α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

產品名稱:：  α酮戊二酸(suan)脫氫(qing)酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

產品(pin)英文名:   αKetoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) Assay Kit

產品貨號(hao)：BC0710            產地：北京(jing)市通州區馬駒橋聯東(dong)U谷8三(san)樓

產品規格(ge)：50管/48樣          產品商標：solarbio
保存(cun)與運輸：4℃保存(cun)或-20℃保存(cun)；            參考價格(ge)：1300
庫(ku)存狀態：現貨                ;          
關鍵字:：    α酮戊(wu)二酸脫(tuo)氫酶檢測試劑(ji)盒|α-KGDH檢測(ce)試(shi)劑盒(he)|α酮戊二酸脫氫酶|試(shi)劑盒

簡要介紹(shao)：
α-KGDH（EC1.2.4.2）廣泛存在于動物、植物微生物和培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)的線粒體(ti)中，是(shi)三羧酸循環調控關鍵(jian)酶(mei)之一，催化(hua)α-酮戊二(er)酸氧化(hua)脫羧生成琥(hu)珀(po)酰輔酶(mei)A。
    α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和(he)輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和(he)NADH，NADH在340nm有特征吸收峰，以NADH的生成速(su)率表示α-KGDH活性。

產品詳細描述
產(chan)品內容：
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存(cun)；
試(shi)劑二：液體0.6mL×1支，-20℃保存；
試劑三：液體(ti)55mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉(fen)劑×1支，4℃保存(cun)；
試(shi)劑五：粉劑×1支，4℃保存；
試(shi)劑六(liu)：粉劑×1支，-20℃保存(cun)；
試劑七：粉(fen)劑×1支(zhi)，-20℃保(bao)存；
試劑八：粉劑×1支(zhi)，-20℃避光保存。臨用前加入2mL雙蒸水充(chong)分混勻(yun)待(dai)用，用不(bu)完的(de)試(shi)劑仍-20℃保(bao)存(cun)。
工作液(ye)的配制：臨用前把(ba)試劑四、試劑(ji)五、試劑(ji)六、試劑(ji)七轉移到試劑(ji)三中混合(he)溶解(jie)待用。

產品說(shuo)明：
   α-KGDH（EC 1.2.4.2）廣泛存(cun)在于動物(wu)、植物(wu)微(wei)生(sheng)物(wu)和(he)培(pei)養細胞的線粒體中(zhong)，是(shi)三羧酸循環調控關鍵酶之一，催化α-酮戊(wu)二酸氧化脫(tuo)羧(suo)生(sheng)成(cheng)琥(hu)珀酰(xian)輔酶A。
α-KGDH催化α-酮(tong)戊二酸(suan)、NAD⁺ 和(he)輔酶A生成(cheng)琥珀(po)酰(xian)輔酶A、二(er)氧化(hua)碳和(he) NADH，NADH在340 nm有特征(zheng)吸收(shou)峰，以NADH的(de)生成速率(lv)表示α-KGDH活性。

