產品名稱：E010050 Uracil-DNA Glycosylase 尿嘧啶(ding)糖基化酶
產品型號：
產品報價：
產品特點：E010050 Uracil-DNA Glycosylase 尿嘧啶糖基化酶 其作用原理基于：如果在PCR反應中以dUTP替代dTTP摻入DNA中，形成了含dU堿基的PCR擴增產物，該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基的糖苷鍵，降解該PCR擴增產物。
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產品介紹：
尿(niao)嘧啶(ding)DNA糖(tang)苷酶（UNG）來源于(yu)大腸桿菌重組克(ke)隆表達，分子量為(wei)25kDa，可(ke)催化含尿(niao)嘧啶(ding)的(de)(de)單(dan)(dan)鏈和雙鏈DNA釋放(fang)游(you)離尿(niao)嘧啶(ding)。UNG酶對RNA無活性，主要應(ying)用于(yu)PCR擴增產(chan)物的(de)(de)防污染。其(qi)作用原理基(ji)于(yu)：如(ru)果在PCR反(fan)應(ying)中(zhong)以dUTP替(ti)代dTTP摻入(ru)DNA中(zhong)，形成了(le)含dU堿基(ji)的(de)(de)PCR擴增產(chan)物，該酶能選擇(ze)性斷裂單(dan)(dan)鏈和雙鏈DNA中(zhong)U堿基(ji)的(de)(de)糖(tang)苷鍵(jian)，降解(jie)該PCR擴增產(chan)物。
規格：1U/μl
儲存緩沖(chong)液：
20mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，150mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，0.05% Tween20，50%glycerol.
試劑組成：
10×Reaction Buffer：200mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，100mM NaCl，10mM EDTA，1mg/ml BSA.
活性定義：
37℃條件下，1小時降解1μg含dU堿基的(de)單鏈DNA的酶量為1單位。
保(bao)存條件：
每(mei)天或每(mei)周使用保存于(yu)-20℃。長期儲存應保存于(yu)-70℃保存，并嚴格避免-70℃保存時反復凍融。
質(zhi)量控制：
1、SDS-PAGE電泳(yong)純度大于98%；
2、1U UNG在(zai) 37℃處(chu)理3分鐘后，103拷貝以下含(han)U模(mo)版(ban)應*降解，不能產生(sheng)擴增產物。
3、無核(he)酸(suan)外切(qie)(qie)酶和(he)核(he)酸(suan)內(nei)切(qie)(qie)酶活性、RNase酶活性；
（1）SDS-PAGE 銀染(ran)純(chun)度大(da)于98%
（2）UNG 酶消化(hua)能力試驗
以(yi)700bp含(han)(han)dUTP的不同拷貝(bei)數(shu)基因片段(duan)為(wei)模板，分別(bie)加(jia)入含(han)(han)0.5U UNG酶的50μl PCR反應體系，50℃ 消(xiao)化2min，94℃ 滅活4min后進行PCR擴增反應。
A. Biori UNG
B. Promega UNG
Lane 1：Negative control （no template）；
Lane 2：positive control（no UNG）；
Lane 3~lane 10: 103 to 1010 copies of template
結果表明，我們的UNG酶與Promega UNG酶消化效(xiao)果相當(dang)，均可(ke)以(yi)有效(xiao)控制108拷貝以(yi)下含有(you)U-DNA的(de)模板(ban)的(de)污染(ran)。
（3）UNG酶穩定性實(shi)驗
將(jiang)UNG酶置于(yu)37℃進行(xing)7天加速試驗。以含dUTP的（106、107、108、109 copies/ml）基因為模板，采用含dUTP的體(ti)(ti)系進行(xing)PCR擴增，50μl反(fan)應體系(xi)加(jia)入0.5U UNG酶，于50℃消化2min，94℃滅活(huo)4min；然后進行(xing)PCR擴增反(fan)應。以Promega公司UNG酶為(wei)對照，考(kao)察UNG酶對模板的消化效果。
1：negative（No template）；
2～9：postive （104、105、106、107、108、109、1010、1011 copies /ml， No UNG）；
10～14：control Promega UNG（106、107、108、109、1010 copies /ml）；
15～19：Sample UNG（106、107、108、109、1010 copies/ml）。
1～4：Sample UNG（106、107、108、109 copies/ml）；
5～8：Control Promega UNG（106、107、108、109 copies/ml）；
9：negative （No template）；
10～13：Postive （106、107、108、109 copies/ml，No UNG）。
結果(guo)表(biao)明，我們的UNG酶與Promega UNG酶穩定性(xing)相當，均可(ke)以(yi)在(zai)37℃加速7天，仍保(bao)持對107copies/ml含dUTP模板的消除能力。
反(fan)應條件：
Component | Volumeper Reaction（μl） | Concentration in Master Mix |
Template | * | < 1μg/reaction |
Primer1 | 1~5 | 0.2~1.0μM |
Primer 2 | 1~5 | 0.2~1.0μM |
d NTPs （replace dTTP for 150μM~600μM dUTP） | 1 | 150μM （dATP、dGTP、dCTP） |
10×PCR Buffer | 5 | 1× |
25mM MgCl2 | 2~8 | 1.0~4.0mM |
Taq（5U/μl） | 0.25 | 1.25U |
UNG（1U/μl） | 0.25 （0.1~0.5） | 0.25U （0.1~0.5U） |
H2O | * | —— |
Total volume | 50μl |
1、Incubate ;the product for 2 min at 50℃；
2、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.
注意事(shi)項：
1、避免多次凍融，切(qie)勿暴露在溫度波(bo)動(dong)較大之處。溫度波(bo)動(dong)對產品的穩定(ding)性有(you)極大影響。
2、尿嘧啶DNA糖基(ji)酶可以在PCR反應前清除(chu)不(bu)慎(shen)污染的U-DNA分子。為有(you)效防止污染，一個實驗室必須在所有(you)的PCR反應中均使(shi)用dUTP作(zuo)為dNTPs組(zu)分之(zhi)一進(jin)行擴增(zeng)，使所有(you)擴增(zeng)產物都成為(wei)U-DNA。
3、由于不同基因(yin)堿基組(zu)成(cheng)不同，因(yin)此(ci)有些基因(yin)對UNG酶殘留活性十分敏(min)感，如發現使用UNG 酶(mei)影(ying)響擴(kuo)增(zeng)靈敏度，可以嘗試降(jiang)低UNG酶的用量或(huo)對反(fan)應體系中(zhong)dTTP與dUTP的比(bi)例進行調整(zheng)。推(tui)薦(jian)使用我公司生產(chan)的TS-UNG，該酶滅活更(geng)加*，可以(yi)大大簡(jian)化上述試驗過程。
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