Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒

產品英(ying)文名：Ca++Mg++ ——ATPase Assay Kit

產品貨號(hao)：BC0960               產地(di)：北京(jing)市(shi)通(tong)州(zhou)區馬駒橋聯東U谷8三(san)樓

產(chan)品規格(ge)：50管/24樣                       產品商標：solarbio
保存(cun)與運輸：4℃保存(cun)或-20℃保存(cun)；            參考價格：260
庫存狀(zhuang)態：現(xian)貨                          
關鍵字：ATP酶活(huo)性檢測試劑盒|ATP檢測(ce)試劑(ji)盒|

簡要介紹：
Ca++ Mg++-ATP 酶廣(guang)泛分布于植物、動(dong)物、微(wei)生(sheng)物和細胞(bao)中，可催化ATP 水解生(sheng)成ADP 和無機磷。
    根(gen)據(ju)Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 生成(cheng)ADP 及無機磷，通過測(ce)定(ding)無機磷的量來(lai)確定(ding)ATP 酶活(huo)性高低。


產(chan)品詳(xiang)細描述
產(chan)品內容：
試(shi)劑一：液(ye)體30mL×1 瓶，4℃保存(cun)。
試劑二：液體4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉(fen)劑×2支，-20℃保存(cun)；臨用前加入(ru)1mL蒸餾水充(chong)分混勻待用，現用現配。用不完的試劑-20℃可保存一周。
試劑四：液體2mL×1 瓶，4℃保存(cun)。
試劑(ji)(ji)五(wu)：粉(fen)劑(ji)(ji)×1瓶，4℃保存。用時加入3mL雙蒸(zheng)水， 4℃保存。
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保(bao)存(cun)。用時(shi)加(jia)入15mL雙(shuang)蒸水(shui)，溶解后4℃保存一周。
試劑(ji)七：粉劑(ji)×1瓶(ping), 4℃保存(cun)。用時加入15mL雙蒸水，溶解后4℃保存一(yi)周。
試劑八：液體15mL×1 瓶，室溫保存。
標準品：10mmol/L 標(biao)準磷貯備液1mL×1 支(zhi)，4℃保(bao)存。
0.5μmol/mL 標(biao)準(zhun)磷應用液配(pei)制(zhi)：將標準品 20倍(bei)稀(xi)釋，即(ji)取0.1mL標準(zhun)品加1.9mL蒸(zheng)餾水(shui)充分混(hun)勻。
定磷劑的配制：按(an)H₂O: 試(shi)劑(ji)六:試(shi)劑七(qi):試劑(ji)八=2:1:1:1 的比例配制(zhi)，配好的定磷劑(ji)(ji)應(ying)為淺黃色。若無色則試劑(ji)(ji)失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑(ji)(ji)現用現配。
注意：配(pei)試(shi)劑(ji)用(yong)新的燒杯、玻棒和(he)玻璃移液(ye)器，也可以(yi)用(yong)一次性塑料器皿，避免(mian)磷污染。
產品說明：
    Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶廣泛分布于植(zhi)物(wu)(wu)、動物(wu)(wu)、微(wei)生物(wu)(wu)和細胞(bao)中(zhong)，可催化ATP水解生成(cheng)ADP和(he)無機磷。
    根據Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶(mei)分解ATP生成ADP及無(wu)機(ji)磷，通過測定無(wu)機(ji)磷的量來確定ATP酶活性高低(di)。
需(xu)自(zi)備(bei)的儀器及(ji)用品:
    可見分光光度計、水(shui)浴鍋、臺式(shi)離心機(ji)、可調(diao)式(shi)移液(ye)器、1mL玻璃比色皿、研(yan)缽、冰和蒸餾水。
操作步驟(zou)：
一、樣品(pin)酶(mei)液的制備：
1、細(xi)菌、細(xi)胞或組(zu)織樣品的制備：
細菌或(huo)培養細胞：先收集(ji)細菌或(huo)細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬(wan)細菌或細胞加入(ru)1mL試劑一，超聲(sheng)波破碎細菌或細胞(bao)（功率(lv)20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上(shang)清，置冰上(shang)待測。
組(zu)織：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin)10min，取(qu)上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定步驟：
1、分(fen)光光度計預熱30min以上，調節波長(chang)660nm，蒸餾(liu)水調零。
2、酶促反(fan)應（在EP管(guan)中加(jia)入下列(lie)試(shi)劑）

