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脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒 微量法

產品(pin)規(gui)格：100管(guan)/96樣(yang)       產品商標：solarbio
保(bao)存與運(yun)輸：4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存；            參考價格：1400
庫存狀態：現貨                          

簡要介紹：
Pro 廣(guang)泛存在于動物(wu)、植(zhi)物(wu)、微生(sheng)(sheng)物(wu)和培養細胞中，逆(ni)境(jing)條件下，植(zhi)物(wu)體內Pro 含(han)量(liang)顯著增(zeng)加。Pro 增(zeng)加量(liang)在一(yi)定程度上反映了抗逆(ni)性，抗旱性強的品種往(wang)往(wang)積累(lei)較多的脯(fu)氨(an)酸。因此，脯(fu)氨(an)酸增(zeng)加量(liang)可以(yi)作為抗逆(ni)育種的生(sheng)(sheng)理指標之一(yi)。
用磺(huang)基(ji)水楊酸(suan)（SA）提取Pro，加(jia)熱處理后，Pro 與酸(suan)性(xing)茚三酮(tong)溶液反應(ying)生(sheng)成(cheng)紅色；加(jia)甲苯萃取后，在520nm 測定(ding)吸光(guang)度(du)。

產品詳細描述
產品內容：
提取液(ye)：液(ye)體100mL×1瓶(ping)，4℃保(bao)存。
試劑一：冰乙酸4℃保(bao)存。（自備）
試(shi)劑二：液體35 mL×1瓶， 4℃保(bao)存。
試劑三(san)：甲苯4℃保(bao)存。（自備(bei)）
標(biao)準品(pin)：粉劑(ji)×1支，脯氨酸10mg，4℃保存。

產品說(shuo)明：
脯氨(an)酸(Pro)廣泛(fan)存(cun)在于動物(wu)、植(zhi)物(wu)、微生物(wu)和培(pei)養細胞中，逆境條件下，植(zhi)物(wu)體內Pro含量顯著增加。Pro增(zeng)加(jia)量在一定程度上(shang)反(fan)映了抗(kang)逆(ni)性，抗(kang)旱(han)性強的(de)品(pin)種往往積累(lei)較多的(de)脯氨(an)酸。因此，脯氨(an)酸增(zeng)加(jia)量可(ke)以作為(wei)抗(kang)逆(ni)育種的(de)生理指標之一。 
用磺基水楊酸（SA）提(ti)取Pro，加(jia)熱處(chu)理后，Pro與(yu)酸性茚三酮溶液反應生成紅色；加(jia)甲苯萃取后(hou)，在520nm測定吸光度(du)。
實驗需自備的儀器和用(yong)品：
可見分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計/酶標(biao)儀、水浴鍋、臺式離(li)心機、可調式移液器、微量比色皿/96孔板、冰(bing)乙酸(suan)、甲苯、研缽、冰(bing)和蒸餾水。

操作步驟：
一、樣品測定的準備 
1、細(xi)胞、細(xi)菌或組織樣品的(de)制備 ： 
細(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：先收集細(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)到離心管內(nei)，棄上(shang)清；按(an)照每100萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xi)菌或細(xi)胞（功率(lv)20％，超聲3秒(miao)，間隔10秒，重(zhong)復30次），之后置(zhi)沸水浴振蕩提(ti)取10min；10000g，常溫(wen)離(li)心(xin)10min，取上清(qing)，冷卻后待測。
組織：稱取(qu)約0.1g組織，加入1mL提取(qu)液進行冰浴勻漿；之后置(zhi)沸水浴振蕩提取(qu)10min，10000g，常(chang)溫(wen)離心(xin)10min，取上清，冷卻后待(dai)測。
2、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）樣品：取100μL血清（漿）加入0.9mL提取液，充分混勻(yun)，之后置沸水浴振(zhen)蕩(dang)提取10min，10000g，常溫離(li)心10min，取上(shang)清(qing)，冷卻(que)后待測。
3、標(biao)準品(pin)的處理：稱取1mg，將標準品(pin)稀(xi)釋為15、10、8、6、4、2、1、0 μg/mL。
 

• 測定(ding)步驟

1、分光光度計預熱(re)30min以上，調節波長(chang)520nm，甲苯調零。
2、取0.5mL上清液（或稀釋后的標準(zhun)品(pin)）+0.5mL試劑一+0.5mL試(shi)劑二于有蓋試(shi)管(guan)中，置沸水浴中保溫30min（蓋緊，防(fang)止水分散失(shi)），每10min振蕩一次。
3、待冷卻后，在試管中加入(ru)1mL試劑三，振蕩30s，靜置片(pian)刻，使(shi)色素轉試劑三中(zhong)；吸取0.8mL-1mL上(shang)層(ceng)溶液于1mL玻璃(li)比色皿中，于520nm波(bo)長處比色，記錄吸(xi)光值(zhi)。
4、根據標準品吸光值和(he)濃度，建立標準曲線。

三(san)、Pro含量計算：
1、通過標(biao)準曲線(xian)計算樣品脯氨酸含量(y為脯(fu)氨酸含量，μg/mL；x為OD值(zhi))
2、按(an)照細菌(jun)、細胞(bao)個數或(huo)者組織鮮(xian)重計算，先(xian)根據標準(zhun)曲線求得y值：
細胞或細菌中脯氨酸含量(μg/10⁴ cell)= y÷細胞濃度(10⁴ cell/mL)
Pro含量(μg/g mass) =y÷樣本鮮重(g/mL)
3、血清（漿）中(zhong)脯氨(an)酸含量，先根據標準曲線求得y值：
Pro含量[μg/mL血清(qing)（漿）] = y÷0.1mL血清（漿）/mL
注意(yi)：提取(qu)液(ye)中含有蛋(dan)白(bai)沉淀(dian)劑，提取(qu)的上清(qing)液(ye)不能用于蛋(dan)白(bai)濃度(du)的測(ce)定。

相關文獻：

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《Physiological and transcriptomic analysis revealed the involvement of crucial factors in heat stress response of Rhododendron hainanense》 作者:Ying Zhao,Wengang Yu,Xiangyu Hu,Youhai Shi,Yu Liu,Yunfang Zhong,Peng Wang,Shuya Deng,Jun Niu,Xudong Yu 期刊:Gene 影響因子:2.638 PMID:29604462

 

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