色8久久人人97超碰香蕉987_亚洲乱码日产精品M_18禁美女裸体网站无遮挡_日韩精品无码免费专区午夜不卡

特級胎牛血清

血清通常作為補充(chong)成(cheng)分添(tian)加(jia)在基礎培(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基內使用(yong)。它能夠提供各種(zhong)大分子蛋(dan)白，小分子量營養(yang)(yang)，水溶性成(cheng)分的(de)轉運蛋(dan)白，和其它一(yi)些細(xi)胞(bao)在體外所必需的(de)成(cheng)分，如(ru)激(ji)素和附著(zhu)因子。血清可以結合或中和一(yi)些生(sheng)長因子中的(de)有毒成(cheng)分，并提供培(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基的(de)緩沖(chong)能力。細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)時(shi)血清的(de)添(tian)加(jia)依賴于基礎培(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基的(de)化學組成(cheng)，培(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)細(xi)胞(bao)的(de)類型，及所用(yong)的(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)系(xi)統。

我(wo)(wo)們在(zai)提供細胞培(pei)養(yang)基、平(ping)衡(heng)鹽(yan)溶液、無血清(qing)培(pei)養(yang)基和試劑的同(tong)時，還提供高(gao)(gao)品質(zhi)的血清(qing)。我(wo)(wo)們對血清(qing)制備進行(xing)全過(guo)程(cheng)(cheng)(cheng)監管。從血清(qing)收集到終產品檢驗和內部稽核(he)的每一(yi)個(ge)(ge)步驟(zou)，我(wo)(wo)們都采(cai)用設備和標(biao)準操(cao)作程(cheng)(cheng)(cheng)序，以(yi)確(que)保整個(ge)(ge)過(guo)程(cheng)(cheng)(cheng)中每個(ge)(ge)環節的產品質(zhi)量。對整個(ge)(ge)過(guo)程(cheng)(cheng)(cheng)的控制可(ke)以(yi)保證產品的持續(xu)高(gao)(gao)品質(zhi)，降低不同(tong)批次的差異(yi)。

處(chu)(chu)(chu)理(li)：全部血(xue)(xue)清(qing)：收集(ji)的(de)血(xue)(xue)液(ye)均在冷(leng)藏條件下處(chu)(chu)(chu)理(li)。血(xue)(xue)清(qing)和(he)血(xue)(xue)塊分離后(hou)立(li)即將血(xue)(xue)清(qing)合并并冷(leng)凍。只有符合我們的(de)檢測標(biao)準的(de)血(xue)(xue)清(qing)才被(bei)接受作進一步處(chu)(chu)(chu)理(li)。

熱(re)滅(mie)活血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)：熱(re)滅(mie)活是在(zai)(zai)56℃水浴中嚴格控溫(wen)30分(fen)鐘。透析(xi)血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)：用(yong)10,000截留分(fen)子量的(de)(de)(de)(de)透析(xi)膜在(zai)(zai)0.15M的(de)(de)(de)(de)NaCl中進行(xing)透析(xi)，直到葡萄(tao)糖水平低于5mg/dl(用(yong)鄰(lin)甲苯胺測試法檢(jian)驗(yan))。γ射(she)(she)線照(zhao)射(she)(she)血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)：可按客(ke)戶要(yao)求對血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)進行(xing)γ射(she)(she)線照(zhao)射(she)(she)。通過γ射(she)(she)線照(zhao)射(she)(she)以(yi)滅(mie)活各種動物血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(包(bao)(bao)括(kuo)胎(tai)牛血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)、新(xin)生牛血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)、豬血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)和(he)馬血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing))中的(de)(de)(de)(de)病毒(du)和(he)支原體的(de)(de)(de)(de)方法已經(jing)得到證實(shi)(shi)。研究(jiu)證實(shi)(shi)照(zhao)射(she)(she)劑(ji)量在(zai)(zai)30-45kGy為宜(yi)。血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)在(zai)(zai)此照(zhao)射(she)(she)后(hou)物理化學特(te)性(xing)和(he)細胞培養表現沒有變化。裝瓶：粗血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)須通過一系列(lie)的(de)(de)(de)(de)過濾(lv)(lv)才成(cheng)為成(cheng)品。后(hou)的(de)(de)(de)(de)過濾(lv)(lv)步驟包(bao)(bao)括(kuo)使用(yong)0.2um和(he)0.1um的(de)(de)(de)(de)無菌過濾(lv)(lv)。胎(tai)牛血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)須通過三次(ci)0.1um過濾(lv)(lv)，其他血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)須通過0.2um過濾(lv)(lv)。終(zhong)產(chan)品的(de)(de)(de)(de)質量控制：我們采取以(yi)下方法對每一批次(ci)的(de)(de)(de)(de)產(chan)品選取一定(ding)數量的(de)(de)(de)(de)樣品進行(xing)質量控制分(fen)析(xi)：

