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全蛋白提取試劑盒（中）

全蛋白提取試劑盒（中）用于哺乳動物組織和細胞中提取總蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為溫和，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產品組成:
 

操作方法:
1、組織總蛋白的提取
在(zai)1ml的(de)冷裂解液中(zhong)各(ge)加入10ul的(de)磷(lin)酸酶(mei)抑制劑、蛋白酶(mei)抑制劑和PMSF；混勻，放置在(zai)冰上(shang)備用(yong)；
稱取(qu)0.1g的(de)(de)新鮮組織，放置于玻璃(li)勻漿器(qi)的(de)(de)入口緩沖處，用眼科剪(jian)將組織塊(kuai)盡(jin)可能的(de)(de)剪(jian)碎，然后(hou)加入0.5-1ml的(de)(de)新配(pei)置的(de)(de)裂解液，研(yan)磨直沒有(you)明(ming)顯的(de)(de)組織塊(kuai)，這個過程(cheng)注意冰(bing)上操作；
將(jiang)組織(zhi)勻漿液移(yi)入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取(qu)上清新的管中；
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提(ti)取好的(de)蛋白建(jian)議保(bao)存(cun)于-80 oC，即(ji)用即(ji)取，避免反復凍融，避免長時間儲(chu)存(cun)。)
2、細胞總蛋(dan)白(bai)的(de)提取
裂解(jie)(jie)液的用(yong)量：107個細(xi)胞需要裂解(jie)(jie)液1ml；
貼壁細(xi)胞(bao)：棄(qi)去(qu)培養(yang)基，用冷的PBS洗兩次，棄(qi)去(qu)PBS，然后加入計算好(hao)的細(xi)胞(bao)裂解液(ye)；在冰上用細(xi)胞(bao)刮刀進(jin)行刮離(li)細(xi)胞(bao)，
將刮離的細(xi)胞裂解(jie)液移入EP管中(zhong)，顛倒裂解(jie)20-30min
懸浮細(xi)胞：4 oC 400g離心(xin)收集細(xi)胞，用冷(leng)的(de)PBS洗兩次細(xi)胞，同樣按細(xi)胞數加入裂解(jie)液(ye)，
渦旋(xuan)10s，放置冰(bing)上裂解10min，重復3-4次；
裂(lie)解完畢(bi)之后，將細胞(bao)裂(lie)解液(ye)4 oC 12000g離心30min；
將(jiang)上(shang)清移(yi)入新(xin)的EP管中；
進行蛋白(bai)定量或者變(bian)性進行蛋白(bai)實驗。
（提取(qu)好(hao)的蛋白(bai)建議保(bao)存于-80 oC，即用即取(qu)，避(bi)免反復凍融，避(bi)免長時間儲存。)

注意事項：
實驗過程，所有試劑都要需要預冷或(huo)者即融(rong)，保證操作(zuo)過程中的低(di)溫環境；
PSMF（有毒）現用現加，因為PMSF在水(shui)溶液中會快(kuai)速降解(jie)；

相關文獻:
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
《A new nanoscale transdermal drug delivery system: oil body-linked oleosin-hEGF improves skin regeneration to accelerate wound healing》 作者:Weidong Qiang,?Tingting Zhou,?Xinxin Lan,?Xiaomei Zhang,?Yongxin Guo,?Muhammad Noman,?Linna Du,?Jie Zheng,?Wenqing Li,?Haoyang Li,?Yubin Lu,?Hongyu Wang,?Lili Guan,?Linbo Zhang,?Xiaokun Li,?Jing Yang?&?Haiyan Li? 期刊:Journal of Nanobiotechnologyvolume  影響因子:5.345 PMID:30165861
《The Expression Pattern of PLIN2 in Differentiated Adipocytes from Qinchuan Cattle Analysis of Its Protein Structure and Interaction with CGI-58》 作者:Peiwei Li , Yaning Wang , Le Zhang , Yue Ning  and Linsen Zan 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:29723991
《Cytotoxic Tricycloalternarene Compounds from Endophyte Alternaria sp. W-1 Associated with Laminaria japonica》 作者:Li Shen, Shu-Juan Tian , Hui-Liang Song , Xi Chen , Hao Guo, Dan Wan , Yu-Rou Wang , Feng-Wu Wang and Li-Jun Liu 期刊:Marine Drugs 影響因子:3.772 PMID:30360544
《Silencing of NOD2 protects against diabetic cardiomyopathy in a murine diabetes model》 作者: Lin Shen， Li Li， Man Li， Weiling Wang ，Wenbin Yin ，Wei Liu ，Yanyan Hu 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30221681
《Egr-1 is involved in coronary microembolization-induced myocardial injury via Bim/Beclin-1 pathway-mediated autophagy inhibition and apoptosis activation》 作者:Xian-tao Wang, Xiao-dan Wu, Yuan-xi Lu,Yu-han Sun, Han-hua Zhu,Jia-bao Liang,Wen-kai He and Lang Li 期刊:Aging (Albany NY) 影響因子:5.515 PMID:30391937
《MiR-144-3p promotes the tumor growth and metastasis of papillary thyroid carcinoma by targeting paired box gene 8》 作者:Chang Liu, Chang Su, Yanchun Chen & Guang Li  期刊:Cancer Cell International 影響因子:23.916 PMID:
《The promotion on cell growth of androgen-dependent prostate cancer by antimony via mimicking androgen activity》 作者:Changwen Zhang，Penghao Li，Yingwu Wen，Guowei Feng，Yu Liu，Yangyi Zhang，Yong Xua，Zhihong Zhang 期(qi)刊:Toxicology Letters 影(ying)響因子:3.499 PMID:29462692

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