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細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法) solarbio

產品說明：
自噬(shi)(shi)(autophagy)是細(xi)胞(bao)受到刺激后吞噬(shi)(shi)自身的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)質(zhi)(zhi)或(huo)細(xi)胞(bao)器，終將吞噬(shi)(shi)物(wu)在溶酶(mei)體(ti)(ti)(ti)內(nei)降解(jie)的(de)(de)(de)過程，自噬(shi)(shi)體(ti)(ti)(ti)(autophagosome)為雙層膜包被的(de)(de)(de)圓形(xing)(xing)或(huo)橢(tuo)圓形(xing)(xing)結構，內(nei)含(han)細(xi)胞(bao)質(zhi)(zhi)、長(chang)壽蛋(dan)白質(zhi)(zhi)和(he)異(yi)常蛋(dan)白聚集物(wu)，損傷或(huo)多余細(xi)胞(bao)器如線(xian)粒體(ti)(ti)(ti)、粗面內(nei)質(zhi)(zhi)網(wang)和(he)微體(ti)(ti)(ti)、病毒(du)和(he)細(xi)菌等。單(dan)丹磺酰(xian)尸胺(an)(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色(se)素，是嗜酸性染色(se)劑，通常被用(yong)于檢測自噬(shi)(shi)體(ti)(ti)(ti)形(xing)(xing)成的(de)(de)(de)特異(yi)性標記(ji)染色(se)劑，其檢測激發濾光片(pian)波長(chang) 355nm。阻(zu)斷濾光片(pian)波長(chang) 512nm。細(xi)胞(bao)自噬(shi)(shi)染色(se)檢測試(shi)劑盒(MDC 法)，適用(yong)于培養細(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)自噬(shi)(shi)染色(se)，又稱(cheng)為 MDC 染色(se)液(ye)，可與EB 合用(yong)雙染。

自備材料：
熒光顯微鏡、低速離心機、EB 、載玻片、蓋(gai)玻片

操作步驟(僅供參考)：
(一)、MDC單獨染色：
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、 800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次，棄上清。
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞，計數并調節細胞濃度106/ml。
4、 取適量90μl的細胞懸液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。
5、 室溫避光染色15～45min。
6、 800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次，棄上清。
7、 加入100μl的Collection buffer重懸細胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。
8、 熒光顯微鏡下觀(guan)察(激發濾光片(pian)波長355nm，阻斷(duan)濾光片(pian)波長512nm)，計(ji)數并拍(pai)照。

注:貼壁(bi)細胞可(ke)以不(bu)消化，直接去除培養液(ye)，用(yong)1×Wash buffer清洗后進行(xing)染(ran)色(se)(se)。MDC的(de)量(liang)根據細胞數量(liang)進行(xing)調整。染(ran)色(se)(se)時間(jian)可(ke)適當延長(chang)根據染(ran)色(se)(se)結果進行(xing)調整，染(ran)色(se)(se)結束后，用(yong)1×Wash buffer清洗觀察即(ji)可(ke)，不(bu)加Collection buffer。

(二)、與EB雙染色：
1、用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次，棄上清。
3、加入適量的1×Wash buffer重懸細胞，計數并調節細胞濃度106/ml。
4、取適量90μl的細胞懸液新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混勻。
5、滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。
6、熒光顯(xian)微鏡下觀(guan)察(激發濾(lv)光片(pian)波長512nm)，計數并(bing)拍照。

細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法) solarbio