化學檢(jian)測：使用低溫(wen)凝(ning)固點的方法檢(jian)測滲(shen)透壓，以保證符合產(chan)品規范。我們每天使用國家(jia)標(biao)準的技術研究所(suo)(suo)標(biao)定的標(biao)準溶液(ye)對我們的滲(shen)透壓檢(jian)測儀器進行校準。同樣每天使用國家(jia)標(biao)準技術研究所(suo)(suo)標(biao)定的標(biao)準溶液(ye)對pH計(ji)進行校準。

使用電(dian)泳圖(tu)譜鑒定血(xue)清(qing)的整體(ti)性質(zhi)。樣品(pin)被轉移到硝酸纖維素(su)基質(zhi)中，并在(zai)緩(huan)沖體(ti)系內遷移。條(tiao)帶(dai)經染色、清(qing)潔、干燥后用密度儀進行掃描，以檢測白蛋(dan)白和球蛋(dan)白組分的相對濃度。為證實是否(fou)在(zai)適當(dang)的條(tiao)件下進行采血(xue)和處理，使用修飾(shi)的Fleming方法對血(xue)紅蛋(dan)白進行分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度檢測。

隨著動物年齡(ling)的增加，血(xue)清總蛋白(bai)含量也相應(ying)地(di)提高。使(shi)用(yong)自(zi)動化的Biuret方法進行總血(xue)清蛋白(bai)的檢(jian)測(ce)，以(yi)確認動物年齡(ling)并驗證符合(he)產品(pin)規范(fan)。使(shi)用(yong)色度計在不同波(bo)長下檢(jian)測(ce)樣品(pin)和Biuret試劑混合(he)波(bo)的吸光度。自(zi)動計算結果后，與標準曲線比較，即(ji)可得到蛋白(bai)值(克/公升)。

穩(wen)定(ding)(ding)性檢測(ce)(ce)程序(xu)：在每一個標記為體外診(zhen)斷的(de)(de)產(chan)品(pin)上顯示的(de)(de)效期表明(ming)了這個產(chan)品(pin)具有多長(chang)時間(jian)的(de)(de)效能(neng)。我們(men)的(de)(de)穩(wen)定(ding)(ding)性程序(xu)確(que)定(ding)(ding)和證(zheng)明(ming)了產(chan)品(pin)效期。我們(men)定(ding)(ding)期監測(ce)(ce)批量產(chan)品(pin)，確(que)定(ding)(ding)產(chan)品(pin)在推薦(jian)貯(zhu)存條(tiao)件(jian)下(xia)具有可接受(shou)效果的(de)(de)時間(jian)長(chang)度。

微生物學檢測(ce)：所有血(xue)清使用(yong)Barile&Kern的(de)(de)(de)大體積方(fang)(fang)法(fa)檢測(ce)支(zhi)(zhi)原(yuan)體。在(zai)(zai)推薦方(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)檢測(ce)范(fan)圍內檢測(ce)結果是準確的(de)(de)(de)。樣品少(shao)應該在(zai)(zai)肉(rou)湯(tang)(tang)(tang)中(zhong)(zhong)合并培(pei)養3個星期(qi)，同時要在(zai)(zai)瓊脂(zhi)平(ping)(ping)板上(shang)進(jin)(jin)行(xing)(xing)不少(shao)于4次(ci)傳代培(pei)養。在(zai)(zai)有氧和厭氧(95%氮，5%CO2)條件下(xia)，平(ping)(ping)板在(zai)(zai)36±2℃下(xia)孵(fu)育(yu)。在(zai)(zai)檢測(ce)過程中(zhong)(zhong)，每周對瓊脂(zhi)平(ping)(ping)板進(jin)(jin)行(xing)(xing)一次(ci)微生物生長情況檢驗。使用(yong)Dienes染(ran)色法(fa)對懷疑被污染(ran)的(de)(de)(de)瓊脂(zhi)平(ping)(ping)板進(jin)(jin)行(xing)(xing)支(zhi)(zhi)原(yuan)體菌落的(de)(de)(de)檢測(ce)。然后，對平(ping)(ping)板進(jin)(jin)行(xing)(xing)再(zai)次(ci)鏡檢。對孵(fu)育(yu)肉(rou)湯(tang)(tang)(tang)瓶要定期(qi)進(jin)(jin)行(xing)(xing)濁度和pH值變動(dong)的(de)(de)(de)檢測(ce)。在(zai)(zai)推薦方(fang)(fang)法(fa)檢測(ce)范(fan)圍內，所有血(xue)清也要使用(yong)Hoechst熒光(guang)DNA染(ran)色法(fa)進(jin)(jin)行(xing)(xing)不可在(zai)(zai)肉(rou)湯(tang)(tang)(tang)中(zhong)(zhong)培(pei)養的(de)(de)(de)支(zhi)(zhi)原(yuan)體(包(bao)括M.hyorhinis屬)檢測(ce)。

