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索萊寶(bao)彩虹180廣譜蛋白Marker（11-180KD）1怎么用
貨號 ： PR1910
規格 ： 20T (100µ1)/50T(250µ1) /100T(250µ1×2) /500T(250µ1×10)
保存 ： -20℃保存，有效期少2年。

蛋白質marker指的是(shi)做(zuo)western時,用來參照的標準蛋白,顯示蛋白大小,用以與(yu)自己蛋白進(jin)行對比,估計(ji)蛋白大小。在免疫(yi)印跡(ji)（Western blot）試驗(yan)中(zhong)，分子量Marker雖(sui)不起眼，但意義重大，是(shi)陽性(xing)對照，是(shi)大小的標準，是(shi)必須的。

蛋白marker的分類：

一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量標準

未染(ran)色(se)(se)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)分(fen)子(zi)量標(biao)準是(shi)(shi)簡(jian)單，也是(shi)(shi)準確的(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)種。由于沒有附帶(dai)(dai)(dai)染(ran)料分(fen)子(zi)或者是(shi)(shi)標(biao)記分(fen)子(zi)，所(suo)示(shi)大(da)小(xiao)正好(hao)(hao)是(shi)(shi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)原(yuan)本的(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)小(xiao)，是(shi)(shi)判斷蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)大(da)小(xiao)必(bi)須的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。現在的(de)(de)(de)(de)(de)(de)marker多(duo)數都(dou)(dou)選用(yong)預(yu)混(hun)和的(de)(de)(de)(de)(de)(de)Marker，方便不(bu)(bu)(bu)(bu)同大(da)小(xiao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)比(bi)較。預(yu)混(hun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)Marker通常有幾條(tiao)(tiao)帶(dai)(dai)(dai)加(jia)倍濃度(du)作為指示(shi)，因為混(hun)合的(de)(de)(de)(de)(de)(de)條(tiao)(tiao)帶(dai)(dai)(dai)越多(duo)，越不(bu)(bu)(bu)(bu)好(hao)(hao)記，誰知(zhi)(zhi)(zhi)道哪(na)條(tiao)(tiao)是(shi)(shi)那條(tiao)(tiao)!數到(dao)(dao)眼都(dou)(dou)花(hua)了(le)。所(suo)以當看到(dao)(dao)特別(bie)濃的(de)(de)(de)(de)(de)(de)那幾條(tiao)(tiao)標(biao)志(zhi)帶(dai)(dai)(dai)就(jiu)記得是(shi)(shi)哪(na)里(li)了(le)。不(bu)(bu)(bu)(bu)過要(yao)記得，小(xiao)帶(dai)(dai)(dai)通常都(dou)(dou)不(bu)(bu)(bu)(bu)那么容(rong)易看清楚的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。在選擇上(shang)來說，當然(ran)是(shi)(shi)選擇其中(zhong)少有一(yi)條(tiao)(tiao)條(tiao)(tiao)帶(dai)(dai)(dai)和自己的(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)大(da)小(xiao)相近的(de)(de)(de)(de)(de)(de)好(hao)(hao)，越近越好(hao)(hao)。如果你的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)不(bu)(bu)(bu)(bu)幸在兩條(tiao)(tiao)跨度(du)較大(da)Marker條(tiao)(tiao)帶(dai)(dai)(dai)之間(jian)，選別(bie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)Marker吧。預(yu)混(hun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)Marker使(shi)用(yong)上(shang)不(bu)(bu)(bu)(bu)如預(yu)染(ran)Marker(pre-stained)好(hao)(hao)用(yong)，因為電泳過程中(zhong)*看不(bu)(bu)(bu)(bu)到(dao)(dao)，要(yao)和目標(biao)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)一(yi)起等到(dao)(dao)后染(ran)色(se)(se)才“開蠱”，無法對實驗起預(yu)示(shi)參照作用(yong)。*屬于“后知(zhi)(zhi)(zhi)后覺(jue)”型的(de)(de)(de)(de)(de)(de)，當然(ran)還是(shi)(shi)比(bi)“不(bu)(bu)(bu)(bu)知(zhi)(zhi)(zhi)不(bu)(bu)(bu)(bu)覺(jue)”不(bu)(bu)(bu)(bu)做(zuo)對照的(de)(de)(de)(de)(de)(de)要(yao)好(hao)(hao)。

