線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性檢測試劑盒

產品名(ming)稱:：  線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性檢測試劑盒

產品英文名:Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅡActivity Assay Kit

產品貨號：BC3230           產地：北京市(shi)通州區(qu)馬駒(ju)橋聯東U谷8三樓(lou)

產品規格：50管/48樣         產品商標：solarbio
保存(cun)(cun)與運輸：4℃保存(cun)(cun)或(huo)-20℃保存(cun)(cun)；            參考價格：2200
庫存狀態：現(xian)貨(huo)             ;             
關(guan)鍵字：：   ：  ：  線粒(li)體呼吸鏈(lian)復合體Ⅱ檢測(ce)試劑盒|  線(xian)粒體(ti)呼吸(xi)鏈復合(he)體(ti)Ⅱ|線粒體呼(hu)吸鏈|試(shi)劑(ji)盒

簡(jian)要介(jie)紹：
線粒體(ti)復合體(ti)Ⅱ又稱琥(hu)珀(po)酸-輔(fu)酶Q 還(huan)(huan)原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yang)細胞的線粒體(ti)中，催(cui)化(hua)琥(hu)珀(po)酸氧(yang)化(hua)生成(cheng)延(yan)胡(hu)索酸，同時輔(fu)基(ji)FAD 還(huan)(huan)原為FADH2，后者進一(yi)步還(huan)(huan)原氧(yang)化(hua)型輔(fu)酶Q 生成(cheng)還(huan)(huan)原型輔(fu)酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。
    復合體(ti)Ⅱ的(de)(de)催化產物還原型輔酶Q 可進(jin)一(yi)步還原2,6-二(er)(er)氯吲哚(duo)酚，2,6-二(er)(er)氯吲哚(duo)酚在605nm 有特征(zheng)吸收峰，通過檢(jian)測2,6-二(er)(er)氯吲哚(duo)酚的(de)(de)減少速率(lv)來(lai)計算(suan)該酶活性。

產品詳細描(miao)述(shu)
產品內容：
提(ti)取液(ye)：液(ye)體45mL×1 瓶，4℃保存；
試劑(ji)一：液體40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑(ji)二：粉劑(ji)×1 支，-20℃保存；溶于1mL丙tong，可(ke)分裝后-20℃保存。臨(lin)用前再用丙tong100倍稀釋(shi)后使用。
試劑(ji)三：粉劑(ji)×1 支，4℃保存(cun)；臨(lin)用前加入2mL丙tong溶解備用。
試劑四：液體2.5mL×1 瓶，4℃保存；
產品說明：
線粒體(ti)(ti)復合體(ti)(ti)Ⅱ又稱琥(hu)珀(po)酸(suan)-輔(fu)酶(mei)Q 還原酶(mei)，廣泛存在(zai)于動物(wu)、植物(wu)、微(wei)生物(wu)和培(pei)養細胞(bao)的線粒體(ti)(ti)中，催化琥(hu)珀(po)酸(suan)氧化生成延胡索酸(suan)，同時輔(fu)基FAD 還原為(wei)FADH₂，后者進一(yi)步還原氧(yang)化型輔(fu)酶(mei)Q 生(sheng)成還原型輔(fu)酶(mei)Q，是(shi)呼吸電子傳(chuan)遞鏈的支路(lu)。
復合體Ⅱ的催(cui)化產(chan)物還原型輔酶Q 可進(jin)一步(bu)還原2,6-二(er)氯(lv)(lv)吲哚(duo)酚，2,6-二(er)氯(lv)(lv)吲哚(duo)酚在605nm 有特征吸收峰(feng)，通過檢測2,6-二(er)氯(lv)(lv)吲哚(duo)酚的減少速率來計算(suan)該(gai)酶活性。
試(shi)驗(yan)中(zhong)所需的(de)儀器(qi)和試(shi)劑：
可見分光光度計、臺式(shi)離心機、水浴鍋、可調式(shi)移液器(qi)(qi)、1mL玻璃(li)比色(se)皿(min)、研(yan)缽/勻漿(jiang)器(qi)(qi)、丙tong、冰(bing)和(he)蒸餾水。
操作步(bu)驟：
一、復合體(ti)Ⅱ的(de)提取： 

1. 稱(cheng)取約0.1g組織(zhi)或收集500萬細胞，加入1.0 mL提(ti)取液，用勻漿器(qi)或研缽于冰上(shang)勻漿。
2. 4 ℃ 600 g離心10min。
3. 將上清液移另一離(li)心(xin)管中，4 ℃ 11000 g離(li)心(xin)15min。
4. 上清液(ye)即胞漿提(ti)取(qu)物(wu)，可用于測定(ding)從線粒(li)體(ti)泄(xie)漏的(de)復合體(ti)Ⅱ（此步可選做，可以(yi)判斷線粒(li)體(ti)提(ti)取(qu)效果(guo)）。
5. 在沉淀中加入400μL提取液(ye)，超聲波破碎（功率20％，超聲5秒，間隔10秒，重復(fu)15次(ci)），用于(yu)復(fu)合體Ⅱ酶(mei)活性測(ce)定，并且用于(yu)蛋白含量(liang)測(ce)定。