病毒(du)檢(jian)測：已知(zhi)無外來物質(zhi)的(de)(de)(de)細胞(bao)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)須經(jing)過在(zai)包含(han)15%測試血清(qing)的(de)(de)(de)生長培(pei)養(yang)(yang)基(ji)中進(jin)(jin)行(xing)(xing)為(wei)期(qi)(qi)21天(tian)(tian)的(de)(de)(de)三次傳代培(pei)養(yang)(yang)。使用對照培(pei)養(yang)(yang)基(ji)和已知(zhi)對外來物質(zhi)為(wei)陰(yin)性的(de)(de)(de)血清(qing)平行(xing)(xing)地維持(chi)陰(yin)性對照培(pei)養(yang)(yang)。整個期(qi)(qi)間，檢(jian)測所有(you)的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)情(qing)況，以便(bian)發現是(shi)否(fou)存在(zai)病毒(du)誘發的(de)(de)(de)細胞(bao)形態改變或(huo)致細胞(bao)病變效(xiao)應。在(zai)1421天(tian)(tian)的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)期(qi)(qi)間，對含(han)有(you)檢(jian)測血清(qing)的(de)(de)(de)平行(xing)(xing)培(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)按(an)下面標(biao)準病毒(du)檢(jian)測方法進(jin)(jin)行(xing)(xing)評估(gu)。

將其中(zhong)一瓶檢(jian)(jian)(jian)測(ce)細胞(bao)用胰蛋白酶消(xiao)化，然(ran)后把細胞(bao)分別加(jia)入到總面積為(wei)(wei)6cm 2 的六室載玻(bo)片上。同時準備陰(yin)性(xing)對(dui)照載玻(bo)片。在(zai)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)培(pei)養的單(dan)室載玻(bo)片上加(jia)入牛病(bing)毒性(xing)腹瀉病(bing)毒(BVDV)、牛細小病(bing)毒、牛腺病(bing)毒、狂(kuang)犬病(bing)毒和(he)呼腸(chang)病(bing)毒的染(ran)色(se)劑，作為(wei)(wei)單(dan)個的陽性(xing)對(dui)照。再經過(guo)7天培(pei)養(總共21天)，利用熒(ying)光(guang)抗體(ti)技(ji)術檢(jian)(jian)(jian)測(ce)病(bing)毒。

通過對檢測培養進行蘇木精伊(yi)紅染色，觀(guan)察致(zhi)細(xi)胞突(tu)變效應(ying)(CPE)或(huo)其他病毒誘導效應(ying)。檢測細(xi)胞是(shi)否存(cun)在CPE效應(ying)、內含物、多核體或(huo)其他異常效應(ying)。

內毒(du)素檢(jian)(jian)測：我們用阿米(mi)巴變形細(xi)胞溶解物(LAL)凝膠(jiao)法來檢(jian)(jian)測胎(tai)牛血(xue)清的內毒(du)素含量。

效能檢測：
對每一批次的特級胎牛血清，我們(men)都進行下述培養效(xiao)(xiao)(xiao)能(neng)(neng)檢測(ce)。選擇血清重要的(de)標(biao)準是其支持特殊細胞的(de)生(sheng)(sheng)長能(neng)(neng)力。因此，除了(le)保證血清通過嚴格的(de)品質控制(zhi)，我們(men)也同時(shi)在(zai)實驗(yan)室條件下對血清的(de)三個重要的(de)培養效(xiao)(xiao)(xiao)能(neng)(neng)進行檢測(ce)：克隆效(xiao)(xiao)(xiao)率、貼壁效(xiao)(xiao)(xiao)果和二倍(bei)體成(cheng)纖維細胞生(sheng)(sheng)長促進。

克隆效率分析：克隆效率實驗分析每一批胎牛血清促進小鼠骨髓瘤細胞及其衍生的雜交瘤細胞的克隆和生長能力。下列產品
經驗證可用于該實驗：
Sp2/0-Ag14(ATCC #CRL 1581)
P3x63-Ag8.653(ATCC #CRL 1580)

