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內毒素去除劑產品簡介：    

        本公(gong)司生(sheng)產的(de)內(nei)毒(du)素清(qing)除劑主要用于清(qing)除 DNA、蛋白質或(huo)其他液體樣品中的(de)內(nei)毒(du)素。在特定的(de) pH 值(zhi)、 鹽濃(nong)度和(he)溫度條件下，內(nei)毒(du)素清(qing)除劑能與 DNA、重組蛋白以及液體樣品中的(de)內(nei)毒(du)素特異性結合(he)，經過(guo)室溫高 速離(li)心后(hou)，DNA 或(huo)蛋白質等保(bao)留在水相(xiang)，而內(nei)毒(du)素則(ze)被濃(nong)縮(suo)到極小體積的(de)下層相(xiang)而被清(qing)除。經過(guo) 3 次以上重 復抽提后(hou)可將(jiang)活性為 5000～50000 EU/ml 的(de)內(nei)毒(du)素水平降低(di)到 5～0.5 EU/ml 以下，即降低(di) 1000～10000 倍。

內毒素去除劑操作步驟：    

       提取前請將內毒素清除(chu)劑放在冰(bing)上冰(bing)浴 5min，期(qi)間翻轉(zhuan)瓶子(zi)數次使試劑均勻(yun)預冷。    

1、 a)已純化的(de)質粒 DNA 內毒素清除：吸(xi)取 500μl DNA 溶(rong)液于微(wei)型離心管，加入 1/10 體積 3M NaAc pH5.2 或 1/20 體積 5M NaCl 溶(rong)液，冰浴 5min。   

b)在(zai)提取質粒 DNA 過程(cheng)中(zhong)清除(chu)內毒素：以(yi)堿裂解法提取質粒為例，在(zai)加入裂解液和中(zhong)和液并離心去除(chu) 碎片(pian)之后，吸取含質粒 DNA 的上清于新離心管中(zhong)，冰浴 5min。   

 2、加入 1/5 體積預冷的內毒(du)素清除劑，振(zhen)蕩混勻，溶液(ye)變(bian)渾濁(zhuo)。    

3、冰浴 5min，溶液(ye)應(ying)變清亮。    

4、37℃水浴 5min，不時振蕩，溶液又(you)變渾濁。    

5、12000rpm 室溫離心(xin) 5min，溶液應分為兩相(xiang)，上層水(shui)相(xiang)含 DNA，下層油狀相(xiang)含內毒素(su)。    

6、將含(han) DNA 的上層水相轉移到新管，棄油狀相，重(zhong)復(fu)抽提三次，即重(zhong)復(fu)步(bu)驟 2-6 三次。    

7、加(jia)(jia)(jia)入 2.5 體(ti)積(ji)無水(shui)乙醇(chun)，-20℃沉淀(dian) 30min 或過夜；12000rpm 離(li)心(xin) 10min，棄(qi)上(shang)清；加(jia)(jia)(jia)入 70％乙醇(chun)洗 滌沉淀(dian)，12000rpm 離(li)心(xin) 5min 棄(qi)上(shang)清；空氣干燥沉淀(dian)，加(jia)(jia)(jia)入 100～200μl 無內(nei)毒素的高(gao)純水(shui)或 TE 溶解沉淀(dian)。    

8、用內(nei)毒(du)素(su)檢測(ce)試劑(ji)測(ce)定(ding)樣品中(zhong)內(nei)毒(du)素(su)活性，并與初(chu)始樣品比較。

注意事項：

1、DNA 濃(nong)度>1mg/ml 時清除內毒素(su)效率降低(di)。由于 DNA 和(he)蛋白質(zhi)本身的(de)性質(zhi)，清除程序可導致 10-20 ％的(de) DNA 丟失，所幸的(de)是與清除內毒素(su)的(de)艱難(nan)相比 DNA 更容易提取制備。    

2、所有溶液(ye)應用無內毒(du)素的高(gao)純水配制，所有器械材料(liao)均應不含內毒(du)素，玻璃器皿可高(gao)溫烘烤(kao)，非(fei)揮發 性水溶液(ye)可高(gao)壓 120℃高(gao)溫處理?。