產品名稱:總(zong)膽固醇(TC)含量檢測試劑(ji)盒
產品型號:BC1980
產品特點:總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒測定意義:TC 包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。測定原理:利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉化為FC;進一步利用膽固醇氧化酶催化FC 氧化,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;后利用過氧化物酶催化H2O2 氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在500nm 有特征吸收峰,
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總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒
總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:正式測(ce)(ce)定之前(qian)選擇 2-3 個(ge)預期差異大的(de)樣本做(zuo)預測(ce)(ce)定。
英文名稱:Total cholesterol (TC) content test kit
關鍵詞:總膽固醇|總膽固醇含量檢測|TC|TC含量檢測
貨號:BC1980
規格(ge):50T/48S
產品簡介:
總膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)(chun)(Total Cholesterol,TC)是指所有脂蛋白所含膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)(chun)的(de)總和,包括(kuo)游離膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)(chun)和膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)(chun)酯(zhi)。
利(li)用酯(zhi)酶(mei)催(cui)化膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)酯(zhi)水解(jie)生(sheng)成(cheng)游(you)離膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)(FC)和游(you)離脂肪酸(FFA),從(cong)而把膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)酯(zhi)轉化為 FC;進一步利(li)用膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)氧(yang)(yang)化酶(mei)催(cui)化 FC 氧(yang)(yang)化,生(sheng)成(cheng)△4-膽(dan)(dan)甾烯酮和 H2O2;后利(li)用過氧(yang)(yang)化物酶(mei)催(cui)化H2O2 氧(yang)(yang)化 4-氨(an)基安替比(bi)林和酚,生(sheng)成(cheng)紅色(se)醌類化合物,其(qi)在 500nm 有特(te)征吸(xi)收峰,其(qi)顏色(se)深淺與TC 含(han)量成(cheng)正比(bi)。
試驗中所需的儀器和(he)試劑:
可見分(fen)光光度計、天平(ping)、低溫臺(tai)式離(li)心機、1mL 玻(bo)璃比色皿、可調式移液槍、EP 管(guan)、蒸餾水、異丙醇。
產(chan)品內容:
提取液:異丙醇(chun) 50mL×1 瓶,自備,4℃保存;
試劑(ji)一:液體(ti) 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 400μL×1 支,4℃保(bao)存;
試劑三:液體(ti) 60μL×1 支,4℃保(bao)存;
標(biao)準(zhun)品(pin):粉劑×1支,10mg膽固醇,4℃保(bao)存(cun)。臨用前加入517μL提(ti)取液(ye),振蕩溶(rong)(rong)解,即為50μmol/mL的膽固醇標(biao)準(zhun)溶(rong)(rong)液(ye)。
工(gong)(gong)作液的配制(zhi):將試劑一:試劑二:試劑三按(an)比例3mL:20μL:3μL配制(zhi)工(gong)(gong)作液,現用現配。
操(cao)作步驟:
一、樣本處理(li):
1. 組織:按照組織質(zhi)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL提取液)進行冰浴勻漿。10000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞(bao)數(shu)量(104個):提(ti)(ti)取(qu)液體(ti)積(ji)(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞(bao)加入 1mL 提(ti)(ti)取(qu)液),冰浴超聲(sheng)波破碎細胞(bao)(功率 300w,超聲(sheng) 2 秒(miao),間隔 3 秒(miao),總時間 3min);然后 10000g,4℃離心 10min,取(qu)上清置于冰上待測。
3. 血清(漿)樣品:直接測定。
二、測(ce)定(ding)步驟:
1、 分光光度計預(yu)熱 30min 以上,調節(jie)波(bo)長 500nm,蒸餾水調零。
2、 將(jiang) 50μmol/mL 標(biao)準(zhun)(zhun)液(ye)用提取(qu)液(ye)稀(xi)釋為 1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的標(biao)準(zhun)(zhun)溶液(ye)備用。
3、 操作表:(在 1.5ml 離心管中依次加入(ru)下(xia)列試劑)
測(ce)定管 標準(zhun)管 空(kong)白(bai)管
樣品(µL) 100 - -
標準溶液(μL) - 100 -
提取液(μL) - - 100
工(gong)作(zuo)液(µL) 900 900 900
充分(fen)混勻,37℃靜置(zhi) 15min,反(fan)應完成后于 1mL 玻璃比色皿,測定 500nm 處吸
光值 A,分別記為 A 測定(ding)管(guan)、A 標準(zhun)管(guan)和(he) A 空白管(guan),△A=A 測定(ding)管(guan)-A 空白管(guan),△A 標
準=A 標準管(guan)-A 空白(bai)管(guan),空白(bai)管(guan)只需測一次。
總(zong)膽固醇含量計算
一、標準(zhun)曲(qu)線的繪制(zhi):
以各個(ge)標準溶液的濃度(du)為(wei) x 軸(zhou),其(qi)對應的△A 標準為(wei) y 軸(zhou),繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b,將△A 帶入方程得到 x(μmol/mL)
二(er)、總膽固醇含量的(de)計算:
1. 血清(漿)中(zhong) FC 含量計(ji)算:
TC 含量(μmol/dL)=x×100。
2. 組(zu)織中(zhong) FC 含量計算(suan):
(1) 按樣本蛋白(bai)濃度計(ji)算
TC 含量(μmol/mg prot)=x×V 提取÷(Cpr×V 提取)=x÷Cpr。
(2) 按樣本鮮重(zhong)計算
TC 含量(liang)(μmol/g 鮮重)=x×V 提取÷W= x÷W
3. 細胞(bao)、細菌中 TC 含量計算:
TC 含量(μmol/104cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100:1dL=100mL;V 提取:加入樣(yang)本的提取液(ye)體(ti)(ti)積,1mL;W:樣(yang)本質量,g;500:500 萬個細胞數量。
注意事項
當△A 大于(yu) 1 時(shi),建議將(jiang)樣本用提取液稀釋后再進行(xing)測定。
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