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植物氨態氮檢測試劑盒

植物氨態氮檢測試劑盒

植物氨態氮含量檢測試劑盒說明書
可見(jian)分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度法
英文名稱：Plant ammonia nitrogen content detection kit
關鍵詞：植物氨態氮|植物氨態氮檢測|植物氨態氮測定|氨態氮
注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
貨(huo)號：BC1520
規格：50T/48S

產品內容：
提取液：液體 60mL×1 瓶(ping)，4℃保存。
試劑一：粉(fen)劑×1 瓶，4℃保存，臨用(yong)前將試劑三倒入使其充分(fen)溶(rong)解備(bei)用(yong)。該試劑溶(rong)解后 10 天內有效。
試(shi)劑二：粉劑×2 瓶(ping)，4℃避光(guang)保(bao)存。臨用前加(jia) 2mL 蒸餾水充分溶解(jie)。
試(shi)劑(ji)三(san)：液體(ti) 45mL×1 瓶，4℃保存。
標準(zhun)品：粉劑×1 支，10mg 半胱氨酸，4℃避光保存。臨用前加入 1.157mL 提(ti)取液，得到 1000μg/mL氮標準(zhun)液。

產品說明：
氮素是構成生(sheng)物(wu)體的一種必需(xu)元素。銨態氮進入植(zhi)物(wu)細胞后形(xing)成氨基酸或酰(xian)胺，植(zhi)物(wu)組織氨氮含量可反映(ying)植(zhi)物(wu)受(shou)脅迫的程度。
氨(an)基酸的α-氨(an)基可(ke)與水合(he)茚三(san)酮(tong)反應，產生藍紫(zi)色化合(he)物(wu)，在(zai) 570 nm 有特征(zheng)吸(xi)收峰；通過測定570 nm 吸(xi)光度，來計算(suan)氨(an)基酸含(han)量。

試驗(yan)中所需(xu)的儀器和(he)試劑：
可(ke)見分光光度計、臺式離心機、水浴(yu)鍋、1mL 玻璃比色皿、可(ke)調式移液槍、研缽/勻漿(jiang)器、無(wu)水乙(yi)醇、冰和(he)蒸餾水。

操(cao)作(zuo)步驟：
一、粗酶(mei)液提取(qu)：
按照質量(liang)（g）：提取(qu)液體(ti)積(mL)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建議(yi)稱取(qu)約 0.1g，加入 1mL 提取(qu)液）加入提取(qu)液，室(shi)溫勻漿后于 25℃，12000g 離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清待測。
二(er)、測定步驟：
1、 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長(chang) 570nm，蒸餾水調零。
2、 將 1000μg/mL 氮標(biao)準液用(yong)提(ti)取液分別(bie)稀釋(shi)為 200、100、50、25、12.5μg/mL。
3、 操作表：
試劑名稱（μL） 測定管(guan) 標準管(guan) 空白管(guan)
樣本(ben)              50     -       -
標(biao)準品            -      50      -
蒸餾水(shui)            -       -      50
試劑一            500    500    500
無水乙(yi)醇          500    500    500
試劑(ji)二             50     50     50
混勻后蓋緊瓶蓋封(feng)口膜封(feng)口（防止水分散(san)失），置于(yu)(yu)沸水浴中保溫(wen) 10 min，冷卻后反復顛倒 EP管(guan)數次，將測定管(guan) 8000rpm 離心 5min 后取上清，于(yu)(yu) 570nm 測定吸光值。顯色后務必在(zai) 30min 內測完。計算△A=A 測定管(guan)-A 空白管(guan)，△A 標(biao)準(zhun)=A 標(biao)準(zhun)管(guan)-A 空白管(guan)。
三(san)、植物氨(an)態(tai)氮含量計算：
1、標準曲線的繪制
以各個(ge)氮(dan)標(biao)(biao)準(zhun)液為(wei)橫(heng)坐標(biao)(biao)，其對應的△A 標(biao)(biao)準(zhun)為(wei)縱坐標(biao)(biao)，建立(li)標(biao)(biao)準(zhun)曲線，得到標(biao)(biao)準(zhun)方程 y=kx+b，將△A 帶入方程中，得到 x (µg/mL)
2、NH3-N 含量的計算(suan)
（1）按樣本(ben)鮮重計算
NH3-N 含量(liang)（µg /g FW）=x×V 提(ti)取÷W= x÷W。
（2）按蛋白濃(nong)度(du)計算
NH3-N 含(han)量（µg/mg prot）=x×V 提(ti)(ti)取÷（Cpr×V 提(ti)(ti)取）= x÷Cpr。
W：樣品(pin)質量，g；
Cpr：蛋白濃度，mg/mL；
V 提(ti)取：樣(yang)品提(ti)取液總體(ti)積，1mL。
注意事項：
為保證實驗結果的(de)準確性(xing)，需先取 1-2 個樣做預實驗，如(ru)果測定的(de)吸光值(zhi)過高(gao)（高(gao)于 1），用提取液稀(xi)釋后再(zai)測定。

相關文獻：
《SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses》 作者:Fu-Yuan Zhu,Mo-Xian Chen,Wai-Lung Chan,Feng Yang,Yuan Tian,Tao Song,Li-Juan Xi,Ying Zhou ,ShiXiao,Jianhua Zhang,Clive Lo 期刊:Journal of Proteomics 影響(xiang)因子:3.537 PMID:30048775