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過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒

產(chan)品(pin)名稱(cheng)：過氧化(hua)氫酶測(ce)定試劑盒
產品英文名(ming)：Catalase (CAT) Assay Kit
產(chan)品貨號：BC0200                          產地：北京市通州區馬駒(ju)橋聯東U谷8三樓
產品規格：50管/48樣                      產品(pin)商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；           參考(kao)價格(ge)：130
庫(ku)存狀(zhuang)態：現(xian)貨                          
關鍵字：過氧化氫酶試劑盒(he)

簡要介紹：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在(zai)(zai)于動物、植物、微(wei)生物和培(pei)養細胞中，是主要(yao)的H2O2清除酶，在(zai)(zai)活性氧清除系統中具有(you)重要(yao)作用。H2O2在(zai)(zai)240nm下(xia)(xia)有(you)特征吸收峰，CAT能夠分解H2O2，使反應溶液240nm下(xia)(xia)的吸光(guang)度(du)隨反應時間而下(xia)(xia)降(jiang)，根據吸光(guang)度(du)的變化(hua)率可計算出CAT活性。

產品詳(xiang)細描述

商品貨號：	商品品牌：	規(gui)格	基(ji)本售價：	選擇(ze)規格(ge)
BC0200-50管/48樣	Solarbio	50管/48樣	130.00元

產品內(nei)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試(shi)劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)；
試劑二：液(ye)體(ti) 100μL×3 瓶，4℃保存(cun)。

產品說明(ming)： 
CAT(EC1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是主要(yao)的(de)(de) H2O2清(qing)除(chu)酶，在活(huo) 性氧清(qing)除(chu)系統中具有重(zhong)要(yao)作用。 H2O2在 240nm 下(xia)(xia)有特征吸收(shou)峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反(fan)(fan)應溶液 240nm 下(xia)(xia)的(de)(de)吸光度(du)隨反(fan)(fan)應時 間(jian)而下(xia)(xia)降(jiang)，根據吸光度(du)的(de)(de)變化率可(ke)計算出 CAT 活(huo)性。

操(cao)作步驟： 
一、粗酶液提取： 
1、細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞或(huo)組織樣品的(de)制備 細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)或(huo)培養細(xi)(xi)(xi)(xi)胞：收集細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞到離心管(guan)內，離心后棄上清；按照(zhao)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞數量（104個）： 提(ti)取液(ye)體積（ml）為 500-1000:1 的(de)比例（建議 500 萬細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞加入 1ml 提(ti)取液(ye)），超(chao)聲波破(po)碎細(xi)(xi)(xi)(xi) 菌(jun)(jun)(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞（功率(lv) 20%或(huo) 200w，超(chao)聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fu) 30 次）；8000g4℃離心 10 分鐘(zhong)，取上 清，置冰上待(dai)測。
組(zu)織(zhi)(zhi)：按照(zhao)組(zu)織(zhi)(zhi)質量（g）：提取液(ye)體(ti)積（ml）為 1：5-10 的(de)比例（建議稱(cheng)取約 0.1g 組(zu)織(zhi)(zhi)，加(jia) 入 1mL 提取液），進行冰浴(yu)勻漿。8000g4℃離(li)心 10 分鐘，取上(shang)清，置冰上(shang)待測。
2、血(xue)清(qing)（漿）樣品：直接檢測。
二、CAT 測定操作(zuo)
1、 分光(guang)光(guang)度計預(yu)熱 30min 以上，調節波長(chang) 240nm 處，蒸餾水調零。
2、 CAT 檢(jian)測工(gong)作(zuo)液的(de)配置(zhi)：用(yong)時在每瓶試(shi)劑二（100μL）中加入 20ml 試(shi)劑一，充(chong)分混勻，作(zuo)為工(gong) 作(zuo)液；用(yong)不完的(de)試(shi)劑 4℃保存一周。
3、 測定前將(jiang) CAT 檢(jian)測工作液 37℃（哺乳(ru)動物）或(huo) 25℃（其他物種(zhong)）水浴 10min。
4、 取 1mLCAT 檢測工(gong)作液于 1mL 石英比色皿(min)中，再(zai)加入(ru) 35μL 樣(yang)本，混勻 5s；室溫(wen)下立即(ji)測定 240nm 下的初始吸(xi)光(guang)值(zhi) A1 和 1min 后的吸(xi)光(guang)值(zhi) A2。計算ΔA=A1-A2
三、CAT 活性(xing)計算：
1、 血清（漿(jiang)）CAT 活力的計算：
單(dan)位的(de)定義：每毫升血清（漿）在反應(ying)體(ti)系中(zhong)每分(fen)鐘催化(hua) 1nmolH2O2降解定義(yi)為一個(ge)酶活(huo)力單
位(wei)。CAT（U/mL）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷V 樣÷T=678×ΔA
2、 組織(zhi)、細菌或(huo)細胞(bao)中(zhong) CAT 活力計算：
（1） 按樣本(ben)蛋白濃度計(ji)算： 單位的定義：每 mg 組織(zhi)蛋白在(zai)反應體系中(zhong)每分鐘(zhong)催化(hua) 1nmolH2O2降(jiang)解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mgprot）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（V 樣×Cpr）÷T=678×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重(zhong)計算： 單(dan)位(wei)的定義：每(mei) g 組織在反應體系(xi)中每(mei)分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為(wei)一個酶(mei)活力單(dan)位(wei)。 CAT（U/g 鮮重）＝﹝ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109﹞÷（W×V 樣÷V 樣總(zong)）÷T=678×ΔA÷W
 3、 按細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞中 CAT 活力計算： 單位的定(ding)義：每(mei) 1 萬個細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞在每(mei)分鐘(zhong)反應體系中每(mei)分鐘(zhong)催(cui)化 1nmolH2O2降解定(ding)義為(wei)一個 酶活力單位。
CAT（U/104 cell）＝﹝ΔA×V 反總(zong)÷;（ε×d）×109﹞÷（500×V 樣÷V 樣總(zong)）÷T=1.356×ΔA
V 反(fan)總(zong)：反(fan)應體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積，1.035×10-3L；ε:H2O2摩(mo)爾(er)吸光(guang)系(xi)數，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿(min) 光(guang)徑，1cm；V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本體(ti)積，0.035ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提取液(ye)體(ti)積，1ml；T：反(fan)應時間，1min。 W，樣(yang)本質(zhi)量，g；Cpr：上清液(ye)蛋白濃度，mg/ml；500：細(xi)胞(bao)或細(xi)菌(jun)總(zong)數，500 萬。

過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