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瓊脂糖凝膠CL-2B

貨號：S8731

規格：10ml/100ml

一、瓊脂糖凝膠CL-2B簡介

瓊脂糖凝膠(jiao)CL-2B是在瓊(qiong)脂糖(tang)凝膠2B的基礎上通過(guo)交聯使微球的剛性(xing)增強，理(li)化性(xing)能提高，有(you)利用(yong)于工業生產。該介質用(yong)于生物大分子的凝膠層析(xi)。

本品呈白色(se)球(qiu)狀凝(ning)膠，無(wu)嗅、無(wu)味、無(wu)肉(rou)眼可見雜質(zhi)。

二、親(qin)和填(tian)料特性

*檢測條件： 層(ceng)析柱(zhu)10mm×300mm  *柱(zhu)床高15cm，25℃，流動相為0.1mol/LNaCl。

三、 適(shi)用范圍

本產品具有很(hen)高(gao)(gao)的(de)化(hua)學穩定性(xing)、高(gao)(gao)流速、較好的(de)機(ji)械性(xing)能、可多次重復使用(yong)(yong)等(deng)特(te)點，非特(te)異性(xing)吸附低，回(hui)收率高(gao)(gao)，可用(yong)(yong)有機(ji)溶劑及(ji)1~2mol/L 的(de)NaOH在位清洗，適用(yong)(yong)于(yu)工業規(gui)模生(sheng)產，廣泛用(yong)(yong)于(yu)生(sheng)物(wu)制藥(yao)和生(sheng)物(wu)工程下(xia)游蛋白(bai)質、核酸及(ji)多肽的(de)凝膠色譜純化(hua)。

四、注(zhu)意事項

產品應密封貯存在(zai)4℃~25℃（保存溶液為20% 乙(yi)醇），通風、干燥、清潔的(de)地(di)方。不(bu)能冷(leng)凍。

用過的(de)柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

本產(chan)品避免與氧化劑接(jie)觸；避免長時間暴露在空氣(qi)中。

保質期(qi)：5年(nian)。

五(wu)、操作步驟(zou)：

1、裝柱

凝膠(jiao)(jiao)過(guo)濾(lv)介(jie)質的(de)使(shi)用(yong)(yong)對(dui)裝(zhuang)柱的(de)要(yao)求較高，為了(le)保證分離(li)效(xiao)(xiao)果，一般通過(guo)柱子(zi)上加(jia)一個裝(zhuang)柱器來使(shi)分離(li)柱裝(zhuang)滿凝膠(jiao)(jiao)，或采(cai)用(yong)(yong)帶有(you)軸向加(jia)壓裝(zhuang)置的(de)柱子(zi)。凝膠(jiao)(jiao)柱床(chuang)一般高于60cm。裝(zhuang)柱效(xiao)(xiao)果可(ke)用(yong)(yong)染料或丙酮-水溶液進行檢驗。

以下過(guo)程為(wei)通用介質裝填過(guo)程。若為(wei)帶有(you)軸向加壓裝置的柱子(zi)，可在柱床穩定(ding)后將(jiang)柱床壓緊，接好管路(lu)。

（1）讓所(suo)有的(de)(de)材料和試劑(ji)達到(dao)室溫(wen)。配制緩沖(chong)液(ye)。凝(ning)膠(jiao)層析上樣、平衡和洗脫只用(yong)一種低鹽(yan)濃度的(de)(de)緩沖(chong)液(ye)。

   （2）選擇(ze)一根(gen)一定直徑的(de)柱子(zi)，長約30~60cm,根(gen)據柱子(zi)大小(xiao)取所(suo)需量的(de)凝膠(jiao)（約為柱床體積的(de)1.15倍），清洗掉20%乙(yi)醇，抽干，用緩沖液（按凝膠(jiao)：緩沖液=3：1的(de)比例）配成勻漿。

