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蛋白定量試劑 BCA蛋白濃度測定試劑盒
貨號 ：PC0020
規格 ：500 微孔(500T)
保質期 ：有效期 1 年。

產品內容 ：

產品簡介 ：
    堿性條件下，蛋白將Cu 2+ 還原為 Cu + ， Cu + 與 BCA 試劑形成紫藍色的絡合物，測定其在 562nm 處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑 SDS，Triton X-100，Tween 不影響檢測結果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

操作說明 ：
一. 微孔酶標儀法
    1. 配制工作液：根據標準品和樣品數量，按 50 體積 BCA 試劑加 1 體積 Cu 試劑（50:1）配制成 BCA工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA 工作液室溫 24 小時內穩定。
    2. 稀釋標準品：取 10 微升 BSA 標準品用 PBS 稀釋 100 微升（樣品一般可用 PBS 稀釋） ，使終濃度為 0.5mg/ml。將標準品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20 微升加到 96 孔板的蛋白標準品孔中，加 PBS 補足 20 微升。
    3. 將樣品作適當稀釋（好多做幾個梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀釋） ，加 20 微升到 96 孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量樣品時誤差偏大，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線 1/2 后。
    4. 各孔加入 200 微升 BCA 工作液，37℃放置 15-30 分鐘。用酶標儀測定 A562nm，根據標準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時，應注意防止因水分蒸發影響檢測結果。

二. 分光光度計法
   如沒有酶標儀，可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。
步驟如下：
    1. 配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按 50 體積 BCA 試劑加 1 體積 Cu 試劑（50:1）配制成 BCA工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA 工作液室溫 24 小時內穩定。
   2. 稀釋標準品：取 100 微升 BSA 標準品用 PBS 稀釋 1ml（樣品一般可用 PBS 稀釋） ，使終濃度為0.5mg/ml。
   3. 取八支（或者更多）5ml 離心管，標上號，按下表加入試劑。
    4. 37℃放置 15-30 分鐘。用分光光度計測 562nm 處吸光值，根據標準曲線計算出蛋白濃度。

注意事項 ：
    1. 長期不用時，Cu 試劑與 PBS 稀釋液可置于 2-8℃保存，如發現細菌污染則應丟棄。BCA 試劑在低溫條件下出現結晶沉淀時，可 37℃溫育使其*溶解, 不影響使用。
    2. 樣品中若含有較多干擾物質時，請采用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。
    3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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參考文獻：
《Effect of 1α, 25-dihydroxyvitamin D3 on the osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells and the underlying regulatory mechanism》 作者:Yawen Ji，Panpan Zhang，Yixiao Xing，Linglu Jia，Yunpeng Zhang，Tingting Jia，Xuan Wu，Bin Zhao，Xin Xu 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365053
《Dexmedetomidine attenuates the neurotoxicity of propofol toward primary hippocampal neurons in vitro via Erk1/2/CREB/BDNF signaling pathways》 作者:Youbing Tu, Yubing Liang, Yong Xiao, Jing Lv, Ruicong Guan, Fei Xiao, Yubo Xie, and Qiang Xiao 期刊:Drug Design, Development and Therapy 影響因子:3.486 PMID:30858699