產品名稱(cheng)：NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒

產(chan)品(pin)英文名： NADP Malic Enzyme(NADP-ME) Assay Kit

產品貨號：BC1120         產(chan)地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/48樣         產品商標：solarbio
保(bao)存與運輸(shu)：4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存；            參考價格：420
庫存狀態(tai)：現(xian)貨                          
關鍵(jian)字：NADP蘋果酸酶(mei)試劑盒(he)|活性檢測(ce)試劑盒|NADP-ME活性檢測|試(shi)劑盒

簡要介(jie)紹：
ME 廣泛(fan)存(cun)在(zai)于微(wei)生物、培(pei)養細胞、動物和(he)植物胞漿中，尤其在(zai)植物組織中活(huo)(huo)性(xing)較高(gao)。ME 催(cui) 化蘋果(guo)酸氧化脫羧的可逆反應，產生丙(bing)tong酸和(he) CO2，以(yi)及(ji)伴(ban)隨 NAD(P)+的還原反應，是蘋果(guo)酸代謝 的關(guan)鍵酶。ME 活(huo)(huo)性(xing)與生物合成和(he)抗氧化密切相關(guan)。近年來植物 ME 活(huo)(huo)性(xing)測(ce)定(ding)較多，已經成為抗氧 化研(yan)究的熱點。根據(ju)輔酶專一性(xing)和(he)對底物特異性(xing)的不(bu)同，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和(he) NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催(cui)化 NADP+還原成 NADPH，在(zai) 340nm 下測(ce)定(ding) NADPH 增(zeng)加(jia)速率(lv)。

產品詳(xiang)細描述(shu)
產品(pin)內(nei)容(rong)：
提取液(ye)：液(ye)體 70mL×1 瓶，4℃保存(cun)；
試劑(ji)一：液(ye)體 40mL×1 瓶，4℃保存(cun)；
試劑(ji)二：粉劑(ji)×1 瓶，4℃保存；臨用前加入(ru) 20mL 提取液充分溶(rong)解備用；
試劑(ji)三(san)：粉劑(ji)×2 支，4℃保存；用時(shi)每支加 1mL 雙蒸(zheng)水(shui)充分(fen)溶解備用；
試劑四(si)：粉劑×2 支，-20℃保(bao)存；用時每支加 500μL 雙蒸水充(chong)分溶解備用。
工作液：在 15mL 試(shi)劑二(er)中加入 2mL 試(shi)劑三和 1mL 試(shi)劑四，可以根據比例現用現配(pei)。 產品說明：
ME 廣泛存在于微生(sheng)物、培(pei)養細(xi)胞、動物和(he)(he)植(zhi)(zhi)物胞漿中，尤其在植(zhi)(zhi)物組織中活性(xing)較高。ME 催(cui) 化(hua)蘋果酸(suan)氧(yang)化(hua)脫羧(suo)的(de)可逆反(fan)應(ying)，產生(sheng)丙tong酸(suan)和(he)(he) CO2，以及伴(ban)隨 NAD(P)+的(de)還原(yuan)反(fan)應(ying)，是蘋果酸(suan)代謝 的(de)關鍵酶。ME 活性(xing)與生(sheng)物合成和(he)(he)抗(kang)氧(yang)化(hua)密切相關。近(jin)年來植(zhi)(zhi)物 ME 活性(xing)測(ce)定(ding)較多，已經成為抗(kang)氧(yang) 化(hua)研究的(de)熱點。根(gen)據輔(fu)酶專(zhuan)一性(xing)和(he)(he)對底物特異性(xing)的(de)不同，可將(jiang) ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和(he)(he) NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催(cui)化(hua) NADP+還原(yuan)成 NADPH，在 340nm 下(xia)測(ce)定(ding) NADPH 增(zeng)加(jia)速(su)率。 
試(shi)驗(yan)中所需的儀(yi)器和試(shi)劑(ji)： 紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液(ye)器(qi)、1mL 石英比色皿、勻漿(jiang)器(qi)和蒸餾水 

操作步驟： 

• 粗酶(mei)液提取(qu)：

細(xi)(xi)(xi)菌(jun)、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)或(huo)(huo)組織樣品的制備： 細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)(huo)培養細(xi)(xi)(xi)胞(bao)：先收集細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)到離(li)心(xin)管內，棄上清，按(an)照(zhao)每 500 萬細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)加入 1mL 提取 液，超聲波破碎細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)（功率 20％，超聲 3s，間隔(ge) 10s，重復 30 次）。8000g 4℃離(li)心(xin) 10min， 取上清，置冰上待測。
組織：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液(ye)進(jin)行(xing)冰浴勻漿(jiang)。8000g 4℃離心 10min，取上清(qing)，置 冰上待測。 血清(qing)（漿(jiang)）樣品：直接(jie)檢測。

