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參考文獻：
《Responses of Transgenic Melatonin-Enriched Goats on LPS Stimulation and the Proteogenomic Profiles of Their PBMCs》 作者:Minghui Yang , Jingli Tao , Hao Wu , Lu Zhang, Yujun Yao , Lixi Liu , Tianqi Zhu , Hao Fan , Xudai Cui , Haoran Dou  and Guoshi Liu 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30111707

羊外周血單核細胞分離液試劑盒
貨號：P5290
規格：2×200ml/KIT
保存(cun) ：室溫避光儲存(cun)，有效期(qi)少 2 年。

羊外周血單核細胞分離液試劑盒

操作(zuo)(zuo)步(bu)驟： 1. 取(qu)(qu)(qu)(qu)新鮮抗凝(ning)全(quan)血(xue)(xue)(xue)（EDTA、枸櫞酸鈉或(huo)肝(gan)素抗凝(ning)血(xue)(xue)(xue)均可）或(huo)者去(qu)纖維蛋白(bai)(bai)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)，用(yong)等(deng)(deng)體(ti)(ti)積的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)全(quan)血(xue)(xue)(xue)及組(zu)織稀(xi)釋(shi)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)或(huo)者PBS稀(xi)釋(shi)全(quan)血(xue)(xue)(xue)。 2. 取(qu)(qu)(qu)(qu)一(yi)支無(wu)菌(jun)離(li)(li)心(xin)(xin)管，先(xian)加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)A，再加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D，使兩(liang)者形(xing)成(cheng)梯度(du)界(jie)面(mian)（試(shi)劑(ji)(ji)(ji)A：試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)體(ti)(ti)積比為(wei)(wei)3：2，如(ru)(ru)稀(xi)釋(shi)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)樣本(ben)小于5ml，則(ze)先(xian)后加(jia)入(ru)3ml試(shi)劑(ji)(ji)(ji)A和2ml試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D；如(ru)(ru)稀(xi)釋(shi)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)樣本(ben)大(da)于5ml，試(shi)劑(ji)(ji)(ji)總量(liang)與稀(xi)釋(shi)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)樣本(ben)量(liang)相(xiang)等(deng)(deng)），兩(liang)種試(shi)劑(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)一(yi)定要清晰。 3. 將稀(xi)釋(shi)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)平(ping)(ping)鋪到(dao)分(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)面(mian)上(shang)方，注(zhu)意保持(chi)兩(liang)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)面(mian)界(jie)面(mian)清晰。（可以使用(yong)巴氏(shi)德吸(xi)管吸(xi)取(qu)(qu)(qu)(qu)血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)，然后將血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)小心(xin)(xin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)平(ping)(ping)鋪于分(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)上(shang)，因(yin)為(wei)(wei)兩(liang)者的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)密(mi)度(du)差異(yi)，將形(xing)成(cheng)明顯(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)界(jie)面(mian)。如(ru)(ru)果樣品較(jiao)多，加(jia)樣的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)間較(jiao)長，在離(li)(li)心(xin)(xin)之(zhi)前出現紅細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)成(cheng)團下沉屬正常現象(xiang)） 4. 室溫(wen)，水(shui)平(ping)(ping)轉子500~800g，離(li)(li)心(xin)(xin)20~30min（血(xue)(xue)(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)體(ti)(ti)積越(yue)大(da)所需(xu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)離(li)(li)心(xin)(xin)力越(yue)大(da)，離(li)(li)心(xin)(xin)時(shi)間越(yue)長，分(fen)離(li)(li)條件需(xu)自行(xing)摸(mo)索，離(li)(li)心(xin)(xin)轉速不超過1000g）。 5. 離(li)(li)心(xin)(xin)后將出現明顯(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)： 層(ceng)(ceng)為(wei)(wei)血(xue)(xue)(xue)漿層(ceng)(ceng)；第(di)二層(ceng)(ceng)為(wei)(wei)白(bai)(bai)色(se)單(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)層(ceng)(ceng)；第(di)三層(ceng)(ceng)為(wei)(wei)透明試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)層(ceng)(ceng)；第(di)四層(ceng)(ceng)為(wei)(wei)半透明試(shi)劑(ji)(ji)(ji)A液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)層(ceng)(ceng)；第(di)五層(ceng)(ceng)為(wei)(wei)紅細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)層(ceng)(ceng)（如(ru)(ru)圖示）。 6. 小心(xin)(xin)吸(xi)取(qu)(qu)(qu)(qu)第(di)二層(ceng)(ceng)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)D層(ceng)(ceng)和第(di)三層(ceng)(ceng)乳白(bai)(bai)色(se)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)層(ceng)(ceng)到(dao)另一(yi)無(wu)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)15ml離(li)(li)心(xin)(xin)管中(zhong)(zhong)，加(jia)入(ru)10mL細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)洗(xi)滌液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)或(huo)PBS，顛倒混勻，250g，離(li)(li)心(xin)(xin)10min。 7. 棄上(shang)清，5mL的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)清洗(xi)液(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)(ye)或(huo)PBS重(zhong)懸細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，250g，離(li)(li)心(xin)(xin)10min。 8. 重(zhong)復步(bu)驟7 9. 棄上(shang)清，細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)重(zhong)懸備(bei)用(yong)。 10. 差異(yi)貼(tie)壁法純化(hua)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)：用(yong)單(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)養基(ji)以10 6個(ge)/ml的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)密(mi)度(du)重(zhong)懸細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，將細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)鋪于細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)板(ban)或(huo)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)瓶中(zhong)(zhong)，置于細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)(zhong)進行(xing)貼(tie)壁培(pei)養。 1) 2~4 h內(nei)(nei)貼(tie)壁的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)為(wei)(wei)單(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)。 2) 10~24 h內(nei)(nei)貼(tie)壁的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)單(dan)(dan)個(ge)核細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)為(wei)(wei)內(nei)(nei)皮、內(nei)(nei)皮祖細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、干細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao) 。 3) 不貼(tie)壁的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)為(wei)(wei)淋(lin)巴細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)。根(gen)據(ju)不同細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)貼(tie)壁時(shi)間存在差異(yi)，以達到(dao)簡(jian)單(dan)(dan)純化(hua)單(dan)(dan)核細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)目(mu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。此法成(cheng)本(ben)低，操作(zuo)(zuo)簡(jian)便。如(ru)(ru)需(xu)獲得高(gao)純度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)目(mu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)則(ze)需(xu)選(xuan)用(yong)免疫磁珠分(fen)選(xuan)或(huo)者是(shi)應用(yong)流(liu)式技術分(fen)選(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)。