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AO熒光染色試劑盒

產品內容：

產品說明：

AO屬于(yu)三環雜芳香燃料，可(ke)以標記DNA、RNA，屬于(yu)異染(ran)性熒(ying)(ying)光(guang)(guang)染(ran)料。該染(ran)料具有(you)膜通透性，能(neng)透過(guo)細胞膜，使(shi)核DNA和RNA染(ran)色(se)(se)。因(yin)(yin)此AO常(chang)用于(yu)細胞內DNA和RNA進行檢(jian)測。AO與核酸(suan)結(jie)合(he)方式(shi)(shi)主(zhu)要(yao)有(you)：1、插入(ru)性結(jie)合(he)，AO嵌(qian)入(ru)核酸(suan)雙鏈(lian)(lian)的(de)(de)(de)堿基對之間(jian)，這種(zhong)結(jie)合(he)方式(shi)(shi)主(zhu)要(yao)為AO與DNA的(de)(de)(de)結(jie)合(he)，其(qi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)發射(she)峰(feng)為530nm，激發后呈綠色(se)(se)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)；2、靜電(dian)吸引(yin)，帶正電(dian)荷的(de)(de)(de)AO與單(dan)鏈(lian)(lian)核酸(suan)的(de)(de)(de)磷酸(suan)根(帶負電(dian)荷)產生(sheng)靜電(dian)間(jian)的(de)(de)(de)吸引(yin)結(jie)合(he)，這種(zhong)結(jie)合(he)方式(shi)(shi)主(zhu)要(yao)為AO與RNA的(de)(de)(de)結(jie)合(he)，其(qi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)發射(she)峰(feng)為640nm，激發后呈紅(hong)色(se)(se)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)，少量結(jie)合(he)會呈桔(jie)黃(huang)色(se)(se)或桔(jie)紅(hong)色(se)(se)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)。因(yin)(yin)此，AO嵌(qian)合(he)到雙鏈(lian)(lian)DNA分子中顯綠色(se)(se)，與DNA單(dan)鏈(lian)(lian)或RNA結(jie)合(he)時(shi)發桔(jie)黃(huang)色(se)(se)或橙紅(hong)色(se)(se)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)。

AO熒光染色試劑盒(AO Detection Kit)主要由AO Stain、AO Stain Buffer組(zu)成(cheng)，常(chang)用于細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)凋(diao)(diao)亡(wang)的檢測。染(ran)(ran)色后在(zai)熒光(guang)(guang)顯(xian)微鏡(jing)下觀察，AO可(ke)透過正(zheng)常(chang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜，使細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)核呈綠(lv)色或黃(huang)綠(lv)色均(jun)勻熒光(guang)(guang)；而(er)在(zai)凋(diao)(diao)亡(wang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)中，因染(ran)(ran)色質固縮或斷裂(lie)為(wei)大小不等的片斷，形成(cheng)凋(diao)(diao)亡(wang)小體。AO使其(qi)染(ran)(ran)上致密濃染(ran)(ran)的黃(huang)綠(lv)色熒光(guang)(guang)或黃(huang)綠(lv)色碎片顆粒；而(er)壞死細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)黃(huang)熒光(guang)(guang)減弱甚至消失。AO染(ran)(ran)色常(chang)與EB染(ran)(ran)色合用雙染(ran)(ran)，EB只(zhi)染(ran)(ran)死細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)使之產生桔黃(huang)色熒光(guang)(guang)，由此(ci)可(ke)區(qu)分出正(zheng)常(chang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)、凋(diao)(diao)亡(wang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)及壞死細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。

自備材料：

        熒光顯微鏡， 低速離心機，PBS，細胞計數板， 載玻片(pian)、蓋玻片(pian)

操作步驟(僅供參考)：

(一) AO單獨染色

1、 收集細胞(采用流式細胞儀檢測時，應先固定細胞)，用AO Stain Buffer(1×)清洗細胞1次，加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細胞，計數并調節細胞濃度至10⁶/ml。

2、 取(qu)適量的(de)細(xi)胞懸(xuan)液和(he)AO Stain，按照細(xi)胞懸(xuan)液：AO Stain=19：1的(de)比(bi)例(li)混(hun)合，輕輕混(hun)勻。如果采用熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡下觀察，一(yi)般(ban)取(qu)95μl細(xi)胞懸(xuan)液和(he)5μl AO Stain混(hun)合即可(ke)。

3、 室溫避光染色15min，滴(di)加(jia)于載玻(bo)片上(shang)并加(jia)蓋玻(bo)片或上(shang)流式細胞儀(yi)分析。

4、 熒光顯微鏡下觀察(激發濾(lv)光片波長488nm，阻斷濾(lv)光片波長515nm)，計數并拍照。

染色結果：

(二) AO/EB雙染色

1、 收集細胞，用AO Stain Buffer(1×)清洗細胞1次，加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細胞，計數并調節細胞濃度至10⁶/ml。

2、 取(qu)適量(liang)的細胞懸(xuan)液(ye)和(he)(he)AO Stain，按照細胞懸(xuan)液(ye)：AO Stain=19：1的比例混(hun)(hun)合，并(bing)加入(ru)適量(liang)EB染(ran)色液(ye)，輕輕混(hun)(hun)勻。如果(guo)采(cai)用熒光(guang)顯微鏡(jing)下觀察，一(yi)般取(qu)95μl細胞懸(xuan)液(ye)和(he)(he)5μl AO Stain混(hun)(hun)合即可。

3、 室溫避光染色15min，滴(di)加于載玻片上并加蓋玻片

4、 熒光顯微鏡濾光片515nm觀察(cha)，計數(shu)并(bing)拍照。

染色結(jie)果：

計算細胞凋亡率和死亡率:

細(xi)胞(bao)死(si)(si)亡(wang)率(lv)=凋亡(wang)細(xi)胞(bao)/細(xi)胞(bao)總數×100%   細(xi)胞(bao)壞(huai)(huai)死(si)(si)率(lv)=壞(huai)(huai)死(si)(si)細(xi)胞(bao)/細(xi)胞(bao)總數×100%

注意事項：

      1． AO染(ran)(ran)色常不EB染(ran)(ran)色合(he)用，可(ke)區(qu)分出(chu)正常細(xi)(xi)胞(bao)(bao)、凋亡(wang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)及(ji)壞死(si)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)。

      2． 如(ru)有低溫離(li)心機(ji)進行離(li)心效果更佳，同時應注(zhu)意(yi)減少試(shi)劑(ji)暴露于強光下的時間(jian)。

      3． 為了您的安全和健康，請穿(chuan)實驗服并(bing)戴一次性(xing)手(shou)套操作。