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酵母基因組DNA大量提取試劑盒

產品簡介： 
本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)采用(yong)可(ke)以(yi)特異性(xing)結(jie)合 DNA 的(de)(de)離心(xin)吸(xi)(xi)附(fu)柱和*的(de)(de)緩沖液系統，提(ti)取(qu)酵(jiao)母基因組 DNA。離心(xin)吸(xi)(xi)附(fu)柱中 采用(yong)的(de)(de)硅基質材(cai)料為本(ben)公司(si)*新型材(cai)料，能夠高效(xiao)專(zhuan)一吸(xi)(xi)附(fu) DNA，可(ke)大限(xian)度去除雜質蛋白及細胞(bao)中其(qi)他(ta)有機 化合物(wu)。提(ti)取(qu)的(de)(de)基因組 DNA 片段(duan)大，純(chun)度高，質量穩(wen)定(ding)可(ke)靠。使用(yong)本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)取(qu)的(de)(de)基因組 DNA 可(ke)用(yong)于各種常規 操作，包括(kuo)酶切、 PCR、文庫(ku)構建、Southern 雜交等(deng)實驗。

操作步驟： 
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在 室溫下離心。 
1、在離心管中收集酵母細胞 20-40ml(不超過 109 ce l1 s)，10000rpm 離心 1min，盡量吸除上清。 
2、酵母細胞壁的破除：向酵母菌體中加入 9ml 山梨醇 Buffer。充分懸浮菌體，加入 600ul 酵母破壁酶和 100ul 巰 基還原劑，充分混勻。30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數次。 
3、10000rpm 離心 lmin，棄上清，收集沉淀。 
4、向沉淀中加入 5ml 溶液 A，充分懸浮沉淀，向懸浮液中加入 500ul 的 RNase A(10mg/ml)，充分顛倒混勻，室溫 放置 10min。 
5、加入 500ul 的蛋白酶 K(10mg/ml)，充分顛倒混勻。65℃水浴消化 30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數次， 直樣品消化*為止。 
6、加入 5ml 溶液 B，再加入 5ml 無水乙醇，充分顛倒混勻，此時可能會出現絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，室溫放置 2min。 
7、10000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。 
8、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)。10000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱 放入收集管中。 
9、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液， 10000rpm 離心 l min， 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。 
10、10000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除， 否則漂洗液中的乙醇會影響后續實驗如酶切、PCR 等。 
11、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 1-2ml 經 65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置 5min， 10000rpm 離心 l min。 
12、離(li)(li)心所得洗脫液再(zai)加入吸附柱中，10000rpm 離(li)(li)心 2 min，即可得到(dao)高質量的基因組 DNA。

注意事項： 
1、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。 
2、若試劑盒中的溶液出現沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。 
3、如果實驗中的離心步驟出現柱子堵塞的情況，可適當延長離心時間。 
4、洗脫緩沖液的體積不少于 1ml，體積過小會影響回收效率；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響，若需要 用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調此范圍)， pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。 DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。 
5、 DNA 濃度(du)(du)(du)及(ji)純度(du)(du)(du)檢測(ce)：得到的(de)基因(yin)組(zu) DNA 片段的(de)大(da)小與樣品(pin)保存時(shi)間、操作過(guo)程中的(de)剪切力(li)等(deng)因(yin)素有關。 回 收(shou)(shou)得到的(de) DNA 片段可(ke)用瓊脂糖凝膠電泳(yong)和(he)紫外分光光度(du)(du)(du)計(ji)檢測(ce)濃度(du)(du)(du)與純度(du)(du)(du)。DNA 應(ying)在 OD260處有顯著吸收(shou)(shou)峰(feng)，OD260 值為 1.0 相當(dang)于大(da)約 50μg/ml 雙鏈(lian) DNA、40μg/ml 單(dan)鏈(lian) DNA。OD260/0D280比(bi)值應(ying)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shi)不使(shi)用洗 脫緩沖液，而使(shi)用去(qu)離子水，比(bi)值會偏(pian)低(di)(di)，因(yin)為 pH 值和(he)離子存在會影(ying)響(xiang)光吸收(shou)(shou)值，但并不表示純度(du)(du)(du)低(di)(di)。

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相關文獻：

《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu，Xuewu Guo，Jun Lu，Xi Sun，Feng Li，Yefu Chen，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影響因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong，Guanglu Wang，Cuiying Zhang，Haigang Tan，Xi Sun，Mingyue Wu，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23597844
 

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