線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒
                                                                                              分光光度法

產品(pin)名稱:：  線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒

產品(pin)英文名(ming): Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅠActivity Assay Kit

產品貨號：BC0510            產地(di)：北(bei)京市(shi)通州區馬駒橋(qiao)聯東U谷8三(san)樓

產品規格：50管/48樣             產品商標：solarbio
保存與運輸(shu)：4℃保存或(huo)-20℃保存；            參考(kao)價格：2200
庫(ku)存狀態：現貨                          
關鍵字：：   ：  ：  線粒體(ti)呼吸鏈復合體(ti)Ⅰ檢測試劑盒|  線粒體呼吸(xi)鏈復合體Ⅰ|線粒體呼吸鏈|試劑盒

簡要(yao)介紹：
復(fu)合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱(cheng) NADH-CoQ 還原酶(mei)或 NADH 脫氫酶(mei)，廣泛存在于動(dong)物(wu)、植(zhi)物(wu)、 微生物(wu)和培養細胞的線粒體中，是(shi)線粒體內膜中大的蛋(dan)白復(fu)合物(wu)。該酶(mei)催化一對電子(zi)從 NADH 傳(chuan)(chuan)遞給 CoQ，同時(shi)可使O2還原生成 O2.-，是(shi)呼吸電子(zi)傳(chuan)(chuan)遞鏈(lian)上產(chan)生O2.-的主要部位。 測定該酶(mei)活性，不僅(jin)可以反映(ying)呼吸電子(zi)傳(chuan)(chuan)遞鏈(lian)（ETC）狀態，而且可以反映(ying)活性氧（ROS） 生成狀態。

產品詳細描述
產品內容：
提取液(ye)：液(ye)體25 mL×1瓶(ping)，4℃保存(cun)；  
試劑(ji)一：液體25 mL×1瓶(ping)，4℃保存；
試劑(ji)二(er)：粉(fen)劑(ji)×1支，4℃保存；臨用前加入2mL丙tong
試劑三：粉(fen)劑×1 支，-20℃保存；溶于(yu)1mL丙tong，可分裝(zhuang)后(hou)-20℃保存。臨用(yong)(yong)前再(zai)用(yong)(yong)丙tong100倍稀釋后(hou)使用(yong)(yong)，現用(yong)(yong)現配(pei)。
試劑四：粉(fen)劑×1支，-20℃保存(cun)；臨用前加入2mL蒸餾水，現配現用；   
工(gong)作液的(de)配制：臨用前將試劑二和試劑三(san)1:1混合，現(xian)配現(xian)用。
產品說明：
復(fu)合(he)體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原(yuan)酶或(huo)NADH脫氫酶，廣泛存在(zai)于動(dong)物(wu)、植物(wu)、微生物(wu)和培(pei)養(yang)細胞的線粒體中，是線粒體內(nei)膜中大(da)的蛋白(bai)復(fu)合(he)物(wu)。該酶催化一對電子從NADH傳遞(di)給CoQ，同時可使(shi)O₂還原生(sheng)成O^2-，是呼吸電子傳遞鏈(lian)上產生O^2.-的(de)主要部位。測定該酶活性，不僅可以(yi)反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tai)，而且可以(yi)反映活性氧（ROS）生成狀態(tai)。
復合體(ti)Ⅰ能夠(gou)催化NADH脫(tuo)氫生成(cheng)NAD⁺，在340nm下測(ce)定NADH的(de)氧化(hua)速率(lv)計算出(chu)該酶(mei)活性的(de)大小。
試(shi)(shi)驗中所(suo)需的儀器(qi)和試(shi)(shi)劑：
紫(zi)外(wai)分光光度計(ji)、臺式離心機、水(shui)浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、丙(bing)tong、冰和蒸餾水(shui)。
操作步驟：
一、復合體的提取： 

1. 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xi)胞，加入1.0 mL提取液，用勻(yun)漿(jiang)器或研缽于冰上勻(yun)漿(jiang)。
2. 4 ℃ 600 g離心(xin)10min。
3. 將上清液移另一(yi)離心管中，4 ℃ 11000 g離心15min。
4. 上清液即(ji)胞漿提取物，可用于(yu)測定從線(xian)粒(li)體泄(xie)漏的復合體Ⅰ（此步可選做，可以(yi)判斷線(xian)粒(li)體提取效果）。
5. 在沉淀(dian)中加入(ru)400μL提取液，超聲(sheng)波破碎（功率20％，超聲(sheng)5秒(miao)，間隔10秒(miao)，重(zhong)復15次），用于復合體Ⅰ酶活性測(ce)(ce)定，并(bing)且用于蛋(dan)白含量(liang)測(ce)(ce)定。

