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ATP含量檢測試劑盒 微量法

ATP 含量檢測試劑盒說明書
微量法

產地(di)：北京市(shi)通(tong)州(zhou)區馬駒橋聯東U谷8三樓(lou)
英文名稱:ATP content detection kit
產品商標：solarbio
注意：正(zheng)式測定前務(wu)必取(qu)2-3 個預期差異(yi)較大的樣(yang)本做預測定。
貨號：BC0305
規格：100T/96S
保存與(yu)運輸：4℃保(bao)存或(huo)-20℃保(bao)存；        ;    
參考價(jia)格：1560
庫存狀態：現貨
關鍵詞：ATP含量檢測|ATP含量|ATP|

產品內容：
提取液：液體100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1 瓶，4℃保(bao)存；
試(shi)劑二：粉劑×1 瓶(ping)，4℃保存。臨用(yong)前加(jia)入3.5mL 蒸餾水充分(fen)溶(rong)(rong)解，可加(jia)熱促進溶(rong)(rong)解；
試劑三(san)：液(ye)體4mL×1 瓶(ping)，4℃保存；
試劑(ji)四(si)：粉劑(ji)×1 支，-20℃保(bao)存。臨用前每(mei)支加入0.4mL 蒸餾水溶解，可分裝后-20℃保(bao)存，避免反復凍融(rong)；
試劑五(wu)：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用(yong)前加入1mL 蒸餾(liu)水；
試劑六：粉(fen)劑×1 支，-20℃保存(cun)。臨用前加入0.5mL 蒸餾水備用，可分裝后-20℃保存(cun)，避(bi)免反復凍(dong)融(rong)；
標準品：粉劑×1 支，-20℃保存。5mg ATP，臨用前(qian)加入0.826mL 蒸餾水配成10μmol/mL 的ATP標準溶液。

產品說(shuo)明：
ATP 廣(guang)泛存(cun)在于(yu)動物(wu)、植物(wu)、微生物(wu)和(he)培(pei)養細胞(bao)中，是(shi)(shi)生物(wu)能量通貨(huo)，能荷是(shi)(shi)描述細胞(bao)能量代(dai)謝(xie)狀態的主要參數。測定ATP 含量并且計算能荷，能夠(gou)反映能量代(dai)謝(xie)狀態。
HK 催化葡(pu)(pu)(pu)萄糖和ATP 合成(cheng)6-磷酸(suan)葡(pu)(pu)(pu)萄糖，6-磷酸(suan)葡(pu)(pu)(pu)萄糖脫(tuo)氫酶進一步(bu)催化6-磷酸(suan)葡(pu)(pu)(pu)萄糖脫(tuo)氫生成(cheng)NADPH，NADPH 在340nm 有特征(zheng)吸收峰(feng)，NADPH 和ATP 含量(liang)成(cheng)正比，以此反應(ying)ATP 含量(liang)。

自(zi)備儀器和用品(pin)：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴(yu)鍋、可調(diao)式(shi)移液槍(qiang)、微量石英比色皿/ 96 孔UV 板、研缽/勻漿器、蒸餾水和(he)lv仿(fang)。

操作(zuo)步驟：
一、ATP 的提取：
1、血清(qing)（漿(jiang)）中ATP 的提取：按照(zhao)血清(qing)（漿(jiang)）體積（mL）：提取液體積（mL）為1：5~10 的比例（建議(yi)取約0.1mL 血清(qing)（漿(jiang)），加(jia)入1mL 提取液），充分震蕩，10000g，4℃離心10min；取上清(qing)液另(ling)一EP 管中，加(jia)入500μL 的lv仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上(shang)清(qing)，置冰上(shang)待(dai)測（不可用于蛋(dan)白質含量測定(ding)）。

2、組(zu)(zu)織中(zhong)ATP 的(de)提(ti)取(qu)：按照組(zu)(zu)織質量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體積(mL)為1：5~10 的(de)比例(li)（建議稱取(qu)約0.1g組(zu)(zu)織，加入(ru)1mL 提(ti)取(qu)液(ye)），進(jin)行冰(bing)浴勻漿，8000g 4℃離(li)心10min，取(qu)上清另(ling)一EP 管中(zhong)，加入(ru)500μL 的(de)lv仿充(chong)分(fen)震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取(qu)上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待測（不可用(yong)于蛋白質(zhi)含量測定）。
3、細(xi)(xi)胞或細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)中ATP 的(de)提取(qu)：先收集細(xi)(xi)胞或細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)到離(li)心管內，棄上(shang)清，按照細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)或細(xi)(xi)胞數量（104個）：提取(qu)液(ye)體積（mL）為(wei)500~1000：1 的(de)比例（建議500 萬(wan)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)或細(xi)(xi)胞加入1mL 提取(qu)液(ye)），超聲波破(po)碎1min（冰浴，強度20％或200W，超聲2s，停1s），10000g 4 ℃離(li)心10min；取(qu)上(shang)清液(ye)另一(yi)EP 管中，加入500μL 的(de)lv仿充分震蕩混(hun)勻，10000g 4℃離心3min，取(qu)上清，置冰(bing)上待測(ce)（不可(ke)用于蛋白質含量(liang)測(ce)定(ding)）。