試(shi)驗所需自備儀器和樣品：
紫外分光(guang)光(guang)度計、水浴鍋、臺(tai)式離心(xin)機、可(ke)調式移(yi)液器(qi)、1mL石英比色皿(min)、研缽、冰和蒸餾水(shui)。
操作(zuo)步驟：
一、α-KGDH的提取
稱取約(yue)0.1g組(zu)織或收(shou)集約500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL試劑二，冰浴用(yong)勻漿器或研缽充分研磨(mo)，4 ℃ 11000 g離心10min，取上(shang)清，置冰上(shang)待(dai)測。
二、測(ce)定步驟
1. 分光光度計(ji)預熱30min以(yi)上，調節波長到340 nm，蒸餾水調零(ling)
2. 空白管：
取1mL工作液加入1mL石英比色皿，37℃孵(fu)育5min后取出比(bi)色皿(min)，再依次(ci)加入40μL試劑八和60μL蒸餾水(shui)，混勻并立(li)即(ji)測量(liang)340nm處0s的吸光(guang)值A1，37℃準(zhun)確反應2min，記錄(lu)340nm處2min時(shi)的吸光(guang)值A2，計算ΔA空白=A2-A1。
3.測定管：
取1mL工作液加(jia)入1mL石(shi)英(ying)比色皿，在37℃（哺乳(ru)動物）或25℃（其它物(wu)種）孵育5min后取出比色皿，再依次(ci)加入(ru)40μL試(shi)劑八和60μL樣(yang)本，混勻并(bing)立即測(ce)量340nm處0s的吸光(guang)值(zhi)A3，37℃（哺乳動物）或25℃（其(qi)它物種(zhong)）中準確反(fan)應2min，記(ji)錄340nm處2min時(shi)的吸光值A4，計算(suan)ΔA測定=A4-A3。
三、α-KGDH活性(xing)計算
1.按樣本蛋白濃度計算
單位的定(ding)義：每mg組織(zhi)蛋白在反應體系中每分鐘生成1 nmol的(de)NADH定義為一個酶活(huo)力單位。
 α-KGDH活性（U/mg prot）＝[(ΔA測定-ΔA空白)÷（ε×d）×V反總×10⁹]÷(Cpr×V樣) ÷T
=1473.7×(ΔA測定-ΔA空(kong)白)÷Cpr
2.按(an)樣本鮮重計(ji)算(suan)
單位的(de)定義：每g組織在(zai)反應(ying)體系中每分(fen)鐘生(sheng)成(cheng)1 nmol的NADH定義(yi)為一個酶(mei)活力單位。
 α-KGDH（U/g 鮮(xian)重）＝[(ΔA測定-ΔA空白(bai))÷（ε×d）×V反總×10⁹]÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=1488.5×(ΔA測定-ΔA空白)÷W
3. 按細菌或細胞密度計算(suan)
單位(wei)的定義(yi)：每1萬(wan)個細菌或細胞在反應(ying)體系(xi)中(zhong)每分鐘生成(cheng)1 nmol的NADH定(ding)義為(wei)一個酶活力單(dan)位(wei)。
α-KGDH活性(xing)（U/10⁴cell）＝[(ΔA測定(ding)-ΔA空白)÷（ε×d）×V反總(zong)×10⁹]÷(V樣÷V樣(yang)總×500)  ÷T
=2.977×(ΔA測(ce)定-ΔA空(kong)白)
V反總：反應體系(xi)總體積，1.1×10^-3 L；ε：NADH摩(mo)爾消光系數，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.06mL；V樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)試劑一和試劑二(er)體積，1.01mL；T：反應時間，2min；Cpr：樣(yang)本蛋白(bai)質濃(nong)度，mg/mL；W：樣品質量(liang)，g；500：細(xi)菌或細(xi)胞(bao)總數(shu)，500萬。
注意事(shi)項：
1、測定過程(cheng)中所有試劑(ji)和(he)樣本在(zai)冰上放置，以(yi)免變性和(he)失活。
2、比色皿中反(fan)應液(ye)的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝(zhuang)入一定量的37℃或25℃蒸餾水(shui)，將此燒杯放入37℃或25℃水浴(yu)鍋中。在反應(ying)過程(cheng)中把比色皿連同反應(ying)液(ye)放(fang)在此燒(shao)杯中。
3、兩個(ge)(ge)人同時做此實(shi)驗(yan)，一個(ge)(ge)人比色，一個(ge)(ge)人計時，以(yi)保證實(shi)驗(yan)結果的準確性。
4、測(ce)定管的ΔA值在0.01-0.25之(zhi)間(jian)，若(ruo)測定管(guan)的ΔA值大于(yu)0.25，需(xu)將(jiang)樣本(ben)進行稀釋。

相關文獻：
《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448