產品名稱:E010100 TS-UNG 溫(wen)度敏感型UNG酶
產品型號:
產品特點:E010100 TS-UNG 溫度敏感型UNG酶 產品介紹TS-UNG酶基因來源于低溫微生物,經大腸桿菌重組表達獲得的新型溫度敏感型UNG酶。該酶與常規UNG酶相同,能夠催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶,對RNA無活性,主要應用于PCR擴增產物的防污染。
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E010100 TS-UNG 溫度敏感型UNG酶
產品介(jie)紹(shao):
TS-UNG酶基因來源于低溫微生物,經大腸桿菌重組表達獲得的新型溫度敏感型UNG酶。該酶與常規UNG酶相同,能夠催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶,對RNA無活性,主要應用于PCR擴增產物的防污染。TS-UNG酶與常規UNG酶相比,對溫度敏感、易于滅活,從而避免了常規UNG酶滅活后殘留活性對熒光PCR靈敏度及擴增產物的降解作用。
TS-UNG酶可以在25℃~50℃范圍內使用,在37℃左右具有大(da)反應(ying)活(huo)性。建議在37℃,10min消化含dUTP模板,在50℃,10min或95℃,2min進行滅活。利用TS-UNG酶低溫消化、低溫滅活的特性,TS-UNG酶可以用于RT-PCR防止擴增污染。
活性定義(yi):
37℃條件下,1小時降解1μg含dU堿(jian)基的(de)單鏈DNA的(de)酶量為1單位(wei)。
規格:1U/μl
儲(chu)存緩沖(chong)液:
20 mM Tris-HCl,pH 7.5(25℃),100 mM NaCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.1% Triton X-100,50% glycerol.
保(bao)存條件:
保(bao)存于-20℃。并避免(mian)保(bao)存時反復凍(dong)融(rong)。
反應(ying)條件:
1、反應體(ti)系(xi):
Component | Volume per Reaction(μl) | Concentration in Master Mix |
Template | * | < 1μg/reaction |
Primer 1 | 1~5 | 0.2~1.0μM |
Primer 2 | 1~5 | 0.2~1.0μM |
d NTPs (replace dTTP for 200μM~600μM dUTP) | 1 | 200μM(dATP、dGTP、dCTP) |
10×PCR Buffer | 5 | 1× |
25mM MgCl2 | 2~8 | 1.0~4.0mM |
Taq(5U/μl) | 0.25 | 1.25U |
TS-UNG(1U/μl) | 0.2~0.5 | 0.2~0.5U |
H2O | * | —— |
Total volume | 50μl |
2、Incubate the product for 10min at 37℃;
3、Inactivate TS-UNG by heating to 50℃ for 10min,or 95℃ for 2min;
質量控制:
1、SDS-PAGE電泳純度大于98%;
2、無核酸外切酶(mei)和核酸內切酶(mei)活性、RNase酶(mei)活性;
注意(yi)事項:
1、由于不同目的(de)基因堿基組(zu)成不同,因此對TS-UNG酶的(de)敏感(gan)度也不同,建議根據試驗(yan)結果,在0.2~0.5U之間(jian)選擇TS-UNG適(shi)合用量。
2、避免(mian)多次凍融,切(qie)勿暴露在溫度(du)波(bo)動(dong)較大之處。溫度(du)波(bo)動(dong)對(dui)產品的穩定性有(you)(you)極(ji)大影響。3、TS-UNG酶可以在PCR反應(ying)前清除不(bu)慎(shen)污(wu)染的U-DNA分子。為(wei)有(you)(you)效防止污(wu)染,一個實驗室必須(xu)在所(suo)有(you)(you)的PCR反應(ying)中均使(shi)(shi)用dUTP作為(wei)dNTPs組分之一進行擴(kuo)(kuo)增(zeng),使(shi)(shi)所(suo)有(you)(you)擴(kuo)(kuo)增(zeng)產物都成(cheng)為(wei)U-DNA。
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