β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性檢測試劑盒

產品名稱: β-半乳(ru)糖苷酶(β-GAL)活性檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

產品(pin)英文名:  β-galactosidase（β-GAL）Assay Kit

產品貨號：BC2580           產地：北京市通州區馬駒橋聯(lian)東U谷8三樓

產(chan)品規格：50管/24樣             產品(pin)商標：solarbio
保存(cun)與運輸：4℃保存(cun)或(huo)-20℃保存(cun)；            參考價格：750
庫存(cun)狀態：現貨         ;                 
關鍵字: β-半乳糖(tang)苷酶檢測(ce)試劑盒(he)|β-GAL檢測試劑盒|β-半乳糖苷酶|試(shi)劑盒

簡要介紹：
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于(yu)動物(wu)、植(zhi)物(wu)、微生物(wu)和(he)培養(yang)細(xi)胞(bao)中，能夠(gou)催化(hua)β半(ban)(ban)乳(ru)(ru)(ru)糖(tang)苷化(hua)合(he)物(wu)中β半(ban)(ban)乳(ru)(ru)(ru)糖(tang)苷鍵水解，此外還具有轉半(ban)(ban)乳(ru)(ru)(ru)糖(tang)苷的(de)作用。β-GAL不僅可為植(zhi)物(wu)的(de)快速生長釋放儲存的(de)能量，還能在正常的(de)多糖(tang)代謝、細(xi)胞(bao)壁組(zu)分代謝以及衰(shuai)老(lao)時(shi)細(xi)胞(bao)壁降解過程(cheng)中催化(hua)多糖(tang)、糖(tang)蛋白以及半(ban)(ban)乳(ru)(ru)(ru)糖(tang)脂(zhi)末端半(ban)(ban)乳(ru)(ru)(ru)糖(tang)殘基(ji)的(de)水解，釋放自由的(de)半(ban)(ban)乳(ru)(ru)(ru)糖(tang)。
β-GAL 分解對-硝基ben-β-D-吡喃(nan)半(ban)乳糖苷生成對-硝基ben酚，后者在(zai)400nm 有大吸(xi)收峰，通(tong)過測定吸(xi)光值升高速率(lv)來計(ji)算β-GAL 活性。

產品詳細描(miao)述
產品內容：
提(ti)取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑(ji)一：粉(fen)劑(ji)×1 瓶，-20℃保存；臨用(yong)前每(mei)瓶(ping)加入5mL 蒸餾(liu)水，充分溶(rong)解備用(yong)；用(yong)不完(wan)的試劑仍-20℃保(bao)存。
試劑二：液(ye)體15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體80mL×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存。
標準液：液體(ti)1ml×1支(zhi)，4℃保存，5μmol/ml對硝基ben酚溶液。

產品(pin)說明：
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣(guang)泛存在(zai)于動(dong)物、植(zhi)物、微(wei)生(sheng)物和培養細(xi)(xi)胞中，能(neng)夠催化(hua)β半(ban)乳(ru)糖苷(gan)(gan)(gan)化(hua)合(he)物中β半(ban)乳(ru)糖苷(gan)(gan)(gan)鍵水(shui)解(jie)，此外還具有轉半(ban)乳(ru)糖苷(gan)(gan)(gan)的(de)(de)作用。β-GAL不僅可為植(zhi)物的(de)(de)快速(su)生(sheng)長釋放儲存的(de)(de)能(neng)量(liang)，還能(neng)在(zai)正常的(de)(de)多糖代謝、細(xi)(xi)胞壁組分代謝以(yi)及衰老(lao)時細(xi)(xi)胞壁降解(jie)過程中催化(hua)多糖、糖蛋白以(yi)及半(ban)乳(ru)糖脂末端半(ban)乳(ru)糖殘基的(de)(de)水(shui)解(jie)，釋放自由的(de)(de)半(ban)乳(ru)糖。
β-GAL 分(fen)解對-硝(xiao)基(ji)ben-β-D-吡喃半乳糖(tang)苷生成對-硝(xiao)基(ji)ben酚，后者在400nm 有大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來(lai)計(ji)算β-GAL 活(huo)性(xing)。

