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馬外周血單核細胞分離液試劑盒
貨號：P5300
規格：2×200ml/KIT
保存 ：室溫避光(guang)儲存，有效(xiao)期少 2 年。

馬外周血單核細胞分離液試劑盒

操作步(bu)(bu)驟： 1. 取(qu)新鮮抗凝(ning)全(quan)血(xue)（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝(ning)血(xue)均可(ke)）或者去纖維蛋白血(xue)液(ye)(ye)，用(yong)(yong)(yong)等(deng)體積的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)全(quan)血(xue)及(ji)組織(zhi)稀(xi)釋(shi)液(ye)(ye)或者PBS稀(xi)釋(shi)全(quan)血(xue)。 2. 取(qu)一(yi)支無菌離(li)心(xin)(xin)管，先(xian)加入(ru)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)A，再加入(ru)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)D，使兩(liang)者形(xing)成梯度(du)(du)界面(mian)（試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)A：試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)D的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)體積比為(wei)(wei)3：2，如稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)液(ye)(ye)樣本(ben)小于5ml，則先(xian)后(hou)(hou)加入(ru)3ml試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)A和2ml試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)D；如稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)液(ye)(ye)樣本(ben)大于5ml，試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)總量(liang)與稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)液(ye)(ye)樣本(ben)量(liang)相等(deng)），兩(liang)種試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)一(yi)定要清晰。 3. 將稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)液(ye)(ye)平鋪到(dao)分(fen)離(li)液(ye)(ye)液(ye)(ye)面(mian)上(shang)(shang)方，注意保(bao)持兩(liang)液(ye)(ye)面(mian)界面(mian)清晰。（可(ke)以(yi)使用(yong)(yong)(yong)巴氏(shi)德吸(xi)管吸(xi)取(qu)血(xue)液(ye)(ye)，然后(hou)(hou)將血(xue)液(ye)(ye)小心(xin)(xin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)平鋪于分(fen)離(li)液(ye)(ye)上(shang)(shang)，因為(wei)(wei)兩(liang)者的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)密度(du)(du)差(cha)異，將形(xing)成明顯的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)界面(mian)。如果樣品(pin)較多，加樣的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)間較長，在離(li)心(xin)(xin)之前出現(xian)(xian)(xian)紅細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)成團下沉屬正常(chang)現(xian)(xian)(xian)象） 4. 室(shi)溫，水平轉子500~800g，離(li)心(xin)(xin)20~30min（血(xue)液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)體積越(yue)大所(suo)需(xu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)離(li)心(xin)(xin)力越(yue)大，離(li)心(xin)(xin)時(shi)間越(yue)長，分(fen)離(li)條件需(xu)自行摸索，離(li)心(xin)(xin)轉速不超過1000g）。 5. 離(li)心(xin)(xin)后(hou)(hou)將出現(xian)(xian)(xian)明顯的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)： 層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)(wei)血(xue)漿(jiang)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第(di)二層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)(wei)白色(se)單(dan)核(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第(di)三層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)(wei)透(tou)明試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)D液(ye)(ye)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第(di)四層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)(wei)半透(tou)明試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)A液(ye)(ye)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)；第(di)五層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)為(wei)(wei)紅細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)（如圖示）。 6. 小心(xin)(xin)吸(xi)取(qu)第(di)二層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)D層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)和第(di)三層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)乳白色(se)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)層(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)(ceng)到(dao)另一(yi)無菌的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)15ml離(li)心(xin)(xin)管中(zhong)，加入(ru)10mL細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)洗滌液(ye)(ye)或PBS，顛倒混(hun)勻(yun)，250g，離(li)心(xin)(xin)10min。 7. 棄上(shang)(shang)清，5mL的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)清洗液(ye)(ye)或PBS重懸(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，250g，離(li)心(xin)(xin)10min。 8. 重復步(bu)(bu)驟7 9. 棄上(shang)(shang)清，細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)重懸(xuan)備用(yong)(yong)(yong)。 10. 差(cha)異貼(tie)壁(bi)法(fa)純化(hua)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)：用(yong)(yong)(yong)單(dan)核(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養基以(yi)10 6個(ge)/ml的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)密度(du)(du)重懸(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，將細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)鋪于細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)板或細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)瓶中(zhong)，置于細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行貼(tie)壁(bi)培(pei)養。 1) 2~4 h內貼(tie)壁(bi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)為(wei)(wei)單(dan)核(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)。 2) 10~24 h內貼(tie)壁(bi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)單(dan)個(ge)核(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)為(wei)(wei)內皮、內皮祖細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)、干(gan)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao) 。 3) 不貼(tie)壁(bi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)為(wei)(wei)淋巴細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)。根據不同細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)貼(tie)壁(bi)時(shi)間存在差(cha)異，以(yi)達到(dao)簡單(dan)純化(hua)單(dan)核(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。此(ci)法(fa)成本(ben)低(di)，操作簡便。如需(xu)獲得(de)高純度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)則需(xu)選用(yong)(yong)(yong)免(mian)疫磁珠分(fen)選或者是應用(yong)(yong)(yong)流式技術(shu)分(fen)選細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)。