞呼吸耗氧(yang)量較高(gao)，處于過氧(yang)化狀態。此(ci)外，NADH/NAD+比(bi)值升高(gao)也可(ke)抑制糖(tang)(tang)(tang)酵解(jie)和(he)(he)TCA循(xun)環。另外，NAD+降(jiang)解(jie)產物對細胞信號(hao)傳導、代謝(xie)和(he)(he)基因表達(da)等具有重要(yao)的(de)調控作用(yong)。

產品詳細描述

商品貨(huo)號：	商品品牌：	規(gui)格(ge)	基本售價：	選擇規(gui)格
BC0310-50管/24樣(yang)	Solarbio	50管/24樣	640.00元

產(chan)品內容： 
酸性提取液(ye)：15mL×1 瓶，4℃保存(cun)；
堿性提取液：15mL×1 瓶，4℃保存；
試(shi)劑(ji)一：液體 20mL×1 瓶(ping)，4℃保存；
試劑二：液體 6mL×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)
試(shi)劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存，用時(shi)加(jia)入 6.1mL 雙蒸水，混勻，4℃保存一周；
試劑(ji)四：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4 ℃保(bao)存，用時加入 6.6mL 雙蒸(zheng)水，混(hun)勻(yun)，4℃保(bao)存一(yi)周(zhou)；
試劑(ji)五(wu)：液體 3mL×1 瓶，4 ℃保存(cun)；
試劑六(liu)：液體 40mL×1 瓶(ping)，4 ℃保存；
試劑七：自(zi)備(bei)，將 72mL 乙醇和 3mL 蒸(zheng)餾水充分混合備(bei)用。
NAD 標(biao)準品：粉劑×1 支(zhi)，-20℃保存。臨(lin)用前加入 1.5mL 蒸(zheng)餾水，即 2umol/mL，將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標(biao)準溶液備用。
NADH 標(biao)(biao)準品：粉(fen)劑(ji)×1 支，-20℃保存。臨用前(qian)加入 1.4mL 蒸餾(liu)水，即 2umol/mL，將其稀釋為 1.25nmol/mL 的(de) NAD 標(biao)(biao)準溶液備用。

操作步驟：
一(yi)、NAD+和 NADH 的(de)提取：
1、血清（漿(jiang)）中 NAD+和 NADH 的提取(qu)：
NAD+的提取：取 0.1mL 血(xue)清（漿(jiang)），加入 0.5mL 酸性提取液(ye)，煮(zhu)沸 5min (蓋緊，以防止(zhi)水分 散失)，冰浴(yu)冷卻(que)后，10000g 4℃離心 10min；取上清 200uL，加入等體積堿性提取液(ye)；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清，冰上保(bao)存待測。
NADH 的提(ti)取：取 0.1mL 血清（漿），加(jia)入 0.5mL 堿性(xing)提(ti)取液，煮(zhu)沸(fei) 5min(蓋緊，以防(fang)止(zhi)水(shui)分 散失)，冰浴冷(leng)卻后(hou)，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加(jia)入等體積酸(suan)性(xing)提(ti)取液；混勻(yun)，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保(bao)存待測。
2、組(zu)織中 NAD+和(he) NADH 的提取：
NAD+的提(ti)取(qu)(qu)：稱(cheng)取(qu)(qu)約 0.1g 組織，加入(ru) 0.5mL 酸性提(ti)取(qu)(qu)液，冰(bing)浴(yu)(yu)研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰(bing)浴(yu)(yu)冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取(qu)(qu)上清 200uL，加入(ru)等體(ti)積堿性提(ti)取(qu)(qu)液混(hun)勻， 10000g 4℃離心 10min，取(qu)(qu)上清,冰(bing)上保存待測。
NADH 的提(ti)取：稱取約(yue) 0.1g 組(zu)織，加入 0.5mL 堿(jian)性提(ti)取液，冰浴研磨，煮(zhu)沸 5min(蓋(gai)緊，以(yi)防 止(zhi)水分散失)，冰浴冷卻(que)后，10000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)(shang)清 200uL，加入等體積酸性提(ti)取液混勻， 10000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)(shang)清,冰上(shang)(shang)保存待測。
3、細胞(bao)或細菌中 NAD+和(he) NADH 的提取：
NAD+的(de)提取(qu)：收(shou)集 500 萬細(xi)胞或(huo)細(xi)菌(jun)，加入 0.5mL 酸(suan)性提取(qu)液，超(chao)聲(sheng)波破碎 1min（強度 20％ 或(huo) 200W，超(chao)聲(sheng) 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以(yi)防(fang)止水分散(san)失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離(li)心(xin)(xin) 10min，取(qu)上清液 200uL 另一新的(de)離(li)心(xin)(xin)管中，加入等體積的(de)堿性提取(qu)液使之中和，混(hun)勻(yun)，10000g 4℃ 離(li)心(xin)(xin) 10min，取(qu)上清,冰上保存(cun)待測。
NADH 的(de)(de)提取：收集(ji) 500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 堿性提取液，超(chao)聲(sheng)波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超(chao)聲(sheng) 2s，停(ting) 1s），煮沸(fei) 5min(蓋(gai)緊，以防止水分散失(shi))，冰(bing)浴中(zhong)(zhong)冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上(shang)清液 200uL 另一新的(de)(de)離心管中(zhong)(zhong)，加入等體積(ji)的(de)(de)酸(suan)性提取液使之中(zhong)(zhong)和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上(shang)清,冰(bing)上(shang)保存待測。

