β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒

產品名(ming)稱：谷(gu)胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑(ji)盒 微(wei)量法

產品(pin)英文名：Micro Glutathione S-transferase （GST）Assay Kit

產品貨(huo)號：BC0355             產地：北京(jing)市通州區馬(ma)駒橋聯東U谷(gu)8三樓

產品規格：100管/96樣       產品(pin)商標：solarbio
保存(cun)與運(yun)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考(kao)價(jia)格：650
庫存狀態：現貨                          
關(guan)鍵字：谷胱(guang)甘肽S-轉移酶| GST活性(xing)檢(jian)測|試劑盒|微量法 

簡要介紹：
GST是一種具(ju)(ju)有(you)多種生(sheng)理功能(neng)的(de)(de)(de)蛋白(bai)質(zhi)家族，主(zhu)要(yao)存在(zai)于(yu)細(xi)胞(bao)質(zhi)內(nei)。GST是體內(nei)解毒(du)酶系統的(de)(de)(de)重(zhong)(zhong)要(yao)組成部分，主(zhu)要(yao)催(cui)化(hua)各(ge)種化(hua)學(xue)物質(zhi)及其代(dai)謝產物與(yu)GSH的(de)(de)(de)巰(qiu)基共價結合(he)，使親電(dian)化(hua)合(he)物變為(wei)親水物質(zhi)，易于(yu)從(cong)膽汁或(huo)尿液中排泄(xie)，達到將體內(nei)各(ge)種潛在(zai)或(huo)具(ju)(ju)備(bei)毒(du)性的(de)(de)(de)物質(zhi)降解并排出體外的(de)(de)(de)目(mu)的(de)(de)(de)。因(yin)(yin)此，GST在(zai)保護細(xi)胞(bao)免受親電(dian)子化(hua)合(he)物的(de)(de)(de)損傷中發(fa)揮(hui)著重(zhong)(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)生(sheng)物學(xue)功能(neng)。此外，因(yin)(yin)為(wei)GST具(ju)(ju)有(you)GSH-Px活(huo)性，亦稱(cheng)為(wei)non-Se GSH-Px，具(ju)(ju)有(you)修復(fu)氧化(hua)破壞的(de)(de)(de)大分子如DNA、蛋白(bai)質(zhi)等(deng)的(de)(de)(de)功能(neng)。注意，GST催(cui)化(hua)的(de)(de)(de)反(fan)應減少(shao)GSH含量(liang)，但是不(bu)增加GSSG含量(liang)。 
產品詳細描述

商品(pin)貨號(hao)：	商品品牌：	規格	基本售(shou)價：	選擇(ze)規格
BC0355- 100管/96樣	Solarbio	100管/96樣	650.00元

產(chan)品內容： 
試劑一(yi)：液體 100mL×1 瓶(ping)，4℃保存。
試(shi)劑二：液體 22mL×1 瓶，4℃保存。
試劑(ji)三(san)：粉(fen)劑(ji)×1 瓶，4℃保(bao)存。臨(lin)用(yong)前(qian)加 2 mL 蒸餾(liu)水(shui)溶解(jie)。

