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說明：熒光色素；用于DNA、染色體和核酸的染色；熒光染色法和免疫熒光技術。Hoechst 33258 是一種可(ke)以穿(chuan)透細胞膜的藍(lan)色(se)熒(ying)光染料，它在嵌入雙(shuang)鏈 DNA 后釋放強烈的(de)藍色熒光(guang)，對細胞的(de)毒性較低。Hoechst 33258 常(chang)用(yong)于細(xi)(xi)胞凋(diao)亡檢(jian)測，染色后用(yong)熒(ying)光顯微(wei)鏡觀察或(huo)流式細(xi)(xi)胞儀檢(jian)測，也可以用(yong)于普通(tong)的細(xi)(xi)胞核染色，或(huo)常(chang)規(gui)的DNA染色。

物理性狀：黃(huang)色深黃(huang)色粉末；溶(rong)于水，黃(huang)或棕色溶(rong)液，參考(kao)濃度為9.80 - 10.20 mg/ml；熔點＞300℃。

用途：細胞(bao)遺傳學(xue)研究的(de)常用試劑，熒光染色細胞(bao)的(de)DNA ，插入DNA的(de)A-T區，具有(you)低(di)的(de)細胞(bao)毒性，形成膜(mo)滲透性熒光DNA鏈。

用于(yu)細胞核染色時，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。

熒光染料 Hoechst 33258

別名：2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)- 2,5'-bi(1H-benzimidazole) trihydrochloride;2-[2- (4-Hydroxyphenyl)-6-benzimidazoyl]-6-(1-methyl-4- piperazyl)benzimidazole trihydrochloride;HOE 33258； Hoechst 33258

配制母液

Hoechst 33258溶于(yu)水，溶解度可達(da)10mg/ml。因此可配(pei)制成10mg/ml的母液于(yu)4℃避光保存。

注意事項

1) Hoechst 33258 對人體(ti)有一定刺激性(xing)，請(qing)注意適當防護。

2) 熒光染料都存在淬滅(mie)的問(wen)題，建(jian)議染色后盡量當(dang)天完成(cheng)檢測。

3) 為減緩(huan)熒光(guang)淬滅(mie)可以使用抗熒光(guang)淬滅(mie)封(feng)片(pian)液。

4) 為了您的安全和健康，請穿實驗服(fu)并(bing)戴一(yi)次(ci)性手套操(cao)作。

使用方法

1.   用PBS或合(he)適的緩沖液(ye)制備(bei)10～50µM Hoechst 33258染色液(ye)。

2.   固定的細(xi)胞或組織染色：

對于固定的(de)細胞或(huo)組(zu)織樣(yang)品，固定后(hou)(hou)，適當(dang)洗滌去除固定劑。隨后(hou)(hou)如果需要進(jin)(jin)行(xing)免疫(yi)熒光(guang)染(ran)色，則行(xing)免疫(yi)熒光(guang)染(ran)色，染(ran)色完畢后(hou)(hou)再按后(hou)(hou)續步(bu)驟進(jin)(jin)行(xing)Hoechst33258染(ran)色。如果不需要進(jin)(jin)行(xing)其它染(ran)色，則直接進(jin)(jin)行(xing)后(hou)(hou)續的(de)Hoechst 33258染(ran)色。

a) 對于貼壁(bi)細(xi)胞(bao)或組(zu)織切片(pian)：加入適量(liang)Hoechst 33258染色(se)液，覆蓋(gai)住(zhu)樣品即可。對于懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)：少加入待測染色(se)樣品體積3倍的染色(se)液，混勻。室溫(wen)放置3-5分鐘(zhong)。

b) ; 吸除Hoechst 33258染色(se)液(ye)，用(yong)TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘(zhong)。

c) 直接在熒(ying)(ying)光顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)或封片(pian)后熒(ying)(ying)光顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)。激發(fa)(fa)波長350nm，發(fa)(fa)射波長460nm。

3.  活細胞或組(zu)織染色：

a) 細胞(bao)培養(yang)物中加入(ru)適量Hoechst 33258染色(se)液，約1/10細胞(bao)培養(yang)基(ji)體(ti)積，必(bi)須充分覆蓋(gai)住待染色(se)的樣(yang)品。通常對于六孔板(ban)一個(ge)孔需加入(ru)1ml染色(se)液，對于96孔板(ban)一個(ge)孔需加入(ru)100μl染色(se)液。

b) 在 37℃培養細胞 10～20 分鐘(zhong)。

c) 用 PBS或合適的緩(huan)沖(chong)液洗細胞(bao)兩次(ci)。

d) 直(zhi)接在熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察或封(feng)片后熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察。激(ji)發波長350nm，發射波長460nm。

 相關文獻：

《Dioscin-6′-O-acetate inhibits lung cancer cell proliferation via inducing cell cycle arrest and caspase-dependent apoptosis》 作者:XuejiaoLiaZhuoQubSongsongJingcXiaLiaChengchengZhaoaShuliMandYingWangeWenyuanGaoac 期刊:Phytomedicine 影響因子:3.61 PMID:30668391
《Protective effect of 17β-estradiol on hydrogen peroxide induced apoptosis of rat nucleus pulposus cells》 作者:Sheng-Hua Ning, Si-Dong Yang, Xu Zhang, Huan-Liu, Hai-Kun Wei, Hai-Ying Wang, Da-Long Yang, Wen-Yuan Ding 期刊:CLINICAL 影響因子:0.848 PMID:
《Protein kinase Cα inhibits myocardin-induced cardiomyocyte hypertrophy through the promotion of myocardin phosphorylation》 作者:Weizong Li,  Nan Wang,  Man Li,  Huiqin Gong,  Xinghua Liao, Xiaolong Yang , Tongcun Zhang 期刊:Acta Biochimica et Biophysica Sinica 影響因子:1.807 PMID:26206583
《Ethyl Pyruvate Attenuates CaCl2-Induced Tubular Epithelial Cell Injury by Inhibiting Autophagy and Inflammatory Responses》 作者:Zhao J， Cheng J， Li C， Xu M，Ma C， Qin L， Yi K， Liao N 期刊:kidney blood pressure research 影響因子:2.123 PMID:30352436
 

熒光染料 Hoechst 33258