色8久久人人97超碰香蕉987_亚洲乱码日产精品M_18禁美女裸体网站无遮挡_日韩精品无码免费专区午夜不卡

狗外周血單核細胞分離液試劑盒

本品用于分離狗(gou)外(wai)周(zhou)血(xue)單核細胞(bao)。

本品易感染(ran)細菌(jun)，需無菌(jun)條件操(cao)作。無菌(jun)條件下操(cao)作，啟封(feng)后置常溫(wen)保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xian)白(bai)色結晶，影響(xiang)分離效果(guo)。

狗外周血單核細胞分離液試劑盒

操(cao)作(zuo)步驟： 1. 取(qu)(qu)新鮮抗凝全(quan)血(xue)(xue)(xue)（EDTA、枸櫞酸鈉(na)或(huo)(huo)肝素(su)抗凝血(xue)(xue)(xue)均可(ke)）或(huo)(huo)者(zhe)去纖維蛋白(bai)(bai)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)，用(yong)等體(ti)積的(de)(de)全(quan)血(xue)(xue)(xue)及組織(zhi)稀釋液(ye)(ye)(ye)或(huo)(huo)者(zhe)PBS稀釋全(quan)血(xue)(xue)(xue)。 2. 取(qu)(qu)一(yi)支(zhi)無(wu)菌(jun)離(li)(li)心(xin)(xin)管(guan)，先加入試(shi)劑(ji)(ji)(ji)A，再加入試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D，使兩者(zhe)形(xing)成(cheng)梯度界面(mian)（試(shi)劑(ji)(ji)(ji)A：試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D的(de)(de)體(ti)積比為(wei)3：2，如稀釋后的(de)(de)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)樣(yang)(yang)本小(xiao)(xiao)于(yu)(yu)(yu)5ml，則先后加入3ml試(shi)劑(ji)(ji)(ji)A和2ml試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D；如稀釋后的(de)(de)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)樣(yang)(yang)本大于(yu)(yu)(yu)5ml，試(shi)劑(ji)(ji)(ji)總量與稀釋后的(de)(de)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)樣(yang)(yang)本量相等），兩種試(shi)劑(ji)(ji)(ji)的(de)(de)分(fen)(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)一(yi)定要清(qing)晰。 3. 將稀釋后的(de)(de)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)平(ping)(ping)鋪到分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)(ye)液(ye)(ye)(ye)面(mian)上(shang)方，注(zhu)意保持兩液(ye)(ye)(ye)面(mian)界面(mian)清(qing)晰。（可(ke)以使用(yong)巴氏德吸(xi)管(guan)吸(xi)取(qu)(qu)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)，然(ran)后將血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)小(xiao)(xiao)心(xin)(xin)的(de)(de)平(ping)(ping)鋪于(yu)(yu)(yu)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)(ye)上(shang)，因為(wei)兩者(zhe)的(de)(de)密度差異，將形(xing)成(cheng)明(ming)(ming)顯(xian)的(de)(de)分(fen)(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)界面(mian)。如果(guo)樣(yang)(yang)品較(jiao)多，加樣(yang)(yang)的(de)(de)時(shi)間較(jiao)長，在離(li)(li)心(xin)(xin)之前出(chu)現紅細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)成(cheng)團下(xia)沉屬正常現象(xiang)） 4. 室溫，水平(ping)(ping)轉子500~800g，離(li)(li)心(xin)(xin)20~30min（血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)的(de)(de)體(ti)積越大所需(xu)的(de)(de)離(li)(li)心(xin)(xin)力越大，離(li)(li)心(xin)(xin)時(shi)間越長，分(fen)(fen)離(li)(li)條(tiao)件需(xu)自行(xing)摸(mo)索，離(li)(li)心(xin)(xin)轉速不(bu)超過1000g）。 5. 離(li)(li)心(xin)(xin)后將出(chu)現明(ming)(ming)顯(xian)的(de)(de)分(fen)(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)： 層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)血(xue)(xue)(xue)漿層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第二層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)白(bai)(bai)色單核(he)(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第三(san)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)透(tou)(tou)明(ming)(ming)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D液(ye)(ye)(ye)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第四(si)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)半(ban)透(tou)(tou)明(ming)(ming)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)A液(ye)(ye)(ye)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第五(wu)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)紅細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)（如圖示）。 6. 小(xiao)(xiao)心(xin)(xin)吸(xi)取(qu)(qu)第二層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)和第三(san)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)乳白(bai)(bai)色細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)到另一(yi)無(wu)菌(jun)的(de)(de)15ml離(li)(li)心(xin)(xin)管(guan)中，加入10mL細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)洗滌液(ye)(ye)(ye)或(huo)(huo)PBS，顛倒混勻，250g，離(li)(li)心(xin)(xin)10min。 7. 棄上(shang)清(qing)，5mL的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)清(qing)洗液(ye)(ye)(ye)或(huo)(huo)PBS重懸(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，250g，離(li)(li)心(xin)(xin)10min。 8. 重復步驟7 9. 棄上(shang)清(qing)，細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)重懸(xuan)備用(yong)。 10. 差異貼(tie)(tie)(tie)(tie)壁(bi)法純(chun)化細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)：用(yong)單核(he)(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)基以10 6個/ml的(de)(de)密度重懸(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，將細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)鋪于(yu)(yu)(yu)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)板或(huo)(huo)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)瓶中，置于(yu)(yu)(yu)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)箱(xiang)中進行(xing)貼(tie)(tie)(tie)(tie)壁(bi)培(pei)養(yang)(yang)。 1) 2~4 h內貼(tie)(tie)(tie)(tie)壁(bi)的(de)(de)為(wei)單核(he)(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。 2) 10~24 h內貼(tie)(tie)(tie)(tie)壁(bi)的(de)(de)單個核(he)(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)為(wei)內皮、內皮祖(zu)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)、干(gan)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao) 。 3) 不(bu)貼(tie)(tie)(tie)(tie)壁(bi)的(de)(de)為(wei)淋巴細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。根據不(bu)同細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)貼(tie)(tie)(tie)(tie)壁(bi)時(shi)間存在差異，以達到簡(jian)單純(chun)化單核(he)(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)目的(de)(de)。此法成(cheng)本低，操(cao)作(zuo)簡(jian)便。如需(xu)獲得高(gao)純(chun)度的(de)(de)目的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)則需(xu)選(xuan)用(yong)免疫磁珠分(fen)(fen)選(xuan)或(huo)(huo)者(zhe)是應用(yong)流式技術(shu)分(fen)(fen)選(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。