產品說明： 
GST 是一種具有多種生理功(gong)能(neng)(neng)(neng)的蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)家族，主(zhu)要(yao)存在于(yu)細胞質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)內(nei)。GST 是體內(nei)解毒酶系統的 重要(yao)組成部分，主(zhu)要(yao)催化各(ge)種化學物(wu)(wu)(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)及(ji)其(qi)代謝產物(wu)(wu)(wu)與 GSH 的巰基共價(jia)結(jie)(jie)合(he)，使親(qin)電(dian)化合(he)物(wu)(wu)(wu)變為(wei)(wei) 親(qin)水物(wu)(wu)(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，易于(yu)從(cong)膽(dan)汁(zhi)或(huo)尿(niao)液中(zhong)排(pai)泄(xie)，達到將體內(nei)各(ge)種潛在或(huo)具備毒性(xing)的物(wu)(wu)(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)降解并排(pai)出(chu)體外(wai)的目(mu) 的。因(yin)此，GST 在保護細胞免受親(qin)電(dian)子化合(he)物(wu)(wu)(wu)的損傷中(zhong)發揮著重要(yao)的生物(wu)(wu)(wu)學功(gong)能(neng)(neng)(neng)。此外(wai)，因(yin)為(wei)(wei) GST 具有 GSH-Px 活(huo)(huo)性(xing)，亦(yi)稱(cheng)為(wei)(wei) non-Se GSH-Px，具有修復(fu)氧化破(po)壞的大分子如 DNA、蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)等的功(gong)能(neng)(neng)(neng)。 注意(yi)，GST 催化的反(fan)應減少 GSH 含(han)量，但(dan)是不增加 GSSG 含(han)量。 GST 催化 GSH 與 CDNB 結(jie)(jie)合(he)，其(qi)結(jie)(jie)合(he)產物(wu)(wu)(wu)的光吸收峰(feng)波長為(wei)(wei) 340nm；通過測定(ding) 340nm 波長處 吸光度上升速(su)率，即可計(ji)算出(chu) GST 活(huo)(huo)性(xing)。
自備儀器和用(yong)品： 低溫離(li)心機、水浴鍋(guo)、可調節移液器、紫外-可見(jian)分光光度計/酶標儀、微量(liang)石(shi)英比色皿(min)/96 孔 UV 板和蒸餾水。
操作(zuo)步驟： 
一、粗酶(mei)液提取：
1. 組(zu)(zu)織：按(an)照(zhao)組(zu)(zu)織質量（g）：試(shi)劑一(yi)體積(ji)(mL)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建議稱(cheng)取約 0.1g 組(zu)(zu)織，加入 1mL 試(shi)劑一(yi)）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離(li)心 10min，取上清置冰上待測(ce)。
2. 細(xi)(xi)菌、真菌：按照細(xi)(xi)胞(bao)數量(liang)（10 4個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建(jian)議 500 萬 細(xi)(xi)胞(bao)加(jia)入 1mL 試劑一），冰(bing)浴超聲波破碎細(xi)(xi)胞(bao)（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shi)間 3min）； 然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰(bing)上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
二、測定(ding)：
1. 分光光度計/酶標儀(yi)預(yu)熱 30 min 以上，調(diao)節(jie)波長到 340 nm，用(yong)蒸餾水(shui)調(diao)零。
2. 試劑二放在 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）保溫(wen)。
3. 空白管：取微(wei)(wei)量(liang)(liang)石(shi)英比色皿，加入 20μL 試(shi)劑(ji)一，180μL 試(shi)劑(ji)二和 20μL 試(shi)劑(ji)三，迅(xun)速混(hun)勻后(hou)于(yu) 340nm 測(ce)(ce)定 10 s 吸(xi)光(guang)(guang)度(du)記 A1，37℃水浴(yu) 5min 后(hou)，快速取出測(ce)(ce)定吸(xi)光(guang)(guang)度(du)記 A2。 4. 測(ce)(ce)定管：取微(wei)(wei)量(liang)(liang)石(shi)英比色皿，加入 20μL 上清液，180μL 試(shi)劑(ji)二和 20μL 試(shi)劑(ji)三，迅(xun)速混(hun)勻后(hou)于(yu) 340nm 測(ce)(ce)定 10 s 吸(xi)光(guang)(guang)度(du)記 A3，37℃水浴(yu) 5min 后(hou)，快速取出測(ce)(ce)定吸(xi)光(guang)(guang)度(du)記 A4。
三、GST 活性計算： 
a.使用微(wei)量石英比色皿測定的計算公式(shi)如下
（1）按蛋白濃度(du)計算
 活性單位(wei)定(ding)義：在 25℃或者 37℃中(zhong)，每毫克蛋白每分鐘催(cui)化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶(mei)活 性單位(wei)。
GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反(fan)總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
（2）按(an)樣本鮮重計算
活(huo)性單位定義(yi)：在 25℃或者 37℃中，每克樣(yang)品每分(fen)鐘(zhong)催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活(huo)性 單位。
GST（U/g 鮮(xian)重）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
（3）按(an)細胞數量(liang)計(ji)算
活性單(dan)位定義：在 25℃或者(zhe) 37℃中，每 10 4個細胞每分(fen)鐘催化 1μmol CDNB 與(yu) GSH 結合為一個酶 活單(dan)位。
GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(500×V 樣(yang)(yang)÷V 樣(yang)(yang)總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷500
（4）按液體(ti)體(ti)積計算(suan)
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫升液體(ti)每分(fen)鐘(zhong)催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為(wei)一個酶活 單位。
GST（U/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反(fan)(fan)(fan)總÷V 樣÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chan)物摩爾消光(guang)(guang)系(xi)數(shu)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：比色皿(min)光(guang)(guang)徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反(fan)(fan)(fan)總：反(fan)(fan)(fan)應體系(xi)總體積(ji)，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白(bai)質(zhi)(zhi)濃度（mg/mL），需要另外測(ce)定，建 議選用本公司生(sheng)產(chan)的(de) BCA 蛋白(bai)質(zhi)(zhi)濃度測(ce)定試劑盒(he)；W ：樣品質(zhi)(zhi)量，g；V 樣：加入反(fan)(fan)(fan)應體系(xi)中上清 液體積(ji)，20μL=0.02 mL；V 樣總：試劑一體積(ji)，1 mL；T：反(fan)(fan)(fan)應時間（min），5min；500：細胞數(shu)量， 500 萬(wan)。