二(er)、測定步驟(zou)：

1. 可見分光光度計預熱30min 以上，調節波(bo)長605nm，蒸餾水調零。
2. 樣(yang)本測(ce)定

1. 工(gong)作液的配制：臨用(yong)前將試(shi)劑二和試(shi)劑三按(an)1：1混(hun)合，現用(yong)現配；
2. 將試劑(ji)一37℃（哺乳動物(wu)）或25℃（其(qi)他物(wu)種）預熱15min；
3. 在1mL玻璃(li)比(bi)色(se)皿中分別加入：

三、復合體Ⅱ活力單位的計算：  
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定(ding)義：每mg 組織蛋(dan)白每分鐘消耗(hao)1 nmol 2,6-二氯吲哚酚(fen)定(ding)義為一個酶活力單位。
復合體(ti)Ⅱ活(huo)力(U/mg prot)= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T= 476.2×ΔA÷Cpr
V 反總：反應體系總體積，10^-3 L；ε：2,6-二氯(lv)吲哚酚摩爾消(xiao)光系數，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色(se)皿光(guang)徑，1cm；V 樣：加入樣本(ben)體積，0.05mL；T：反(fan)應時間，2 min；Cpr：樣本(ben)蛋白質濃度，mg/mL。
注意事項(xiang)：

1. 為保(bao)證實(shi)驗(yan)結果的準確性，需先取1-2個樣(yang)做預實(shi)驗(yan)，如(ru)果測定的吸光值過(guo)高（高于1.5），可用蒸餾水稀釋上清液后再(zai)測定。計算結果時注意(yi)乘以稀釋倍(bei)數。若ΔA大于(yu)0.4，需將樣本稀(xi)釋適當倍(bei)數(shu)（計算公式中乘以(yi)相應稀(xi)釋倍(bei)數(shu)）；若ΔA偏小，則可以(yi)通過增加加入(ru)的樣品體積來提高靈敏度。
2. 樣品蛋白濃度需自行(xing)測(ce)(ce)定(ding)，推薦我公司(si)BCA蛋白濃度測(ce)(ce)定(ding)試劑(ji)盒。由于提取液中含有蛋白，所以在測(ce)(ce)定(ding)樣品蛋白濃度時(shi)需要減(jian)去提取液本(ben)身的蛋白含量。
3. 推薦使用樣本蛋白濃度(du)計(ji)算(suan)酶活(huo)(huo)，若用樣本鮮重計(ji)算(suan)，則需加測胞漿提取物酶活(huo)(huo)，上清和沉淀酶活(huo)(huo)之和方為總酶活(huo)(huo)。
4. 本試劑盒試劑足夠完成(cheng)25管反(fan)應。
5. 附:使用(yong)樣(yang)本(ben)重量計算公式：（樣(yang)本(ben)檢測數為25T/12S）

A、上(shang)清(qing)中復合體II活力的計算:
按樣(yang)本鮮重計算：
單位的定義：每(mei)g組織在反(fan)應體系中每分鐘(zhong)消(xiao)耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為(wei)一個酶活力單位。
復合體II活性（U/g）= [ΔA1×V 反總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提(ti)取×V樣本(ben))）÷T
                    =476.2×ΔA1÷W。
ΔA1：上清(qing)測定值；V 反總：反應體系(xi)總體積，10^-3 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光(guang)系數，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿(min)光徑，1cm；V提(ti)取：加入提(ti)取液體積，1mL ；V 樣：加入樣本體(ti)積(ji)，0.05mL；T：反應時間，2 min；W：樣本重量，g。
B、沉淀(dian)中復合體II活(huo)力的計算:
按樣本(ben)鮮(xian)重計算：
單位(wei)的定義：每g組織在反應體(ti)系中每分鐘消(xiao)耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。
復合體II活性（U/g）= [ΔA2×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提(ti)取×V樣本(ben))）÷T
                    =190.5×ΔA2÷W。
ΔA2：沉(chen)淀測定(ding)值；V 反總：反應體系總體積(ji)，10^-3 L；ε：2,6-二(er)氯吲哚(duo)酚摩爾(er)消光系(xi)數，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑(jing)，1cm；V提取：沉(chen)淀重懸(xuan)體積，0.4mL ；V 樣(yang)(yang)：加入樣(yang)(yang)本體積(ji)，0.05mL；T：反應(ying)時間(jian)，2 min；W：樣(yang)(yang)本重量，g。
C、樣本(ben)復合體II總活力(li)的計算:
樣本復合體(ti)II總活力即為上清中復合體(ti)II活力(li)與沉淀中復合(he)體II活力之和(he)。
按樣本鮮重(zhong)計算：
復合體(ti)II（U/g 鮮重）=476.2×ΔA1÷W +190.5×ΔA2÷W。

相關文獻：
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