3定磷(lin)（1.5mLEP管(guan)中(zhong)依次加(jia)入下(xia)列(lie)試(shi)劑）

                 混勻，40℃水浴10 min，冷(leng)卻室溫，在 660nm處(chu)比色(se)。
三、計算(suan)
1、血清（漿）Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATPase活力的計算:
定(ding)義：規定(ding)每小時每毫(hao)升(sheng)血清（漿）中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATP 酶(mei)分解ATP 產生1μmol無機磷(lin)的量(liang)為一個酶活力單位(wei)。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活(huo)力（U/mL）= C標準管(guan)×（A測定管(guan)-A對(dui)照(zhao)管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷V樣(yang)÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
2、組織、細菌或(huo)細胞中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATPase活(huo)力的計(ji)算：
（1）按蛋白濃度計算：
定義(yi)：規定每(mei)小時每(mei)毫克組織蛋白中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATP 酶分(fen)解ATP 產生1μmol無機(ji)磷的量為一個(ge)酶活力單位(wei)。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/ mg)= C標準管×（A測定管(guan)-A對照管）÷（A標準(zhun)管-A空(kong)白管）×V總÷（Cpr×V樣）÷T=7.5×（A測定(ding)管-A對照管）÷（A標準管-A空白(bai)管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算(suan)：
定(ding)義：規(gui)定(ding)每小時每克組織(zhi)中(zhong)Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機(ji)磷的(de)量為(wei)一個酶活力(li)單位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活(huo)力(U/g)= C標準管×（A測定管-A對照(zhao)管(guan)）÷（A標準管-A空白(bai)管）×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標(biao)準管(guan)-A空白管）÷W
（3）按細(xi)菌或細(xi)胞密度計算：
定(ding)義：規定(ding)每(mei)小時(shi)每(mei)1萬個細菌或細胞中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP 酶(mei)分解ATP 產生1μmol無機(ji)磷的(de)量為一個酶活力單位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶(mei)活力(U/10⁴)= C標準管(guan)×（A測定(ding)管-A對照管(guan)）÷（A標準管(guan)-A空白管(guan)）×V總(zong)÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×（A測(ce)定管-A對照管）÷（A標(biao)準(zhun)管-A空白管）
    C標(biao)準管(guan)：標(biao)準管(guan)濃度，0.5μmol/mL；V總(zong)：酶(mei)促反應總(zong)體積，0.5mL；V樣：加入樣本體積，0.2mL ；V樣(yang)總(zong)：加(jia)入提取液體(ti)積，1mL；T：反應時間(jian)，1/6小時；Cpr：樣本蛋白質濃(nong)度，mg/mL；W：樣本鮮重(zhong)，g；500：細(xi)菌或細(xi)胞總數，500萬(wan)。
注意事項：
1、由(you)于每一個樣(yang)都必須(xu)做對(dui)照，本(ben)試劑盒(he)50管只(zhi)能測 24份Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏(min)、快(kuai)速的(de)特(te)點。所(suo)以對測定所(suo)用試管(guan)要求嚴格(ge)無(wu)磷。避免磷污(wu)染(ran)是檢測成敗的(de)關鍵。
3、空白管和標準(zhun)管只要做(zuo)一管。

相(xiang)關文獻：
《Apigenin suppresses the apoptosis of H9C2 rat cardiomyocytes subjected to myocardial ischemia?reperfusion injury via upregulation of the PI3K/Akt pathway》 作者:Zhengwen Zhou, Yue Zhang, Luning Lin, Jianmei Zhou 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:29901074
《Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na+/K+-ATPase to induce ovarian follicular patency for yolk protein uptake》 作者(zhe):Yu-Pu Jing, Hongli An, Shanjing Zhang, Ningbo Wang, Shutang Zhou 期刊:Journal of Biological Chemistry 影響因(yin)子:4.106 PMID:

Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