二(er)、測定步驟：
1、 分光光度計預熱30分鐘以(yi)上，調節波長570nm，蒸餾水調零。
2、 操作(zuo)表（在1.5ml棕(zong)色EP管中按下表依次加樣）

混勻， 570nm 下比色，讀取吸(xi)光值ΔA 測定=A 測定管(guan)-A 對照管(guan)，NAD 標(biao)準(zhun)(zhun)管(guan)的記為(wei)ΔA 標(biao)準(zhun)(zhun) 1=A 標(biao)準(zhun)(zhun)管(guan) 1-A 空(kong)白管(guan)。 NADH 標(biao)準(zhun)(zhun)管(guan)的記為(wei)ΔA 標(biao)準(zhun)(zhun) 2=A 標(biao)準(zhun)(zhun)管(guan) 2-A 空(kong)白管(guan)。空(kong)白管(guan)只(zhi)需做一 到兩次。

注意事項(xiang)：
1、操作過程(cheng)應(ying)避光。不可將(jiang)試劑一、二、三(san)和(he)四混合后再加(jia)，必須(xu)分開加(jia)。
2、反(fan)應過程要注(zhu)意避光。
3、當吸光值大于 1 時，建(jian)議稀釋(shi)后測量(liang)，計算(suan)公式中應當乘以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)。

NAD+含量的(de)計算 

1. 血清（漿）中(zhong) NAD+含量計算

NAD+含量(liang)(nmol/mL）=ΔA 測定(ding)÷（ΔA 標準(zhun) 1÷C 標）×V 提(ti)取(qu)÷V 血清=12.5×ΔA 測定(ding)÷ΔA 標準(zhun) 1
2、組(zu)織、細菌、細胞(bao)中 NAD+含量(liang)計算
 (1)按(an)樣本(ben)蛋白濃度計算
NAD+ (nmol/mg prot）=ΔA 測定÷（ΔA 標準(zhun) 1÷C 標）×V 提取÷(V 提取×Cpr) = 1.25×ΔA 測定÷ΔA 標準(zhun) 1
 (2)按樣(yang)本鮮重(zhong)計算
NAD+ (nmol/g 鮮重）=ΔA 測定÷（ΔA 標(biao)(biao)準 1÷C 標(biao)(biao)）×V 提取÷W= 1.25×ΔA 測定÷ΔA 標(biao)(biao)準 1÷W
 (3)按細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)密度計算
NAD+ (nmol/10 4cell）=ΔA 測定÷（ΔA 標(biao)(biao)準 1÷C 標(biao)(biao)）×V 提取÷500=0.0025×ΔA 測定÷ΔA 標(biao)(biao)準 1

 NADH 含量(liang)的計(ji)算

1. 血(xue)清（漿）中(zhong) NADH 含量計算

NADH 含量(nmol/mL）=ΔA 測定÷（ΔA 標(biao)準(zhun) 2÷C 標(biao)）×V 提取÷V 血清 =12.5×ΔA 測定÷ΔA 標(biao)準(zhun) 2
2、組織(zhi)中(zhong) NADH 含量(liang)計算
(1)按(an)樣(yang)本蛋白(bai)濃度計算
NADH (nmol/mg prot）=ΔA 測(ce)定÷（ΔA 標準(zhun) 2÷C 標）×V 提取(qu)÷(V 樣品×Cpr) = 1.25×ΔA 測(ce)定÷ΔA 標準(zhun) 2
(2)按樣本鮮重計(ji)算
NADH (nmol/g 鮮重）=ΔA 測定÷（ΔA 標(biao)準 2÷C 標(biao)）×V 提(ti)取÷W=1.25×ΔA 測定÷ΔA 標(biao)準 2÷W
(3)按細菌或細胞密度計算
NADH (nmol/10 4cell）=ΔA 測定(ding)÷（ΔA 標(biao)準 2÷C 標(biao)）×V 提(ti)(ti)(ti)取(qu)÷500=0.0025×ΔA 測定(ding)÷ΔA 標(biao)準 2 C 標(biao)：NAD 或 NADH 標(biao)準溶液的濃度(du)，1.25nmol/mL；V 提(ti)(ti)(ti)取(qu)：加入(ru)提(ti)(ti)(ti)取(qu)液總體(ti)積(ji)，1mL；V 血清(qing)：提(ti)(ti)(ti)取(qu)時加入(ru)的血清(qing)體(ti)積(ji)，0.1mL；W：樣本鮮(xian)重，g；500：500 萬個細胞(bao)。

輔酶ⅠNAD(H)含量檢測試劑盒