每(mei)一批(pi)胎牛(niu)血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)都要(yao)分別在(zai)復(fu)制微(wei)(wei)量(liang)滴定平(ping)板(ban)上加入兩種血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)濃(nong)(nong)度(du)和(he)(he)兩種細胞接種量(liang)(10%血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)和(he)(he)1cell/孔，4%血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)和(he)(he)5cells/孔)的(de)(de)(de)情況下進行分析。克隆分析結果除(chu)以已確定的(de)(de)(de)參照血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)值(zhi)得以歸(gui)一化。在(zai)許多日常雜(za)交選(xuan)擇程序中(zhong)(zhong)具有代表性的(de)(de)(de)是(shi)高濃(nong)(nong)度(du)的(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)，而低濃(nong)(nong)度(du)血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)在(zai)設(she)計血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)批(pi)次(ci)(ci)細微(wei)(wei)差(cha)異放大檢測(ce)(ce)中(zhong)(zhong)有更為嚴(yan)格(ge)的(de)(de)(de)測(ce)(ce)試。嚴(yan)格(ge)的(de)(de)(de)1cell/孔測(ce)(ce)試是(shi)模(mo)擬單一雜(za)交選(xuan)擇的(de)(de)(de)實驗室條(tiao)件。為每(mei)一批(pi)次(ci)(ci)胎牛(niu)血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)提供的(de)(de)(de)分析證明(ming)報告中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)克隆效率(lv)值(zhi)為兩次(ci)(ci)測(ce)(ce)試條(tiao)件下的(de)(de)(de)平(ping)均值(zhi)。

克隆分析法：克隆分析法是在復式96孔板中加入兩種胎牛血清濃度(10%v/v)和(4%v/v)和兩種接種量的情況下進行的。每一次化驗中，同時測量前期已驗證合格的一批胎牛血清，并將此測量值作為內部參考標準。
克隆分析按下述方(fang)法進行：

1．Sp2/0-Ag14(sp2)和P3x63-Ag8.653(653)在含有(you)10%的胎(tai)牛血清的RPM1640中通常保持對(dui)(dui)數(shu)生長期(qi)。在顯微鏡下，利用臺盼藍排除法(fa)對(dui)(dui)活細胞進行計數(shu)。

2．用(yong)RPM1640培(pei)養(yang)(yang)基(ji)將儲備(bei)細胞懸浮液進(jin)行連續稀釋，使(shi)其(qi)達到預期(qi)的(de)25cells/ml和(he)5cells/ml接種(zhong)濃(nong)度。準備(bei)含(han)有(you)參照或測(ce)試胎(tai)牛血(xue)清的(de)RPM1640培(pei)養(yang)(yang)基(ji)。將這種(zhong)密度的(de)細胞分(fen)(fen)(fen)配到各個分(fen)(fen)(fen)析(xi)生長(chang)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)體積為(wei)0.2毫升的(de)孔(kong)中，使(shi)其(qi)分(fen)(fen)(fen)別(bie)平均含(han)有(you)5個和(he)1個細胞。

3．將(jiang)96孔板放入36±2℃，4-6% CO 2 的(de)潮濕培養箱(xiang)孵(fu)育約1015天。

4．在孵育(yu)期間，用(yong)(yong)肉眼觀察平板并對用(yong)(yong)于克隆的孔進行計(ji)數(shu)(shu)。克隆效率按下列方法計(ji)算：克隆效率=(陽(yang)性(xing)孔平均數(shu)(shu)/孵育(yu)孔總數(shu)(shu))×100%

5．每一(yi)批次胎牛血(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)維持(chi)指示(shi)劑(ji)骨髓瘤(liu)細(xi)胞(bao)克隆效(xiao)率(lv)(lv)的(de)(de)定量按照以下方(fang)法測(ce)(ce)得的(de)(de)相對克隆效(xiao)率(lv)(lv)(RCE)進行(xing)歸一(yi)化：RCE=檢(jian)(jian)測(ce)(ce)血(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)的(de)(de)克隆效(xiao)率(lv)(lv)/對照血(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)的(de)(de)克隆效(xiao)率(lv)(lv)貼(tie)壁(bi)效(xiao)率(lv)(lv)分析(xi)：貼(tie)壁(bi)效(xiao)率(lv)(lv)分析(xi)是利用(yong)已轉型的(de)(de)人類細(xi)胞(bao)系來檢(jian)(jian)測(ce)(ce)每一(yi)批血(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)促使持(chi)續貼(tie)附細(xi)胞(bao)系的(de)(de)生長能力。選擇已被驗證可以檢(jian)(jian)測(ce)(ce)貼(tie)壁(bi)效(xiao)率(lv)(lv)的(de)(de)細(xi)胞(bao)系A549(人肺腫瘤(liu)細(xi)胞(bao)，ATCC#CCL,185)，是因為它(ta)可以區分一(yi)批血(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)維持(chi)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)和繁殖能力的(de)(de)細(xi)微差異。

