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土壤中性蛋白酶活性檢測試劑盒

土壤中性蛋白酶活性檢測試劑盒說明書
微量法

產(chan)地：北(bei)京市通州區(qu)馬駒橋聯東U谷8三樓(lou)
英文名稱：Soil neutral protease activity detection kit
產品商標：solarbio
注意：正式(shi)測定之前選擇2-3 個預期差異大(da)的(de)樣本(ben)做預測定。
貨號：BC0275
規格：100T/48S
保存與運輸：4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存；            
參考價格(ge)：1380
庫存狀(zhuang)態：現貨
關鍵詞：土壤中性蛋白酶|土壤中性蛋白酶活性檢測|蛋白酶活性檢測
產品內(nei)容：
試劑一：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試(shi)劑(ji)二：粉劑(ji)×1 瓶，4℃保存；臨用(yong)前加入10mL試(shi)劑一，沸水浴攪拌溶解后待用(yong)；
試劑(ji)三：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保存；臨用(yong)前加(jia)入10mL 蒸餾水充分(fen)溶解待用(yong)；
試劑四：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑五：液體(ti)5mL×1 瓶，4℃保存；
標準品：液體(ti)1mL×1 支，0.2 μmol/mL 酪氨酸溶液，4℃保存(cun)。

產品說明：
土(tu)(tu)壤(rang)(rang)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)酶(mei)參(can)與土(tu)(tu)壤(rang)(rang)中(zhong)存(cun)在(zai)的(de)(de)氨基酸、蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)以(yi)及其(qi)他(ta)(ta)含(han)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)氮(dan)的(de)(de)有(you)機化合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)轉(zhuan)化，其(qi)水解(jie)(jie)產(chan)(chan)物(wu)(wu)是(shi)高等(deng)植物(wu)(wu)的(de)(de)氮(dan)源之一。土(tu)(tu)壤(rang)(rang)中(zhong)性(xing)(xing)(xing)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)酶(mei)在(zai)中(zhong)性(xing)(xing)(xing)環境下(xia)催(cui)化蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)水解(jie)(jie)，與土(tu)(tu)壤(rang)(rang)有(you)機質(zhi)含(han)量、氮(dan)素及其(qi)他(ta)(ta)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)性(xing)(xing)(xing)質(zhi)有(you)關。中(zhong)性(xing)(xing)(xing)條(tiao)件(jian)下(xia)，土(tu)(tu)壤(rang)(rang)中(zhong)性(xing)(xing)(xing)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)酶(mei)可將酪(lao)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)水解(jie)(jie)產(chan)(chan)生(sheng)酪(lao)氨酸；在(zai)堿(jian)性(xing)(xing)(xing)條(tiao)件(jian)下(xia)，酪(lao)氨酸還(huan)原磷鉬(mu)酸化合(he)物(wu)(wu)生(sheng)成鎢藍，在(zai)680nm 有特征吸收峰。

實驗中所需儀器及設備：
可見分光(guang)光(guang)度(du)計/酶標儀、水浴(yu)鍋、可調(diao)式移(yi)液槍、微(wei)量比(bi)色皿(min)/96孔板(ban)、甲苯、蒸(zheng)餾(liu)水、50目篩（或更小）。

樣品處理(li)：
新鮮(xian)土樣(yang)自然風干或37℃烘箱風(feng)干，過30~50 目篩(shai)。

操作步(bu)驟(zou)：
1、分光光度計/酶(mei)標儀預熱30min 以上，調節(jie)波(bo)長(chang)680nm，蒸餾水(shui)調零。
2、樣本測定：
試劑(ji)名稱         測定管(guan)               對照管(guan)         標準管(guan)              空白管(guan)
風干(gan)土樣（g）      0.05                 0.05            -                   -
試劑一（μL）       50                   50             -                  ; -
試(shi)劑二（μL）       100                                 -                   -
                  混勻后(hou)，37℃反應24h，期間振(zhen)蕩5-6 次，使土樣與反應液充分接觸。
試劑三(san)（μL）       100                  100            -                   -
試劑二（μL）        -  ;                 100            -                   -
                           混勻，10000rpm 室溫離心(xin)10min，取上(shang)清液(ye)
上清液（μL）         44                   44            -                   -
標準液（μL）         -                    -             44                  -
蒸(zheng)餾水(shui)（μL）         -                    -             -                  44
試(shi)劑四（μL）        130                  130            130               130
試劑五（μL）         26                   26             26                26

混勻，40℃水浴10min，10000rpm 室(shi)溫離心10min，取上清(qing)液于680nm 下(xia)讀(du)取各管(guan)吸(xi)光值A，分別(bie)記為A 測定管(guan)、A 對照(zhao)管(guan)、A 標準管(guan)、A 空(kong)白管(guan)，計(ji)算ΔA 測定=A 測定管(guan)-A 對照(zhao)管(guan)，ΔA 標準=A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)。

注意：標準管(guan)(guan)(guan)、空白(bai)管(guan)(guan)(guan)只需測(ce)一次。每個(ge)測(ce)定管(guan)(guan)(guan)設(she)一個(ge)對(dui)照(zhao)管(guan)(guan)(guan)。

土壤中(zhong)性蛋白酶活性計算(suan)：
單位定義：每天每g土樣(yang)中(zhong)產(chan)生1μmol 酪(lao)氨酸(suan)為(wei)一個土壤中(zhong)性(xing)蛋白(bai)酶活力單位。土壤中(zhong)性(xing)蛋白(bai)酶(U/g)=C標(biao)準×ΔA測定÷ΔA標(biao)準×V 反總÷W÷T= 0.05×ΔA測定÷ΔA標(biao)準÷W。
C 標(biao)準(zhun)管(guan)：標(biao)準(zhun)管(guan)濃度，0.2 μmol/mL；
V 反總：反應體系總體積，0.25mL；
T：反應(ying)時間，1d；
W：樣本質量，g。

注(zhu)意事項：
1、當(dang)吸光值大(da)于1.5時，建議(yi)將(jiang)上清液稀釋后(hou)進行測定，計(ji)算時注意乘(cheng)以稀釋倍(bei)數。
 

 相關文獻：

《Evaluating the effects of phytoremediation with biochar additions on soil nitrogen mineralization enzymes and fungi》 作者:Manyun Zhang,Jun Wang, Shahla Hosseini Bai, Ying Teng,Zhihong Xu 期(qi)刊(kan):Environmental Science and Pollution Research 影響因子:2.914 PMID:29860689