① 寬分子(zi)量蛋白標準

如(ru)果從實驗室總(zong)體考慮的(de)(de)(de)(de)，就(jiu)選范圍盡(jin)量寬，條帶(dai)分布比較均勻的(de)(de)(de)(de)，這樣(yang)你的(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白無論在(zai)哪個區間都容易判斷，避免正好(hao)落在(zai)一段(duan)空白區的(de)(de)(de)(de)危險(xian)。不(bu)過(guo)條帶(dai)越多，每次上(shang)樣(yang)量也就(jiu)越費。拿到Marker后，如(ru)果買(mai)的(de)(de)(de)(de)是(shi)大包裝，就(jiu)應(ying)該(gai)考慮分裝。多次反復凍融對于蛋(dan)白的(de)(de)(de)(de)危險(xian)，不(bu)用(yong)多說吧。另外要記得，寬譜的(de)(de)(de)(de)Marker不(bu)一定每條都能(neng)(neng)看到的(de)(de)(de)(de)，特(te)別(bie)是(shi)Mini?Cell。如(ru)果側重大蛋(dan)白，那小的(de)(de)(de)(de)可能(neng)(neng)就(jiu)已經跑(pao)掉了，不(bu)是(shi)質(zhi)量不(bu)好(hao)哦。

② 高分子量(liang)蛋(dan)白(bai)標(biao)準

通(tong)常在檢(jian)測大(da)分(fen)子量(liang)(liang)蛋(dan)白經常使用到高(gao)分(fen)子量(liang)(liang)蛋(dan)白標準(zhun)。

③低分子量(liang)蛋白marker標準

在一般的(de)蛋白(bai)(bai)電泳當中(zhong)，更常用的(de)是低蛋白(bai)(bai)標準分(fen)子量(liang)(liang)，除了有指示蛋白(bai)(bai)大小(xiao)的(de)作用以(yi)外(wai)，有時還(huan)可以(yi)用作粗(cu)略的(de)定量(liang)(liang)。實驗室用在一般蛋白(bai)(bai)電泳的(de)低分(fen)子量(liang)(liang)蛋白(bai)(bai)標準中(zhong)。

在低分子量蛋(dan)(dan)白(bai)標準這里還包括可(ke)特別小的(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)標準，比如(ru)30kD以下蛋(dan)(dan)白(bai)或者多(duo)肽的(de)(de)分離辨(bian)別。其(qi)中GE的(de)(de)從2kD到16kD之間有6條帶的(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)標準挺不錯。

二.預染蛋白分子量標準

預(yu)染(ran)(ran)(ran)(ran)蛋(dan)白(bai)(bai)分(fen)子(zi)量(liang)是(shi)(shi)一(yi)些純(chun)化好的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)混(hun)合物，通過與(yu)染(ran)(ran)(ran)(ran)料共價耦(ou)聯，在(zai)電(dian)泳過程中或者轉(zhuan)膜時可以(yi)(yi)(yi)直接觀察(cha)到(dao)(dao)。預(yu)染(ran)(ran)(ran)(ran)蛋(dan)白(bai)(bai)分(fen)子(zi)量(liang)的(de)出現方便了(le)我們(men)的(de)實驗，這種(zhong)蛋(dan)白(bai)(bai)分(fen)子(zi)量(liang)標(biao)(biao)準可以(yi)(yi)(yi)幫(bang)助我們(men)在(zai)電(dian)泳時、電(dian)泳后(hou)，以(yi)(yi)(yi)及轉(zhuan)膜后(hou)監測(ce)電(dian)泳情(qing)況和(he)(he)估計遷(qian)(qian)移率——比如(ru)，已知垂直電(dian)泳分(fen)辨區(qu)(qu)域(yu)大(da)約在(zai)膠的(de)2/3處(chu)，如(ru)果(guo)使(shi)用(yong)預(yu)染(ran)(ran)(ran)(ran)Marker就可以(yi)(yi)(yi)預(yu)測(ce)目標(biao)(biao)蛋(dan)白(bai)(bai)進入分(fen)辨區(qu)(qu)時停止(zhi)電(dian)泳以(yi)(yi)(yi)得到(dao)(dao)分(fen)辨效果(guo);如(ru)果(guo)觀察(cha)到(dao)(dao)Marker電(dian)泳異常也(ye)(ye)可以(yi)(yi)(yi)及時終(zhong)止(zhi)電(dian)泳;另外(wai)在(zai)Western Blot轉(zhuan)膜以(yi)(yi)(yi)后(hou)可以(yi)(yi)(yi)直接觀察(cha)蛋(dan)白(bai)(bai)轉(zhuan)膜是(shi)(shi)否*，還可以(yi)(yi)(yi)在(zai)膜上標(biao)(biao)記蛋(dan)白(bai)(bai)分(fen)子(zi)量(liang)，所以(yi)(yi)(yi)吸(xi)引了(le)許多實驗室(shi)人員購買(mai)預(yu)染(ran)(ran)(ran)(ran)蛋(dan)白(bai)(bai)標(biao)(biao)準。值得注意的(de)是(shi)(shi)預(yu)染(ran)(ran)(ran)(ran)蛋(dan)白(bai)(bai)Marker與(yu)染(ran)(ran)(ran)(ran)料共價耦(ou)聯，所以(yi)(yi)(yi)在(zai)不(bu)同的(de)緩沖條件下電(dian)泳時遷(qian)(qian)移特性可能(neng)會發生某些變化，可能(neng)導(dao)致一(yi)些偏差，所以(yi)(yi)(yi)不(bu)太適合定位蛋(dan)白(bai)(bai)——不(bu)過多數情(qing)況下Marker的(de)條帶未必能(neng)和(he)(he)我們(men)的(de)目標(biao)(biao)蛋(dan)白(bai)(bai)*一(yi)樣，我們(men)得到(dao)(dao)的(de)也(ye)(ye)不(bu)過是(shi)(shi)一(yi)種(zhong)相對Marker指示的(de)參(can)考大(da)小，后(hou)都需要Western來定性，所以(yi)(yi)(yi)如(ru)果(guo)不(bu)是(shi)(shi)要區(qu)(qu)分(fen)大(da)小相近(jin)的(de)條帶，預(yu)染(ran)(ran)(ran)(ran)Marker還是(shi)(shi)很好用(yong)的(de)，而且(qie)也(ye)(ye)可以(yi)(yi)(yi)和(he)(he)未染(ran)(ran)(ran)(ran)色(se)的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)標(biao)(biao)準一(yi)起使(shi)用(yong)。