每(mei)一(yi)批次(ci)胎牛血(xue)清(qing)(qing)都要在兩種血(xue)清(qing)(qing)濃度(du)和兩種細(xi)胞接種濃度(du)下(10%血(xue)清(qing)(qing)和100cells/孔，4%血(xue)清(qing)(qing)和200cells/孔)測(ce)試三次(ci)。在36±;2℃，4-6% CO 2 的潮濕培養箱(xiang)孵育約(yue)1014天，對被(bei)染色的細(xi)胞菌落(luo)進行(xing)計數即可(ke)(ke)得(de)(de)到其貼(tie)壁效率。將結果除以(yi)參(can)考(kao)的對照血(xue)清(qing)(qing)得(de)(de)以(yi)歸(gui)一(yi)化。通過兩種血(xue)清(qing)(qing)濃度(du)的測(ce)試，可(ke)(ke)以(yi)驗證該批次(ci)血(xue)清(qing)(qing)在減量和標準水(shui)平下維持生長的能力(li)。為每(mei)一(yi)批次(ci)胎牛血(xue)清(qing)(qing)提供的分(fen)析(xi)證明報告中的貼(tie)壁效率值(zhi)為兩次(ci)測(ce)試條(tiao)件下的平均值(zhi)。

貼(tie)壁分(fen)析(xi)法：使(shi)用貼(tie)附分(fen)析(xi)檢(jian)測上(shang)述每一批測試血清。這種分(fen)析(xi)法針對每一個(ge)血清樣(yang)品(pin)使(shi)用一個(ge)6孔板(每室(shi)9.6cm 2 )，并可(ke)以(yi)對三個(ge)孔的(de)數據進行平(ping)均(jun)處理。每一次(ci)化(hua)驗(yan)(yan)中，同時(shi)測量前期已驗(yan)(yan)證合格的(de)一批胎牛血清，并將此(ci)測量值作為內部參考標準(zhun)。

貼附分析按下述方法進行：

1．A549細胞系(xi)用含有(you)10%胎牛(niu)血清的DMEM培養基，在36±2℃，以亞融合密度(du)下進行培養。

2．含10%(v/v)和4%(v/v)血(xue)清的DMEM由分別在22.5毫(hao)(hao)(hao)升(sheng)(sheng)和24毫(hao)(hao)(hao)升(sheng)(sheng)DMEM中加(jia)入2.5毫(hao)(hao)(hao)升(sheng)(sheng)和1毫(hao)(hao)(hao)升(sheng)(sheng)胎(tai)牛(niu)血(xue)清配(pei)制而成，終有(you)效(xiao)體積為25毫(hao)(hao)(hao)升(sheng)(sheng)。將5毫(hao)(hao)(hao)升(sheng)(sheng)含血(xue)清培養基分別加(jia)入6孔(kong)板(ban)的每(mei)一(yi)個(ge)孔(kong)中。

3．A549培(pei)養細胞先經過(guo)胰蛋(dan)白酶(mei)消化，測定活細胞數，然后稀釋細胞懸浮液2,000cells/ml。

4．將0.1毫(hao)升(sheng)細胞懸浮(fu)液加(jia)入(ru)(ru)200cells/孔(kong)室(shi)中(zhong)，0.05毫(hao)升(sheng)懸浮(fu)液加(jia)入(ru)(ru)100cells/孔(kong)室(shi)中(zhong)。平板混合后(hou)放入(ru)(ru)36±2℃，5%CO 2 的(de)潮濕培(pei)養箱孵育約1014天。

5．孵(fu)育后，取出平板(ban)，去除生長培養基，用亞甲基蘭-甲醇溶液對(dui)菌落進行染色。

6．計算菌落形成，然后按下述方法(fa)計算貼壁效率：%貼壁效率=每(mei)孔菌落平均數/每(mei)孔孵育(yu)活細胞平均數×100

7．為方便比較(jiao)，將(jiang)測(ce)得的(de)貼壁(bi)效率(lv)(lv)數值(zhi)除以每批檢測(ce)血(xue)清的(de)相對貼壁(bi)效率(lv)(lv)(RPE)得以歸一(yi)化：RCE=檢測(ce)血(xue)清的(de)貼壁(bi)效率(lv)(lv)/參照血(xue)清的(de)貼壁(bi)效率(lv)(lv)二倍(bei)體成纖(xian)維(wei)細胞生長(chang)：促進生長(chang)分(fen)析用于檢測(ce)每一(yi)批胎牛(niu)血(xue)清維(wei)持難培養的(de)人(ren)二倍(bei)體成纖(xian)維(wei)細胞長(chang)期生長(chang)的(de)能力。