• 測定步驟：
• 紫外分光光度計預熱 30min 以上，調節波長 340nm，蒸(zheng)餾(liu)水調零。
• 將試劑一在 37℃（哺乳動物(wu)）或 25℃（其(qi)它(ta)物(wu)種(zhong)）中保溫 15min 左(zuo)右。
• 操作表：

將上(shang)述試劑按順序加入(ru) 1 mL 石(shi)英(ying)比(bi)色皿中，混勻后(hou)在 37℃（哺乳(ru)動物）或 25℃（其它物種）， 340 nm 波長下記錄(lu)初始吸光度(du) A1 和(he)反應 1min 后(hou)的吸光度(du) A2，計(ji)算ΔA=A2-A1。

注意事項：

1. 若 A2-A1 大于(yu) 0.5，需將(jiang)酶(mei)液用提取液稀釋，使 A2-A1 小于(yu) 0.5，可(ke)提高(gao)檢測靈敏(min)度。
2. 實驗時，試(shi)劑(ji)三、試(shi)劑(ji)四和(he)樣本在冰上放(fang)置，以免(mian)變性(xing)和(he)失活(huo)。試(shi)劑(ji)一 37℃或 25℃水(shui)浴放(fang)置。
3. 比(bi)色皿中反應液的(de)(de)溫(wen)度必須保(bao)持 37℃或 25℃，取(qu)小燒(shao)杯(bei)一(yi)(yi)只(zhi)裝(zhuang)入(ru)一(yi)(yi)定量的(de)(de) 37℃或 25℃蒸餾水， 將此燒(shao)杯(bei)放入(ru) 37℃或 25℃水浴(yu)鍋中。在(zai)反應過程中把比(bi)色皿連同反應液放在(zai)此燒(shao)杯(bei)中。
4. 兩個人同時做此(ci)實(shi)驗(yan)，一個人比(bi)色(se)，一個人計(ji)時，以保證實(shi)驗(yan)結果的準確性。
5. 如果ΔA＜0.01，可將反應(ying)時間延長到 5 分鐘或 10 分鐘。

• NADP-ME 活(huo)性(xing)計算：
• 組織中 NADP-ME 活力的計算：
• 按樣本(ben)蛋白濃度(du)計算：

單位(wei)的定義：每(mei) mg 組(zu)織蛋白在反應體系中(zhong)每(mei)分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位(wei)。
NADP-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

1. 按樣本鮮重計(ji)算：

單(dan)位的(de)定義：每(mei) g 組(zu)織在反應(ying)體系中每(mei)分鐘生成(cheng) 1 nmol NADPH 定義為一(yi)個酶活(huo)力單(dan)位。
NADP-ME（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總(zong)×W) ÷T =4823×ΔA÷W

1. 細菌或細胞中 NADP-ME 活(huo)力的計算：
2. 按樣本蛋白(bai)濃度(du)計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(ying)體系中(zhong)每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一(yi)個酶活力單位。
NADP-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣(yang)) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

1. 按(an)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞密度計算：

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每 1 萬個細菌或細胞在(zai)反應體系(xi)中每分鐘(zhong)生成 1 nmol NADPH 定(ding)義(yi)為(wei)一個酶活(huo)力 單位(wei)。
NADP-ME（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=9.65×ΔA。

1. 血(xue)清中 NADP-ME 活(huo)力(li)的計算(suan)：

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei) mL 血(xue)清在反應體系(xi)中每(mei)分鐘生(sheng)成 1 nmol NADPH 定(ding)義(yi)為(wei)一個酶(mei)活力單(dan)位(wei)。
NADP-ME（U/mL）＝[ΔA×V 反(fan)(fan)總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T =4823×ΔA。 V 反(fan)(fan)總：反(fan)(fan)應體(ti)系總體(ti)積，9×10 -4 L；ε：NADPH 摩(mo)爾(er)消光系數(shu)，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色(se) 皿光徑(jing)，1cm；V 樣：加入(ru)樣本(ben)體(ti)積，0.03 mL；V 樣總：加入(ru)提取液體(ti)積，1 mL；T：反(fan)(fan)應時間， 1min；Cpr：樣本(ben)蛋白(bai)質濃(nong)度，mg/mL；W：樣品質量，g；500：細菌(jun)或細胞總數(shu)，500 萬。

相關文獻：
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者(zhe):Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809

NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