二、測定步驟：

1. 紫外分光光度(du)計預熱(re)30min 以上，調節波長340nm，蒸餾水調零。
2. 試(shi)劑一37℃（哺(bu)乳動物(wu)）或25℃（其(qi)他物(wu)種）預熱15min。
3. 操作表：在1mL石(shi)英比色(se)皿中(zhong)分別加入

三、復(fu)合體Ⅰ活力單位的(de)計算：  
單位(wei)定義(yi)：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義(yi)為(wei)一個(ge)酶活(huo)力單位(wei)。
復合體Ⅰ活力（U/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系總體積，10^-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入(ru)樣本體積，0.05 mL； T：反應時間，2min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。
注意事(shi)項：

1. 為保證實驗結果的準確(que)性，需先取1-2個樣做預實驗，如果測定的吸光(guang)值過高（高于1.5），可用蒸(zheng)餾水稀釋(shi)(shi)上清液后再測定。計算結果時注意乘以稀釋(shi)(shi)倍數(shu)。若ΔA大于(yu)0.4，需將樣本稀(xi)釋適當倍數（計算公式中(zhong)乘以(yi)相應稀(xi)釋倍數）；若ΔA偏小，則可(ke)以(yi)通過增加加入的樣品體積來提高靈敏度。
2. 樣品(pin)蛋(dan)白濃(nong)度需自行測定，推(tui)薦(jian)我公(gong)司BCA蛋(dan)白濃(nong)度測定試劑盒。由于提取(qu)液中(zhong)含(han)有(you)蛋(dan)白，所以在測定樣品(pin)蛋(dan)白濃(nong)度時需要減去提取(qu)液本身的蛋(dan)白含(han)量。
3. 推(tui)薦使用(yong)樣本蛋白(bai)濃度計算(suan)酶(mei)(mei)活(huo)，若用(yong)樣本鮮重計算(suan)，則(ze)需(xu)加測(ce)胞(bao)漿提取(qu)物酶(mei)(mei)活(huo)，上清和沉淀酶(mei)(mei)活(huo)之和方(fang)為(wei)總酶(mei)(mei)活(huo)。
4. 本試(shi)劑(ji)盒試(shi)劑(ji)足夠完成25管反應。
5. 附:使用樣(yang)本(ben)重量計(ji)算公(gong)式：（樣(yang)本(ben)檢(jian)測(ce)數為25T/12S）

A、上清中復合(he)體I活力的計(ji)算:
按樣本鮮重計算：
單位的定義(yi)：每g組織在反應體系(xi)中每(mei)分鐘消耗(hao)1 nmol NADH定義(yi)為一個酶活(huo)力(li)單位。
復合體I活(huo)性(xing)（U/g）= [ΔA1×V 反總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣(yang))÷T
                   =1608×ΔA1÷W。
ΔA1：上清測定(ding)值；V 反總：反應(ying)體(ti)系總體(ti)積，10^-3 L；ε：NADH 摩爾(er)消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V提(ti)(ti)取(qu)：加入提(ti)(ti)取(qu)液(ye)體積，1mL ；V 樣(yang)：加入樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.05mL；T：反應(ying)時(shi)間，2 min；W：樣(yang)本重量(liang)，g。
B、沉淀中復合體I活(huo)力(li)的(de)計(ji)算:
按樣本鮮重(zhong)計算：
單(dan)位(wei)的定義(yi)：每g組(zu)織在反應體(ti)系中每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
復合(he)體I活(huo)性（U/g）= [ΔA2×V 反總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣本(ben))）÷T
                   =643×ΔA2÷W。

ΔA2：沉淀測定值；V 反(fan)總：反(fan)應體系總體積，10^-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shu)，6.22×10³ L / mol /cm d：比色(se)皿(min)光(guang)徑(jing)，1cm；V提取：沉淀重懸體積，0.4mL ；V 樣：加入樣本(ben)體積，0.05mL；T：反應時(shi)間，2 min；W：樣本(ben)重量，g。
C、樣本(ben)復合體(ti)I總活(huo)力的計算(suan):
樣本復合體I總活(huo)力即為上清中復合體I活力與沉淀中(zhong)復合體I活力之(zhi)和。
按樣本鮮(xian)重計算：
復合體I（U/g 鮮(xian)重）=1608×ΔA1÷W +643×ΔA2÷W。

相關文獻：

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