下(xia)列(lie)細胞系經認(ren)證可用于(yu)該實驗(yan)：

WI-38(人二(er)倍體(ti)肺成(cheng)纖維細胞，ATCC#CCL 75)

WI-38細(xi)(xi)胞在(zai)含5%胎牛(niu)血清的低(di)密度(du)(2X10 5 /瓶(ping))復式(shi)25-cm 2瓶(ping)中孵育(yu)，并進行為(wei)期三個連續7天(tian)的傳代培(pei)(pei)養(yang)。在(zai)每(mei)一個培(pei)(pei)養(yang)期，細(xi)(xi)胞都(dou)從初始孵育(yu)密度(du)開始傳代培(pei)(pei)養(yang)。壓力(li)分層率(lv)、成倍繁殖數量(liang)和減(jian)量(liang)血清濃(nong)度(du)是每(mei)批次促進難培(pei)(pei)養(yang)二倍體細(xi)(xi)胞的生(sheng)長血清的嚴格測(ce)試(shi)指標(biao)。通過連續三代培(pei)(pei)養(yang)以減(jian)少(shao)前一次生(sheng)長培(pei)(pei)養(yang)基的殘留影響，從而保證(zheng)得到檢測(ce)批促進生(sheng)長能力(li)的真實結果。為(wei)每(mei)一批次胎牛(niu)血清提供的分析證(zheng)明報告為(wei)第三次傳代培(pei)(pei)養(yang)每(mei)復式(shi)培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)細(xi)(xi)胞數的平(ping)均值。將檢測(ce)值除以參考(kao)對照值得以歸一化。

二倍(bei)(bei)體成纖維細(xi)胞(bao)生長(chang)(chang)分析法：培養(yang)數代WI-38人類二倍(bei)(bei)體肺成纖維細(xi)胞(bao)，計算每一代的(de)細(xi)胞(bao)總數。此項(xiang)檢(jian)測所(suo)挑(tiao)選出的(de)胎牛血清批號能維持(chi)難以生長(chang)(chang)細(xi)胞(bao)、貼壁性細(xi)胞(bao)、正常(chang)的(de)細(xi)胞(bao)株生長(chang)(chang)及存(cun)活。

1．準備(bei)含5%檢測血(xue)清或(huo)已(yi)驗證合格的參照血(xue)清生長(chang)培(pei)養基(ji)(ji)，基(ji)(ji)礎生長(chang)培(pei)養基(ji)(ji)為含L-谷氨酰胺的HBME：EBME(1：1)。按要求(qiu)，在(zai)每一次流量變化和分析(xi)過程中(zhong)進行傳(chuan)代培(pei)養時需配制含5%血(xue)清生長(chang)的培(pei)養基(ji)(ji)。

2．在(zai)低代(dai)培養(yang)水(shui)平時，將(jiang)2X10 5 WI-38細胞加入(ru)(ru)各個(ge)含9.5毫升生長培養(yang)基(ji)的復式25-cm 2 培養(yang)基(ji)中(zhong)。在(zai)不(bu)擰緊瓶蓋的情(qing)況下，將(jiang)培養(yang)瓶放入(ru)(ru)4-6%CO 2， 36℃±2℃環境中(zhong)，保持24小時。然后擰緊瓶蓋，將(jiang)培養(yang)瓶放在(zai)36℃±2℃下孵育7天(tian)(tian)，在(zai)第(di)2天(tian)(tian)或第(di)3天(tian)(tian)全(quan)部更換培養(yang)基(ji)。

3．在第(di)7天，用胰蛋(dan)白酶對每一(yi)個(ge)含(han)(han)參照(zhao)(zhao)或檢測(ce)血清(qing)的復式瓶中的細胞進行消化得(de)到一(yi)定數量細胞，然后合并并計數。將2x10 5 WI-38細胞加(jia)入含(han)(han)有新(xin)鮮生長培養(yang)基(已加(jia)入了與上一(yi)代(dai)同一(yi)批次(ci)的參照(zhao)(zhao)或檢測(ce)胎(tai)牛血清(qing))的新(xin)的復式25-cm 2 瓶中，進行細胞傳代(dai)培養(yang)。按第(di)2步所述，將培養(yang)瓶進行平衡并孵育(yu)。

4．如上所述(shu)經過三代(dai)連續分析(xi)，在每一代(dai)結(jie)束時計算每一批參(can)照或檢(jian)測血清的每瓶細(xi)胞平均數。后一代(dai)培養的各批檢(jian)測血清實(shi)驗中(zhong)的相(xiang)對生長(chang)率(RGR)作(zuo)為參(can)照血清實(shi)驗中(zhong)獲(huo)得的細(xi)胞生長(chang)率分子(zi)：

