產品名稱：氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測試劑盒

產品英文名： Oxidized Glutathione（GSSG）Assay Kit

產品貨號：BC1180     ;        產地(di)：北(bei)京市(shi)通州區馬駒橋聯東U谷8三(san)樓

產(chan)品(pin)規格：50管/48樣           產品商標(biao)：solarbio
保(bao)存與運輸(shu)：4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存；            參考價格：320
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：氧化(hua)型谷胱甘(gan)肽試劑盒|活性(xing)檢測(ce)試劑盒(he)|GSSG含量檢測|試劑盒

簡(jian)要介紹(shao)：
氧(yang)化(hua)(hua)(hua)型(xing)谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)（GSSG）是(shi)谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)（GSH）的(de)(de)氧(yang)化(hua)(hua)(hua)形式，又稱為(wei)二硫(liu)(liu)代谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)，是(shi)兩分子的(de)(de)谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)氧(yang)化(hua)(hua)(hua)而(er)成。GSSG會(hui)被谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)還原酶還原成GSH，因此機體(ti)中(zhong)(zhong)大(da)多數是(shi)以還原型(xing)形式存在。測定細(xi)胞(bao)內GSH和(he)GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能(neng)(neng)夠很好地反(fan)映(ying)細(xi)胞(bao)所處的(de)(de)氧(yang)化(hua)(hua)(hua)還原狀(zhuang)態。本試劑盒利(li)用谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)能(neng)(neng)和(he)5，5’-二硫(liu)(liu)代-雙-（2-硝基ben甲(jia)酸）（5，5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反(fan)應產生2-硝基-5-巰基ben甲(jia)酸，2-硝基-5-巰基ben甲(jia)酸在波長412nm處具有大(da)光吸收的(de)(de)特點，通過(guo)2-乙(yi)烯吡dian抑(yi)制樣品中(zhong)(zhong)原有的(de)(de)還原型(xing)谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)，然后利(li)用谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)還原酶將(jiang)GSSG還原為(wei)GSH，借此測定氧(yang)化(hua)(hua)(hua)型(xing)谷胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)的(de)(de)含量。
 

產品詳細(xi)描述
產品內(nei)容：
試劑(ji)一(yi)：液體(ti)1瓶(ping)，50ml，4℃保(bao)存。
試劑二(er)：液體1支，170μl，4℃保存(cun)。
試劑三(san)：液體1瓶(ping) 60ml，4℃保存。
試劑四：液體(ti)1瓶 8ml，4℃保(bao)存。
試劑(ji)五：粉劑1支，4℃保存，用前8ml蒸餾水溶解。溶解后-20℃分裝保存(cun)。
試劑六：液(ye)體1支，40μl，用(yong)前0.8ml蒸餾水稀釋。
標準品(pin)：粉(fen)劑1支，10mg，4℃避光保存(cun)。
產(chan)品說明(ming)：
氧(yang)(yang)化(hua)型(xing)谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)（GSSG）是(shi)谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)（GSH）的氧(yang)(yang)化(hua)形(xing)式，又稱(cheng)為(wei)(wei)二硫代谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)，是(shi)兩分子的谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)氧(yang)(yang)化(hua)而成。GSSG會被谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)還(huan)原(yuan)酶還(huan)原(yuan)成GSH，因此機(ji)體中大多(duo)數是(shi)以(yi)還(huan)原(yuan)型(xing)形(xing)式存在。測(ce)(ce)定細(xi)胞內GSH和(he)GSSG含量以(yi)及(ji)GSH/GSSG比(bi)值，能(neng)夠很好地反(fan)(fan)映(ying)細(xi)胞所處(chu)的氧(yang)(yang)化(hua)還(huan)原(yuan)狀態。本試劑盒利用谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)能(neng)和(he)5，5’-二硫代-雙-（2-硝(xiao)(xiao)基(ji)ben甲(jia)酸(suan)）（5，5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反(fan)(fan)應產生2-硝(xiao)(xiao)基(ji)-5-巰基(ji)ben甲(jia)酸(suan)，2-硝(xiao)(xiao)基(ji)-5-巰基(ji)ben甲(jia)酸(suan)在波(bo)長412nm處(chu)具有大光吸收的特點(dian)，通過2-乙烯吡dian抑制樣品中原(yuan)有的還(huan)原(yuan)型(xing)谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)，然(ran)后利用谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)還(huan)原(yuan)酶將GSSG還(huan)原(yuan)為(wei)(wei)GSH，借此測(ce)(ce)定氧(yang)(yang)化(hua)型(xing)谷(gu)胱(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)的含量。
自備儀器和(he)用品： 
分析天平、微量勻漿器（規(gui)格2ml）、低溫離心機、水浴鍋(guo)、移液器、可見分光光度計、1ml比色皿。
操(cao)作步驟：