預(yu)(yu)染(ran)蛋(dan)白標準可(ke)以(yi)分(fen)為兩(liang)種：單(dan)(dan)色(se)(se)(se)預(yu)(yu)染(ran)和(he)多(duo)色(se)(se)(se)預(yu)(yu)染(ran)，其(qi)實區(qu)別就在于(yu)幫助在實驗(yan)過程中(zhong)(zhong)辨認(ren)某個條帶的(de)(de)(de)大小——Marker條帶越多(duo)參考價值越大，可(ke)就越難辨認(ren)區(qu)分(fen)，如果用不同的(de)(de)(de)顏色(se)(se)(se)來區(qu)別就比較好辨認(ren)啦。如果沉(chen)悶的(de)(de)(de)電泳實驗(yan)中(zhong)(zhong)跑(pao)出五顏六色(se)(se)(se)的(de)(de)(de)彩(cai)虹Marker，此時心情想必會(hui)愉快一(yi)(yi)些(xie)!單(dan)(dan)色(se)(se)(se)的(de)(de)(de)Marker通常是利用其(qi)中(zhong)(zhong)某些(xie)條帶加倍(bei)濃度(du)來提示(shi)其(qi)大小的(de)(de)(de)。還有(you)一(yi)(yi)點特別要注意，由于(yu)轉膜是一(yi)(yi)個將膠里(li)的(de)(de)(de)Marker濃縮在潔白的(de)(de)(de)膜上，所以(yi)需(xu)要的(de)(de)(de)上樣量相對少一(yi)(yi)些(xie)，如果想要在電泳過程中(zhong)(zhong)看到美麗的(de)(de)(de)“彩(cai)虹”，或者單(dan)(dan)色(se)(se)(se)的(de)(de)(de)Marker往往需(xu)要比說(shuo)明書里(li)多(duo)加一(yi)(yi)些(xie)Marker的(de)(de)(de)。