%RGR=檢測血(xue)清(qing)實(shi)驗中每瓶(ping)平均細(xi)(xi)胞(bao)(bao)數(shu)(shu)/參照血(xue)清(qing)實(shi)驗中每瓶(ping)平均細(xi)(xi)胞(bao)(bao)數(shu)(shu)X100S f9細(xi)(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)長(chang)促進(jin)分析。通(tong)過(guo)昆蟲分析可(ke)以保證(zheng)您購買的胎牛(niu)血(xue)清(qing)批(pi)次可(ke)以維(wei)持S f9細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的生(sheng)長(chang)。收到產(chan)品(pin)后，您需要做的就是(shi)混勻血(xue)清(qing)，在56℃下熱滅活30分鐘。這種分析法(fa)(fa)也可(ke)以用(yong)于乳白(bai)蛋白(bai)水解產(chan)品(pin)、酵母和其它生(sheng)長(chang)輔料作為(wei)原料的生(sheng)物效能分析。該分析法(fa)(fa)的準確(que)性取決于是(shi)否用(yong)常規(gui)的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)方案進(jin)行培養(yang)。用(yong)臺盼藍染色排除法(fa)(fa)測得的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)活性少不低于80%。

細胞生長分析法。

1．使用含10%檢測(ce)或參照熱滅活(huo)胎牛血清的已驗證(zheng)的Grace昆明培(pei)養基(ji)配制(zhi)*檢測(ce)培(pei)養基(ji)。

2．將(jiang)儲備Sf9細胞(bao)加入50毫升(sheng)離(li)心(xin)管中(zhong)，在50Xg下離(li)心(xin)5分鐘。然后將(jiang)每支試管的沉淀物(wu)重(zhong)新用含10%的檢測(ce)或(huo)參照(zhao)熱滅活(huo)胎牛血(xue)清*培養基配制(zhi)成懸(xuan)浮液。

3．反試管顛倒幾次，然后每支(zhi)試管倒出1毫(hao)升(sheng)樣品。用臺盼藍染色(se)排除(chu)進行活細胞計數。

4．如(ru)果活性≥80%，把試(shi)管(guan)再(zai)顛倒幾(ji)次并(bing)取出0.25毫升樣品(pin)。然后用Coulter計(ji)數器進行細(xi)胞計(ji)數。

5．將細胞(bao)加入Erlenmeyer瓶(ping)中，使其終細胞(bao)濃度(du)為2.75X10 5 cells/ml。孵(fu)育后，再一次進行細胞(bao)計數，以保證細胞(bao)密度(du)為2.5X10 5 3.0X10 5 cells/ml。

6．將培養瓶(ping)放到搖床上，在27℃±1℃、80-90rpm條件下孵(fu)育96小時。

7．從每一培(pei)養瓶(ping)中(zhong)分(fen)別取(qu)出(chu)0.25毫(hao)升樣品，用Coulter計數(shu)器進行(xing)計數(shu)。同時取(qu)出(chu)一定量的樣品進行(xing)細胞活(huo)性(xing)檢測。

8．將檢測(ce)細(xi)胞密度(du)(du)與(yu)參照(zhao)細(xi)胞密度(du)(du)相(xiang)比(bi)即可得到相(xiang)對細(xi)胞密度(du)(du)(RCN)。

噬菌(jun)體檢(jian)測(ce):我(wo)們利用溶菌(jun)斑分析法(fa)來(lai)檢(jian)測(ce)是否存在(zai)(zai)噬菌(jun)體。從每一(yi)批(pi)血清中取(qu)具代表性的樣品加入胰蛋白酶磷酸(suan)瓊(qiong)脂中，并在(zai)(zai)其(qi)加入含有(you)噬菌(jun)體敏感(gan)的大腸桿菌(jun)懸浮液(C-3000或K-12)。然(ran)后，混合物會在(zai)(zai)胰蛋白酶磷酸(suan)瓊(qiong)脂平板上分層，在(zai)(zai)36±2℃環境下孵育約24小時(shi)后，觀察平板上溶菌(jun)斑的形(xing)態。

生化特征檢測。

血紅蛋白檢(jian)測：所有批次的(de)(de)胎牛血清我們都(dou)進行了血紅蛋白的(de)(de)檢(jian)測，血紅蛋白含量低于《中國生物(wu)制(zhi)品主要原輔材料指控指標》(2000年版)公布的(de)(de)指標。

效能檢測：其它血清

新生牛血清。檢測新生牛血清維持超(chao)過三代VERO細胞生長的(de)能(neng)力。在每一個(ge)培養(yang)期，細胞都(dou)從初始孵育密度開始傳代培養(yang)。可將(jiang)所得(de)結果與使用含有已知(zhi)特征的(de)參照(zhao)血清對照(zhao)生長培養(yang)基獲得(de)的(de)平(ping)行(xing)結果進(jin)行(xing)比較(jiao)。

