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牛外周血單核細胞分離液試劑盒
貨號：P5280
規格：2×200ml/KIT
保存 ：室溫避光(guang)儲存，有效期少 2 年

牛外周血單核細胞分離液試劑盒

操(cao)作步驟： 1. 取(qu)(qu)新鮮(xian)抗凝(ning)全血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)（EDTA、枸櫞酸鈉(na)或肝素(su)抗凝(ning)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)均可）或者(zhe)(zhe)去纖維蛋白(bai)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)，用(yong)(yong)等(deng)體(ti)積的(de)(de)(de)(de)全血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)及組織稀(xi)釋(shi)液(ye)(ye)(ye)(ye)或者(zhe)(zhe)PBS稀(xi)釋(shi)全血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)。 2. 取(qu)(qu)一(yi)支(zhi)無菌(jun)離(li)(li)心(xin)管，先加(jia)入試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)A，再(zai)加(jia)入試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)D，使(shi)兩(liang)者(zhe)(zhe)形成(cheng)梯度(du)界面(mian)(mian)（試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)A：試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)D的(de)(de)(de)(de)體(ti)積比為3：2，如稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)樣本小(xiao)(xiao)于(yu)5ml，則先后(hou)(hou)加(jia)入3ml試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)A和2ml試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)D；如稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)樣本大于(yu)5ml，試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)總量(liang)與稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)樣本量(liang)相等(deng)），兩(liang)種試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)一(yi)定要清晰(xi)。 3. 將(jiang)(jiang)(jiang)稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)平(ping)鋪(pu)到分(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)液(ye)(ye)(ye)(ye)面(mian)(mian)上(shang)(shang)方(fang)，注意(yi)(yi)保(bao)持兩(liang)液(ye)(ye)(ye)(ye)面(mian)(mian)界面(mian)(mian)清晰(xi)。（可以使(shi)用(yong)(yong)巴氏(shi)德吸管吸取(qu)(qu)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)，然后(hou)(hou)將(jiang)(jiang)(jiang)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)小(xiao)(xiao)心(xin)的(de)(de)(de)(de)平(ping)鋪(pu)于(yu)分(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)上(shang)(shang)，因為兩(liang)者(zhe)(zhe)的(de)(de)(de)(de)密度(du)差(cha)異(yi)(yi)，將(jiang)(jiang)(jiang)形成(cheng)明(ming)顯的(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)界面(mian)(mian)。如果(guo)樣品較多，加(jia)樣的(de)(de)(de)(de)時(shi)間(jian)(jian)較長，在(zai)離(li)(li)心(xin)之前出現紅細(xi)(xi)(xi)(xi)胞成(cheng)團下沉屬正常現象(xiang)） 4. 室溫，水平(ping)轉子(zi)500~800g，離(li)(li)心(xin)20~30min（血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)體(ti)積越(yue)大所需的(de)(de)(de)(de)離(li)(li)心(xin)力越(yue)大，離(li)(li)心(xin)時(shi)間(jian)(jian)越(yue)長，分(fen)離(li)(li)條(tiao)件需自(zi)行(xing)摸索，離(li)(li)心(xin)轉速不(bu)超過1000g）。 5. 離(li)(li)心(xin)后(hou)(hou)將(jiang)(jiang)(jiang)出現明(ming)顯的(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)： 層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)漿(jiang)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第(di)(di)二層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為白(bai)色單(dan)(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第(di)(di)三(san)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為透明(ming)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)D液(ye)(ye)(ye)(ye)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第(di)(di)四層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為半透明(ming)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)A液(ye)(ye)(ye)(ye)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第(di)(di)五層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為紅細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)（如圖示(shi)）。 6. 小(xiao)(xiao)心(xin)吸取(qu)(qu)第(di)(di)二層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)D層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)和第(di)(di)三(san)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)乳白(bai)色細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)到另一(yi)無菌(jun)的(de)(de)(de)(de)15ml離(li)(li)心(xin)管中(zhong)，加(jia)入10mL細(xi)(xi)(xi)(xi)胞洗滌液(ye)(ye)(ye)(ye)或PBS，顛倒(dao)混勻，250g，離(li)(li)心(xin)10min。 7. 棄上(shang)(shang)清，5mL的(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞清洗液(ye)(ye)(ye)(ye)或PBS重(zhong)懸(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞，250g，離(li)(li)心(xin)10min。 8. 重(zhong)復步驟7 9. 棄上(shang)(shang)清，細(xi)(xi)(xi)(xi)胞重(zhong)懸(xuan)備(bei)用(yong)(yong)。 10. 差(cha)異(yi)(yi)貼(tie)(tie)壁(bi)(bi)法(fa)(fa)純(chun)化細(xi)(xi)(xi)(xi)胞：用(yong)(yong)單(dan)(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)基以10 6個/ml的(de)(de)(de)(de)密度(du)重(zhong)懸(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞，將(jiang)(jiang)(jiang)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞鋪(pu)于(yu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞板或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞瓶中(zhong)，置于(yu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)箱中(zhong)進行(xing)貼(tie)(tie)壁(bi)(bi)培(pei)養(yang)(yang)。 1) 2~4 h內貼(tie)(tie)壁(bi)(bi)的(de)(de)(de)(de)為單(dan)(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞。 2) 10~24 h內貼(tie)(tie)壁(bi)(bi)的(de)(de)(de)(de)單(dan)(dan)(dan)個核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞為內皮(pi)、內皮(pi)祖細(xi)(xi)(xi)(xi)胞、干細(xi)(xi)(xi)(xi)胞 。 3) 不(bu)貼(tie)(tie)壁(bi)(bi)的(de)(de)(de)(de)為淋巴細(xi)(xi)(xi)(xi)胞。根據(ju)不(bu)同細(xi)(xi)(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)(de)貼(tie)(tie)壁(bi)(bi)時(shi)間(jian)(jian)存在(zai)差(cha)異(yi)(yi)，以達到簡單(dan)(dan)(dan)純(chun)化單(dan)(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)。此法(fa)(fa)成(cheng)本低，操(cao)作簡便。如需獲得高(gao)純(chun)度(du)的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞則需選(xuan)用(yong)(yong)免疫磁珠分(fen)選(xuan)或者(zhe)(zhe)是應(ying)用(yong)(yong)流式技術分(fen)選(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞。血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)漿(jiang)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)單(dan)(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji) D 試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji) A 紅細(xi)(xi)(xi)(xi)胞層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)分(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)示(shi)意(yi)(yi)圖 Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd /82 Http://www.solarbio。。ｃｏｍ 第(di)(di) 2 頁 共 2 頁注意(yi)(yi)事項： A. 開(kai)封前顛倒(dao)混勻，本分(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)為無菌(jun)產品，為延(yan)長分(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)保(bao)存時(shi)間(jian)(jian)，請