（3）將柱內及(ji)柱子(zi)底端(duan)用水或緩沖液潤濕并(bing)保(bao)持一小段液位(wei)（液面略(lve)高(gao)于(yu)濾膜），務必(bi)使底端(duan)無氣泡。

（4）用(yong)玻璃棒引導勻漿沿著柱(zhu)(zhu)內(nei)壁一次性倒(dao)入柱(zhu)(zhu)內(nei)，注意勿(wu)使產生氣泡。打開(kai)柱(zhu)(zhu)子(zi)出(chu)液口，使凝膠(jiao)在柱(zhu)(zhu)內(nei)自由沉降(jiang)，連(lian)結好柱(zhu)(zhu)子(zi)頂端柱(zhu)(zhu)頭。

（5）打開蠕動泵，讓緩沖液用(yong)使用(yong)時(shi)流(liu)(liu)速的1.33倍的流(liu)(liu)速流(liu)(liu)過，使柱(zhu)床(chuang)穩定。用(yong)緩沖液平(ping)衡柱(zhu)子，到柱(zhu)床(chuang)穩定。

（6）推薦用(yong)一(yi)個裝柱器輔(fu)助裝柱。裝完后(hou)柱床上端輕輕刮平，上好柱頭(tou)。

2、平衡

讓(rang)緩(huan)沖液(ye)以一(yi)定流(liu)速流(liu)過柱子(zi)，到流(liu)出液(ye)電(dian)導(dao)和pH不變。

3、上樣

（1）樣品用緩沖(chong)液(ye)配制，渾濁的樣品要離心和(he)過濾后上樣。含鹽量過大(da)、濃度過小的樣品要先做(zuo)處理(li)，再上樣。

（2）介(jie)質對(dui)樣品(pin)組(zu)分(fen)(fen)的分(fen)(fen)離是(shi)按(an)組(zu)分(fen)(fen)分(fen)(fen)子(zi)量(liang)大(da)小進行的，分(fen)(fen)子(zi)量(liang)大(da)的先流出來。

（3）上(shang)樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離(li)越好。

4、洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中(zhong)保持流速、緩沖液組成不變。

5、再生

一(yi)般用緩沖(chong)液(ye)洗到(dao)平衡(heng)，可再次使用。

6、在(zai)位清洗

（1）對于以(yi)離子鍵(jian)結合上去(qu)的蛋(dan)白，可以(yi)用2M Nacl去(qu)除。

（2）對沉(chen)淀(dian)蛋白、對以疏(shu)水(shui)性結合的蛋白或(huo)脂類，可(ke)用1M NaOH 去除(chu)。

（3）對強(qiang)疏水性結合的(de)(de)蛋白、脂(zhi)類(lei)等，用4~10倍柱(zhu)體積(ji)的(de)(de)70%乙醇(chun)或30%異丙醇(chun)清洗，但要注意(yi)有(you)機(ji)溶劑的(de)(de)濃度以梯度的(de)(de)方式逐漸增加，否則容(rong)易產(chan)生氣泡。

清(qing)洗完(wan)畢后，用少(shao)3倍(bei)緩沖液平衡柱子。

7、注意

在裝柱、使用(yong)和保存柱子的時候(hou)，要避免柱子流(liu)干(gan)，氣泡進入。

8、去熱(re)源

用(yong)0.5M的氫氧化(hua)(hua)鈉(na)清洗柱子(zi)5~6小時或用(yong)0.1M的氫氧化(hua)(hua)鈉(na)24小時。或用(yong)以下方法步驟去除：

（1）2倍柱體積的70%乙醇；

（2）2倍柱(zhu)體積50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱體(ti)積4M尿(niao)素；

（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；

以上(shang)緩沖液都在無熱(re)源的(de)雙蒸水中配制(zhi)。

9、 消毒

用0.5~1M NaOH室溫(wen)下洗8~10倍柱體積，初始緩沖(chong)液(ye)平衡柱子。