• 樣品的處理

（1）組(zu)織處理(li)
新鮮組織(zhi)先(xian)用PBS沖洗2次(ci)，然后稱(cheng)取(qu)動物組織(zhi)或者植物組織(zhi)0.1g。加(jia)入用試劑一潤洗(xi)過的勻(yun)漿(jiang)器中(zhong)（勻(yun)漿(jiang)器提前放冰上預冷(leng)）；然后加(jia)入1ml試劑一（組織/試(shi)劑一比(bi)例保持不(bu)變即可），迅速(su)冰上充分(fen)研磨（使用液(ye)氮研磨效果更好）；10000rpm 4℃離心10min；取上清液放置于4℃待(dai)測，若暫(zan)時不能完成測試可放于-80℃保(bao)存(cun)（可保(bao)存(cun)10天）。
（2）血液處理
血(xue)漿(jiang)：將收集的抗(kang)凝血(xue)于4℃，600g離心10分鐘，吸取上層(ceng)血(xue)漿到另一支試管中(zhong)，加入等(deng)體(ti)積的試劑一，4℃，8000g離心10分(fen)鐘(zhong)，將上清(qing)移入新的試管中放(fang)置于(yu)4℃待測(ce)(ce)，若暫時(shi)不(bu)能完成測(ce)(ce)試(shi)可放于-80℃保存（可保存10天）。
血(xue)細胞：將收集(ji)的抗凝血(xue)于4℃，600g離(li)(li)心(xin)10分鐘，棄去(qu)上層血漿用3倍體積的PBS清(qing)洗(xi)3次（用PBS重懸血細胞，600g離(li)(li)心(xin)10分鐘），加入等體積試劑一，混勻后4℃放置10分鐘(zhong)，8000g離心10分鐘(zhong)，吸取上清放于4℃待測(ce)，若暫時不能完成測(ce)試可放于(yu)-80℃保存（可保存10天）。
（3）細胞(bao)處理(li)
收(shou)集不少于10⁸個(ge)細胞(bao)，先用PBS清洗(xi)細胞(bao)2次（PBS重懸細胞(bao)，600g離心10分鐘），加(jia)入(ru)3倍細胞(bao)沉淀(dian)體積的試劑一(yi)重懸細胞，反復凍(dong)融2-3次（可在液氮中(zhong)凍(dong)結(jie)，37℃水浴中溶解），8000g離心10分鐘，收集上清于(yu)4℃待測(ce)(ce)，若暫時不(bu)能完成測(ce)(ce)試可(ke)放于(yu)-80℃保存(cun)（可保存(cun)10天）。
二(er)、實驗操(cao)作：

1. 分光(guang)光(guang)度計預熱(re)30min以上，調(diao)節波長412nm，蒸餾(liu)水調(diao)零。
2. 試劑二放(fang)置37℃（哺乳動物）或25℃（一般物種）水(shui)浴中保溫30min。
3. 標(biao)準品(pin)的(de)稀釋：將標(biao)準品(pin)用(yong)1ml蒸餾水溶解(4℃保存)，濃度(du)為10mg/ml。取適(shi)當溶液配制(zhi)濃度為25μg/ml、20μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、0μg/ml的(de)標準品（試劑一(yi)十倍稀釋后進行(xing)稀釋）。
4. 取1.5ml離心管，加入100μL稀釋好的標準(zhun)品(pin)或(huo)樣品(pin)，加入2μL試(shi)劑二(er)，混(hun)勻后37℃孵育30分鐘。
5. 制作標準曲線(xian)

孵育完成后標準(zhun)管依(yi)次(ci)加入700μL試劑三，100 μL試劑(ji)四，100 μL試劑五，10 μL試(shi)劑六，迅速混勻后(hou)，測(ce)定(ding)412nm處30 s和(he)150 s光吸收(shou)A1和(he)A2。吸光度（A2-A1）為(wei)橫(heng)坐標（x），濃(nong)度為縱坐標(biao)（y）做標準曲線。

6. 樣品管依(yi)次(ci)加入(ru)700μL試劑三，100 μL試劑四，100 μL試劑五，10 μL試劑六，迅(xun)速(su)混勻后，測定412nm處30 s和150 s光吸(xi)收A1和A2，△A= A2- A1。

三、GSSG含量計算
根(gen)據標準曲線，將樣品△A帶入公式中(zhong)（x），計算(suan)出樣品濃度y（μg/ml）。
（1）按(an)蛋白濃度計(ji)算 
GSSG（μg / mg prot）=y×V 反總(zong)÷V 樣÷Cpr =y×10.12÷Cpr
（2）按(an)樣(yang)本質量計算 
GSSG（μg /g）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10.12 ÷W
（3）按細胞數量(liang)計算 
GSSG（μg /10⁴ cell）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shu)量)= y×10.12 ÷細(xi)胞數量 
（4）按液體體積計算(suan) 
GSSG（μg / mL）= y×V 反總÷V 樣= y×10
V 反總(zong)(zong)：反應(ying)總(zong)(zong)體積，1.012mL；V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 樣：加入反應體(ti)系中上清液(ye)體(ti)積，100μL=0.1 mL；W：樣品質量，g ；Cpr：上清液(ye)蛋白質(zhi)濃度，mg/mL。 
注意事項(xiang)：

1. 樣品處理需勻漿(jiang)*，若當天不能(neng)完成測量，可放-80℃保存。
2. 若不確定樣品(pin)中GSSG含量的高低(di)，可(ke)稀釋幾個(ge)梯度后再(zai)進(jin)行測量。
3. 此方法利(li)用酶促反應速率計算(suan)底物濃度，盡量準確在(zai)30秒(miao)和150秒(miao)處完成讀數。
4. 因為試劑一中含(han)有蛋白質(zhi)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。

相關文獻:
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《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448
 

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測試劑盒