需自備的儀器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：
可見分光光度(du)計(ji)、臺式離心機、水浴鍋、可調(diao)式移液器、1mL 玻璃(li)比色皿、研缽(bo)、冰和(he)蒸餾(liu)水。
操(cao)作步驟(zou)：
一、粗酶液(ye)提取：

1. 細(xi)(xi)菌或(huo)(huo)培養細(xi)(xi)胞：先收集(ji)細(xi)(xi)菌或(huo)(huo)細(xi)(xi)胞到(dao)離(li)心(xin)管內，離(li)心(xin)后棄上清；按照細(xi)(xi)菌或(huo)(huo)細(xi)(xi)胞數量(liang)（10⁴ 個(ge)）：提取液(ye)體積(ji)（mL）為500~1000：1 的比(bi)例(li)（建議500 萬細菌或(huo)細胞(bao)加入(ru)1mL 提取液(ye)），超聲波破碎細菌或(huo)細胞(bao)（冰浴，功率20％或(huo)200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次）；15000g 4℃離(li)心10min，取上清(qing)，置冰(bing)上待測(ce)。
2. 組織(zhi)：按照組織(zhi)質量（g）：提取(qu)液體積(mL)為1：5~10 的比例（建(jian)議稱取(qu)約0.1g 組織(zhi)，加入(ru)1mL 提取(qu)液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離(li)心10min，取上清，置冰上待(dai)測。
3. 標準液的處理：用試劑二將標準液稀釋200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml.

• 測定步驟
• 分光光度計或酶(mei)標儀預熱(re)30min以(yi)上，調節(jie)波長400nm，蒸餾水(shui)調零。
• 樣本(ben)測定(ding)，（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：

充分混勻(yun)，室溫(wen)靜置2min后(hou)， 400nm處測(ce)定吸光值A。△A=A測定管-A對(dui)照(zhao)管

β-GAL 活性計算：
根據標準(zhun)管的吸(xi)光度（x）和濃度（y，nmol/ml）建立標準(zhun)曲線，將△A帶入標準(zhun)曲線中，計算(suan)樣(yang)品生(sheng)成的產(chan)物量（nmol/ml）。

1. 按樣(yang)本蛋(dan)白濃(nong)度計算：

單(dan)位的定義：每(mei)mg 組織(zhi)蛋白每(mei)小時產生1nmol 對-硝(xiao)基ben酚定義為(wei)一個酶活力單(dan)位。
β-GAL 活力(li)(nmol/h /mg prot)=(y×V 反總)÷(V 樣×Cpr)÷T
=20×y÷Cpr
需要另外測定，建議使(shi)用本公(gong)司BCA 蛋白質(zhi)含量測定試劑盒(he)。

1. 按(an)樣(yang)本鮮重計算(suan)：

單(dan)位的定(ding)(ding)義(yi)：每(mei)(mei)g 組織每(mei)(mei)小時產生(sheng)1nmol 對-硝基ben酚(fen)定(ding)(ding)義(yi)為一個(ge)酶活力(li)單(dan)位。
β-GAL 活力(nmol/h /g 鮮重)＝(y×V 反總(zong))÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T
=20×y ÷W

1. 按細菌或(huo)細胞(bao)密度計算：

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每1 萬(wan)個細菌或細胞(bao)每小(xiao)時(shi)產生1nmol 對-硝基ben酚定(ding)義(yi)為一(yi)個酶(mei)活(huo)力(li)單位(wei)。
β-GAL 活力(nmol/h /10⁴ cell)= (y×V 反總)÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T
=0.04×y
Cpr：樣(yang)(yang)本(ben)蛋(dan)白質濃(nong)度，mg/mL；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系總(zong)體(ti)積，0.5mL；V 樣(yang)(yang)：加入反(fan)應(ying)體(ti)系中樣(yang)(yang)本(ben)體(ti)積，0.05mL；V 樣(yang)(yang)總(zong)：加入提(ti)取液體(ti)積，1mL；W：樣(yang)(yang)本(ben)質量，g； 500：細(xi)胞或細(xi)菌總(zong)數(shu)，500 萬(wan)；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，0.5h。


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