二(er)、測(ce)定步驟：
1、紫外分光光度計/酶標儀預熱30 min 以上，調節(jie)波長到(dao)340nm，蒸餾水調零。
2、將(jiang)10μmol/mL 的ATP 標準溶液用蒸餾水稀釋16 倍即0.625 μmol/mL 標準溶液備用。
3、工作(zuo)液的配制(zhi)：臨用前請按試(shi)劑(ji)二(mL)：試(shi)劑(ji)三(mL)：試(shi)劑(ji)四(mL)：試(shi)劑(ji)五（mL）：試(shi)劑(ji)六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1 的比(bi)例配制(zhi)，現(xian)配現(xian)用。
4、加樣(yang)表
在微(wei)量石英比色皿或96 孔UV 板中加入：
試(shi)劑名稱(μL)    ;      測定(ding)管          標準(zhun)管
樣本                   20
標準(zhun)液                                 20
試劑一(yi)                128             128
工作液   ;              52              52

充分混合(he)后，立即測(ce)定340nm 下10s 的吸(xi)光值(zhi)(zhi)A1，然后將(jiang)比色皿連同(tong)反應(ying)液(ye)一起放(fang)(fang)入37℃（哺乳(ru)動物）或25℃（其(qi)他物種(zhong)(zhong)）水浴中(zhong)反應(ying)3min，拿出擦拭干凈立即測定(ding)其(qi)在(zai)3min10s 時的吸(xi)光值(zhi)(zhi)A2。用96 孔板則(ze)放(fang)(fang)入37℃（哺乳(ru)動物）或25℃（其(qi)他物種(zhong)(zhong)）培(pei)養箱(xiang)中(zhong)（酶標儀若自帶(dai)控溫功能(neng)，則(ze)將(jiang)溫度調37℃或25℃）。分別計算ΔA 測定(ding)=A2 測定(ding)管-A1 測定(ding)管，ΔA 標準=A2標準(zhun)管-A1 標準管

三、ATP 含量計算：
1、血清（漿）中ATP 含量計算
ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 測定÷（ΔA 標準(zhun)÷C 標準(zhun)）×（V 提取+V 血(xue)清(qing)（漿））÷V 血(xue)清(qing)（漿）=6.875×ΔA 測定÷ΔA 標準(zhun)
2、組織、細菌或細胞中ATP 含量計算
（1） 按樣本鮮(xian)重計算
ATP 含量（μmol/g 鮮重）= ΔA 測(ce)定÷（ΔA 標(biao)(biao)準÷C 標(biao)(biao)準）×V 提(ti)取÷W=0.625×ΔA 測(ce)定÷ΔA 標(biao)(biao)準÷W
（2） 按細(xi)菌或細(xi)胞密度計算
ATP 含量(μmol/106 cell）=ΔA 測(ce)定(ding)(ding)÷（ΔA 標(biao)準÷C 標(biao)準）×V 提(ti)取÷5=0.125×ΔA 測(ce)定(ding)(ding)÷ΔA 標(biao)準

C 標(biao)準管(guan)：標(biao)準液濃度，0.625μmol/mL；
V 提(ti)取：加入的提(ti)取液體積，1mL；
V 血(xue)清（血(xue)漿）：血(xue)清（漿）體積(ji)，0.1mL；
W：樣本質量，g；
5：細胞(bao)或細菌總數，5×106 個。

注(zhu)意事項
1、加入提(ti)取液離心后的(de)上清若(ruo)為渾濁為正常現象。
2、提取過程嚴(yan)格在冰浴條件(jian)下進行。
3、用微量石(shi)英比色皿(min)測量的(de)(de)吸光值大(da)(da)于(yu)(yu)1.4 或(huo)者(zhe)ΔA 測定(ding)大(da)(da)于(yu)(yu)1.2 時（石(shi)英96 孔板的(de)(de)吸光值大(da)(da)于(yu)(yu)1.4 或(huo)者(zhe)ΔA 測定(ding)大(da)(da)于(yu)(yu)1.2 時），可以將樣(yang)品(pin)稀釋后進行測定(ding)。若(ruo)吸光值小于(yu)(yu)0.01，則(ze)可以增加反應時間(jian)(jian)（5min 或(huo)10min）來(lai)測定(ding)，標準品(pin)需要(yao)增加同樣(yang)的(de)(de)反應時間(jian)(jian)。

相關文獻(xian)：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death & Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury》 作者:Yang Wang，Jianhang Jiao，Shanyong Zhang，Changjun Zheng，Minfei Wu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:31146112
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448

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