b.使用 96 孔板測定的計(ji)算公式如下
（1）按(an)蛋白濃(nong)度計算
活性單位定義：在 25℃或(huo)者(zhe) 37℃中，每毫克(ke)蛋白每分鐘(zhong)催化 1μmol CDNB 與(yu) GSH 結(jie)合為(wei)一個(ge)酶活 性單位。
GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算(suan)
活(huo)性(xing)單(dan)位定義(yi)：在 25℃或(huo)者 37℃中，每克樣品每分鐘催(cui)化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活(huo)性(xing) 單(dan)位。
GST（U/g 鮮(xian)重）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.38×;[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
（3）按細胞數量計算
活性(xing)單位定義：在 25℃或(huo)者 37℃中，每 10 4個細胞每分鐘(zhong)催化(hua) 1μmol CDNB 與(yu) GSH 結合為一 個酶(mei)活單位。
GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷500
（4）按液體(ti)體(ti)積計算
活性單(dan)(dan)位(wei)定義：在 25℃或(huo)者(zhe) 37℃中，每毫升液體每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jie)合(he)為一個 酶活單(dan)(dan)位(wei)。
GST（U/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷;ε÷d×10 6×V 反總÷V 樣(yang)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產物摩(mo)爾消(xiao)光系數，9.6×10 3 L/mol /cm；d：96 孔板(ban)光徑(jing)，0.6cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；
V 反(fan)(fan)(fan)總(zong)：反(fan)(fan)(fan)應(ying)(ying)體系總(zong)體積(ji)(ji)，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上(shang)清液(ye)蛋(dan)白質濃(nong)度（mg/mL），需(xu)要另外測(ce)定，建 議選(xuan)用本公司生產的 BCA 蛋(dan)白質濃(nong)度測(ce)定試劑盒；W ：樣(yang)品質量；V 樣(yang)：加入反(fan)(fan)(fan)應(ying)(ying)體系中(zhong)上(shang)清液(ye) 體積(ji)(ji)，20μL=0.02 mL；V 樣(yang)總(zong)：試劑一體積(ji)(ji)，1 mL；T：反(fan)(fan)(fan)應(ying)(ying)時間（min），5min；500：細胞數量， 500 萬。
注意事項： 
1. 樣(yang)品處理等過程均需要在冰上進行(xing)，且須在當日測定酶活(huo)力(li)；
2. 細(xi)胞(bao)中 GST 活(huo)性測定(ding)時，細(xi)胞(bao)數目須在 300 萬(wan)-500 萬(wan)之(zhi)間，細(xi)胞(bao)中 GST 的提取時可加(jia)試劑一后 研磨(mo)或超聲波處理(li)，不能用細(xi)胞(bao)裂解液處理(li)細(xi)胞(bao)；
3. 測定前(qian)先用(yong) 1～2 個樣(yang)做預(yu)實(shi)驗，如 5min 內反應不成線性，須對樣(yang)品(pin)用(yong)蒸(zheng)餾水稀釋(shi)，計算結果乘 以稀釋(shi)倍數；
4. 若樣品測定吸光度大于 1，建(jian)議對樣品用蒸餾水稀(xi)(xi)釋(shi)，計算時結果乘以(yi)稀(xi)(xi)釋(shi)倍數；
5. 測定反映的溫度對測定結果有影響，請控制在 25℃或者 37℃（哺乳動物）。

相關文獻：
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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