馬血(xue)清(qing)(qing)。每一批(pi)馬血(xue)清(qing)(qing)被(bei)檢測維持在含(han)有檢測批(pi)血(xue)清(qing)(qing)的對照培(pei)養基上(shang)Sp2/0-Ag14(小鼠(shu)骨(gu)髓瘤)細胞生長的能力。可將(jiang)所得(de)結果與使用含(han)有已知特征(zheng)的參照血(xue)清(qing)(qing)對照生長培(pei)養基獲得(de)的平(ping)行(xing)結果進行(xing)比較。

血(xue)(xue)清的使(shi)用(yong)與儲(chu)存(cun)：正確(que)的使(shi)用(yong)及(ji)保存(cun)血(xue)(xue)清，才(cai)能使(shi)血(xue)(xue)清發揮應(ying)有的作用(yong)。

1. 儲(chu)存(cun)(cun)條件：血清(qing)(qing)一般(ban)儲(chu)存(cun)(cun)于(yu)－20℃，同時(shi)應避(bi)免反復凍(dong)融。購買大包裝(zhuang)(zhuang)的血清(qing)(qing)后，先(xian)要滅活處理，然(ran)后分裝(zhuang)(zhuang)成小包裝(zhuang)(zhuang)，儲(chu)存(cun)(cun)于(yu)－20℃，使用(yong)前(qian)融化(hua)。融化(hua)時(shi)好(hao)先(xian)置于(yu)4℃。融化(hua)后的血清(qing)(qing)在4℃不宜長時(shi)間存(cun)(cun)放，應盡快使用(yong)。

2. 使(shi)(shi)用(yong)(yong)濃度：自從有了合(he)成(cheng)(cheng)培養(yang)基，血(xue)清(qing)(qing)就(jiu)是(shi)作為一種(zhong)添加成(cheng)(cheng)分與合(he)成(cheng)(cheng)培養(yang)基混合(he)使(shi)(shi)用(yong)(yong)，使(shi)(shi)用(yong)(yong)濃度一般為5－20％，常用(yong)(yong)是(shi)10％。過多血(xue)清(qing)(qing)容易(yi)使(shi)(shi)培養(yang)中(zhong)的(de)細胞發生變化，特別是(shi)一些二倍體的(de)無限細胞系，迅速生長之(zhi)后容易(yi)發生惡性轉(zhuan)化。

關于血(xue)清使用中的(de)常見問題

1.保存血清好的辦法？
我們(men)建議(yi)血(xue)清應保存在-5℃-20℃。若你(ni)一次無法用完一瓶，建議(yi)您無菌分裝血(xue)清恰當的滅菌容器內，再(zai)放(fang)回冷凍。

2.如何解凍血清才不會使產品質量受損？
我們建議您將血清從冷凍箱(xiang)中(zhong)取出后，先置于2-8℃冰箱(xiang)中(zhong)使之溶(rong)解，然后在室溫下使之全溶(rong)。但必須注意的(de)是，溶(rong)解過程(cheng)中(zhong)必須規則地搖晃均勻。

3.血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理？
血清中沉淀物的出現有許多原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性造成的；而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成血清沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。
若您(nin)(nin)欲(yu)去除這些(xie)絮(xu)狀沉淀(dian)物(wu)，可(ke)以將(jiang)血清分裝無菌離(li)心(xin)管中，以400g稍微(wei)離(li)心(xin)，上清液(ye)即可(ke)接著加入培養基內一起過(guo)濾。我們不建議您(nin)(nin)以過(guo)濾的(de)方法(fa)去除這些(xie)絮(xu)狀沉淀(dian)物(wu)，因(yin)為它可(ke)能會(hui)阻塞您(nin)(nin)的(de)過(guo)濾膜。

4.何謂熱滅活？有必要做熱滅活嗎？
一般以56℃，30分鐘水浴來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活性，而補體所參與的反應有：溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經過處理的血清對細胞生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。
而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱滅活這一步。如此以來，不但節省您寶貴的時間，更確保您的質量！

5.如何避免沉淀物的出現？
我們建議您在使用血清(qing)的(de)時候，注意正確的(de)血清(qing)解凍步驟(zou)，并盡量避免滅(mie)活血清(qing)及長時間的(de)將血清(qing)置于高(gao)溫環境中。

產品訂購說明：
1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。 
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
5、請辦理完貨(huo)款(kuan)后，將收據(ju)、底單(dan)等連同收貨(huo)人的地址、姓名(ming)、等以(yi)傳真、、短信、等形(xing)式通知我們。