三、Western的蛋白分子量標準

①生(sheng)物素標(biao)記蛋白(bai)標(biao)準

未(wei)染(ran)色(se)的(de)(de)(de)Marker在(zai)(zai)(zai)做(zuo)Western時，需要(yao)在(zai)(zai)(zai)印跡前先(xian)用(yong)麗(li)春紅或(huo)者(zhe)(zhe)是(shi)(shi)(shi)SYPRO熒光蛋白(bai)(bai)染(ran)色(se)液(ye)等不干(gan)擾(rao)Western Blot的(de)(de)(de)染(ran)色(se)方法顯(xian)(xian)色(se)，在(zai)(zai)(zai)膠(jiao)上(shang)(shang)(shang)做(zuo)標(biao)(biao)記(ji)(ji)后(hou)才能“拼(pin)”在(zai)(zai)(zai)后(hou)的(de)(de)(de)結(jie)果(guo)中，如果(guo)是(shi)(shi)(shi)預染(ran)的(de)(de)(de)Marker就(jiu)要(yao)在(zai)(zai)(zai)轉(zhuan)膜后(hou)標(biao)(biao)記(ji)(ji)膜，或(huo)者(zhe)(zhe)剪膜，后(hou)在(zai)(zai)(zai)“拼(pin)上(shang)(shang)(shang)”。要(yao)是(shi)(shi)(shi)想直接(jie)將Marker結(jie)果(guo)顯(xian)(xian)示在(zai)(zai)(zai)后(hou)結(jie)果(guo)上(shang)(shang)(shang)，不用(yong)手工(gong)作圖(tu)或(huo)者(zhe)(zhe)拼(pin)接(jie)，那就(jiu)要(yao)Western的(de)(de)(de)Marker了。比如生物(wu)素(su)標(biao)(biao)記(ji)(ji)的(de)(de)(de)蛋白(bai)(bai)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)。這種(zhong)方法主要(yao)是(shi)(shi)(shi)配(pei)合化學發光法：在(zai)(zai)(zai)蛋白(bai)(bai)分(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)上(shang)(shang)(shang)標(biao)(biao)記(ji)(ji)生物(wu)素(su)，通過帶有(you)抗(kang)(kang)生物(wu)素(su)的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)體或(huo)者(zhe)(zhe)偶聯鏈親霉素(su)的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)體，在(zai)(zai)(zai)化學發光檢測(ce)到(dao)(dao)目的(de)(de)(de)蛋白(bai)(bai)帶時就(jiu)可以(yi)同時看到(dao)(dao)相應的(de)(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)一(yi)起(qi)發光顯(xian)(xian)影了。不同于普通蛋白(bai)(bai)分(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)的(de)(de)(de)便(bian)(bian)宜、預染(ran)蛋白(bai)(bai)分(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)的(de)(de)(de)方便(bian)(bian)，這一(yi)方法的(de)(de)(de)優點是(shi)(shi)(shi)與Marker和目的(de)(de)(de)蛋白(bai)(bai)對應性(xing)好(hao)，同時在(zai)(zai)(zai)同張片上(shang)(shang)(shang)顯(xian)(xian)示，不用(yong)拼(pin)接(jie)，利于分(fen)(fen)析。缺點是(shi)(shi)(shi)如果(guo)樣品(pin)中帶有(you)生物(wu)素(su)背景，那個抗(kang)(kang)生物(wu)素(su)抗(kang)(kang)體有(you)可能影響結(jie)果(guo)，而且反應體系太(tai)過復雜也會干(gan)擾(rao)實驗(yan)結(jie)果(guo)。

②特殊標記蛋白標準

在經過修飾(shi)的(de)(de)蛋白(bai)標(biao)準(zhun)中(zhong)，除了生物(wu)素(su)標(biao)記以(yi)外，近些(xie)年(nian)由于下游蛋白(bai)操作的(de)(de)豐(feng)富化與復雜化，也出現帶(dai)有(you)(you)“尾巴”的(de)(de)蛋白(bai)標(biao)準(zhun)。比如(ru)His-Tag，如(ru)果(guo)(guo)每個Marker條帶(dai)都有(you)(you)His –tag，那二抗添(tian)加His-Taq抗體很(hen)容易將Marker條帶(dai)顯示在Western結果(guo)(guo)上。很(hen)方(fang)便(bian)，問(wen)題(ti)就(jiu)是有(you)(you)可能有(you)(you)潛在的(de)(de)干擾(rao)，比如(ru)樣品中(zhong)正好(hao)有(you)(you)類似Histag的(de)(de)結構。不過這(zhe)可以(yi)通過對照(zhao)檢測的(de)(de)。

北京索萊寶科技有限公司為生化試劑供應商，生產銷售生化試劑、生物試劑、實驗耗材、細胞培養基等產品。蛋白marker為(wei)索萊(lai)寶的常備貨產品，其(qi)產品種類(lei)齊(qi)全，是(shi)廣大科研工作者的信賴(lai)直選。

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