抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒

產品名稱:：  抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒

產品英文名: Ascorbate Peroxidase (APX) Assay Kit

產品貨(huo)號(hao)：BC0220           產(chan)地：北京市通(tong)州區馬駒橋(qiao)聯東U谷8三樓

產(chan)品規格：50管/48樣             產品商標(biao)：solarbio
保(bao)存與運輸：4℃保(bao)存或(huo)-20℃保(bao)存；            參考(kao)價格：720
庫(ku)存狀態：現貨(huo)              ;            
關鍵(jian)字:  抗(kang)壞血酸過氧(yang)化物酶檢測(ce)試(shi)劑盒|APX檢(jian)測試劑盒|抗壞血酸過氧化物酶|試劑盒

簡要(yao)介紹：
APX 是植物清除活性氧(yang)的(de)重要抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)酶之一，也是抗(kang)壞血酸代謝(xie)的(de)關(guan)鍵酶之一。APX具有(you)多種同功酶，分別定位于葉綠體(ti)、胞質、線粒體(ti)、過氧(yang)化(hua)(hua)物和(he)(he)乙醛酸體(ti)，以及過氧(yang)化(hua)(hua)體(ti)和(he)(he)類囊體(ti)膜上。APX 催化(hua)(hua)H2O2 氧(yang)化(hua)(hua)AsA，是植物AsA的(de)主要消耗(hao)者。APX 的(de)活性直接(jie)影(ying)響到AsA 的(de)含量(liang)，在脅(xie)迫和(he)(he)解脅(xie)迫條(tiao)件下，APX 與(yu)AsA 具有(you)一定的(de)負相(xiang)關(guan)性。
    APX催化(hua)H2O2氧化(hua)AsA，通(tong)過測定AsA 的氧化(hua)速率，可計算得APX 活力。


產(chan)品詳細描述
產品內容：
試劑一：液體90mL×1瓶，4℃保存；
試(shi)劑二：粉(fen)劑×1瓶，4℃保存。臨用前(qian)加(jia)入5mL雙(shuang)蒸水充分溶(rong)解；
試劑三(san)：液(ye)體5 mL×1瓶，4℃保存。
產品(pin)說明：
APX 是植(zhi)物清除(chu)活性(xing)氧(yang)的重(zhong)要(yao)抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)酶之一，也是抗(kang)壞血(xue)酸(suan)代謝(xie)的關鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分(fen)別(bie)定(ding)位(wei)于葉綠體(ti)(ti)(ti)、胞質、線粒體(ti)(ti)(ti)、過(guo)氧(yang)化(hua)(hua)物和乙醛酸(suan)體(ti)(ti)(ti)，以及過(guo)氧(yang)化(hua)(hua)體(ti)(ti)(ti)和類(lei)囊體(ti)(ti)(ti)膜上。APX 催化(hua)(hua)H₂O₂ 氧化AsA，是植物AsA的(de)主要消耗者。APX 的(de)活性直接影響到AsA 的(de)含量，在脅(xie)迫和解脅(xie)迫條件(jian)下，APX 與AsA 具(ju)有一定的(de)負相關性。
APX催化H₂O₂氧化AsA，通過測定AsA 的氧化速(su)率(lv)，可計算得(de)APX 活(huo)力。
試(shi)驗中所需的儀器和試(shi)劑：
低溫離(li)心機、紫外分光(guang)光(guang)度(du)計、1mL石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿、移(yi)液槍、研缽、冰和蒸(zheng)餾水。
操作步(bu)驟：
一、粗酶液(ye)提取 ：   
按照組織質(zhi)量（g）：試(shi)劑一體積(mL)為(wei)1：5~10的比例（建議(yi)稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻(yun)漿(jiang)。13000g，4℃離心(xin)20min，取(qu)上(shang)清置冰上(shang)待測。
二、測定(ding)操作表：

1. 分光光度計(ji)預熱(re)30 min以上，調(diao)節波長到(dao)290 nm，用蒸餾水調(diao)零。
2. 試劑一在25℃中預熱30min以(yi)上(shang)。
3. 空白(bai)管：依次(ci)在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、700μL預熱(re)的試劑一、100μL試劑二(er)和100μL試劑三，迅速(su)混勻后在290nm測定10 s和(he)130 s光吸(xi)收(shou)A1和(he)A2，△A空白管=A1-A2。
4. 測定管：依次在(zai)1mL石英(ying)比色皿中加入100μL上清液、700μL預熱的(de)試劑一、100μL試劑二和(he)100μL試劑(ji)三(san)，迅速混勻(yun)后在290nm測定10 s和(he)130 s光吸收A3和(he)A4，△A測定(ding)管(guan)=A3-A4。

三(san)、APX 活力(li)計算(suan)：
(1) 按(an)樣本蛋白濃(nong)度計算(suan)
活性單位定義：每毫(hao)克(ke)蛋白(bai)每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/mg prot) = (△A測定(ding)管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×10⁶÷(Cpr×V樣)÷T
=1.79×(△A測定管(guan)-△A空(kong)白管) ÷ Cpr
    ε：AsA在290nm處(chu)摩爾吸光系(xi)數為2.8×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應體(ti)系總體(ti)積（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液(ye)蛋白質濃度(du)（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白(bai)質含(han)量測定試劑盒；V樣(yang)：加入反應體系中上清液體積（mL），100μL=0.1 ml；T：催(cui)化反應時(shi)間（min），2min。
（2）按樣本質量計算
單(dan)位的(de)定義：每g組織每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/g ) = (△A測定管(guan)-△A空白(bai)管(guan))÷(ε×d）×;V反總×10⁶÷(W×V樣(yang)÷V樣(yang)總)÷T
=1.79×;(△A測定管(guan)(guan)-△A空(kong)白(bai)管(guan)(guan)) ÷W
ε：AsA在290nm處摩爾吸(xi)光(guang)系(xi)數為2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿(min)光徑（cm），1 cm；V反總：反應體系總體積（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V樣：加(jia)入(ru)反應體(ti)系中上清液體(ti)積(ji)（mL），100μL=0.1 mL；V樣總：加入(ru)試劑一(yi)體積，1mL；W，樣本質量(liang)，g；T：催化反應時(shi)間（min），2min。
 

 相關文獻：

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